用放射免疫吸附测定法检测大麦黄矮病毒及雀麦花叶病毒

放射免疫吸附测定法(Radioimmunosorbent assay RISA)是一种灵敏、快速检测植物病毒的方法,它的灵敏度高于酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked immunoso-sorbent assay ELISA)。作者应用~(125)I分别标记雀麦花叶病毒(Brome Mosaic VirusBMV)和大麦黄矮病毒(Barley Yellow Dwarf Virus BYDV)免疫γ-球蛋自,进了行病毒检测,取得了较为满意的结果,这为进行蚜虫带毒率的测定和病害流行测报打下基础。     

小反刍兽疫防控知识问答(下)

<正>6.实验室诊断方法有哪些?如何确诊?血清学检测方法:抗体检测可采用竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。病原学检测方法:病毒检测可采用琼脂凝胶免疫扩散、抗原捕获酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、普通反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),对PCR产物进行核酸序列测定可进行病毒分型。疑似患病动物的病料需经国家外来动物疫病研究中心进行确诊。(地址:山东省青岛市南京路369号,联系电话0532—85621552)     

间接Dot—ELISA检查猪细小病毒抗原的研究

本研究首次成功地建立了检测PPV抗原的间接斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)标准化程序,在所确定的最适条件下,对纯化PPV抗原的最低检出量为2.5ng/dot,其敏感性为血凝试验(HA)的125倍,但稍低于银加强胶体金检测法(SECGA)。PPV阳性猪血清的特异性阻断试验及与猪瘟病毒,猪伪狂犬病病毒,猪巴氏杆菌的交叉反应试验证明,该方法对PPV抗原的检测具有特异性。以该方法检测PPV人工感染兔样本和自然感染猪样本,PPV抗原的阳性检出率分别为肾样本100％(17/17)、81.82％(9/11),肝样本100％(16/16)、56.52％(13/23)。20份随机样本的间接Dot—ELISA检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 试验证明间接Dot—ELISA对PPV感染的检测具有简单、快速、经济、敏感性高、特异性强、重复性好和便于推广应用等优点,适用于大批量抗原样本的检测,是PPV感染快速诊断和流行病学调查的有效方法。     

二花脸猪繁殖生理特性的研究 Ⅵ.母猪发情周期外周血浆促黄体素、孕酮和17β-雌二醇含量的变化

自Yallow和Berson(1960)创建胰岛素的放射免疫分析法(Radioimmunoassay—RIA)后,七十年代国外相继建立了猪生殖激素的放射免疫测定系统,并检测母猪发情周期血液中生殖激素含量的变化.但是,迄今国内对母猪发情周期生殖激素含量的测定,尚未见有报道.本试验的目的主要是用放射免疫分析法测定二花脸母猪发情周期外周血浆促黄体素(LH)、孕酮和17β-雌二醇的含量,了解其正常变化规律,为进一步对二花脸母猪性早熟和多产特性生殖激素研究奠定基础.     

大豆叶片及种子内大豆花叶病毒(SMV)的生物与免疫测定方法的比較

用生物测定(局部枯斑反应)、免疫吸附电镜(ISEM)、酶联免疫吸附试验(ELISA)三种方法对大豆叶片及种子内的SMV进行了定性定量测定。结果表明,三种方法均可用来检测叶片及种胚和子叶内的SMV,并可对其定量,结果高度吻合,相关系数达0.97以上。ELISA能测出稀释2430—7290倍病叶中的SMV,测提纯病毒的下限为70ng—20ng/ml,生物测定可测出稀释640—1280倍病叶中的SMV。种皮内含有非侵染性SMV,不能用生物方法测出,而需用免疫方法检测。     

布氏杆菌病检测技术的研究进展

综述了检测布氏杆菌病的新老方法。布氏杆菌病(Brucellosis)在全球引起巨大的经济损失,对人危害严重,基因苗即将为其防制提供保障。认为,细菌学检验和凝集试验测将淘汰;沉淀试验和补体结合试验不理想;放射免疫试验不能广泛运用;变态反应主要用于绵羊,也用于山羊的筛检,不作山羊个体的诊断依据。竞争酶联免疫吸附试验尚无诊断标准。间接酶联免疫吸附试验是一种先进、快速、可靠的新方法,但不能区别疫苗抗体与致病株抗体。PCR可检1pg的布氏杆菌DNA,应用细菌DNA检测是最可靠的方法。最近建立的荧光探针分析可在野外快速准确地诊断,可用于家畜和野生动物的检测。     

DAS-ELISA和PAS-ELISA检测GFLV的技术研究

以中国农科院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材 ,对葡萄扇叶病毒(GFLV)进行了酶联免疫吸附测定 (ELISA)的检测技术研究。从操作步骤、灵敏度、检测时期以及检测部位等对双抗体夹心酶联免疫吸附测定法 (DAS -ELISA)和A蛋白夹心酶联免疫吸附测定法 (PAS -ELISA) 2种不同的检测方法进行了比较试验。发现 ,虽然DAS -ELISA在操作上较PAS -ELISA更为简便 ,但就结果而言 ,PAS -ELISA比DAS -ELISA的OD值高 ,更易进行结果的判断 ;且在病毒含量相对较低的情况下 ,PAS -ELISA显示出了较高的灵敏度。     

鲜奶中甲醛快速检测的方法研究

通过试验对牛奶中甲醛快速检测的三种方法(间苯三酚法、AgNO3-NaOH法和酚酞-亚硫酸钠法)进行了对比试验研究.并对该法所需试剂的用量和加入顺序等影响因素进行了系统的考察和优化,最终选择并制定出快速、灵敏、高效、便捷的检测方法.在最佳方法和操作条件下,可检出的最低下限为7.2 μg/mL乳.此外,还对奶精(植脂末)干扰物对试验的干扰做了测定.结果表明,乳中添加奶精对实验检测结果没有影响.试验筛选出的检测方法具有灵敏,操作简便,掺假现象容易判断和把握,检测费用低廉等特点,便于在实际生产中推广应用.     

三抗体间接法Dot—ELISA检测牛副结核病IgG_1抗体的研究

本试验建立了检测副结核病牛血清中特异性抗体的一种新的免疫学诊断方法——三抗体间接法斑点酶联免疫吸附试验(Dot一ELISA)。并与粪便培养法,常规 ELISA,补体结合反应(CFT)及二抗体间接法 Dot一ELISA 进行了比较,试验结果表明,三抗体间接法Dot——ELISA 比常规 ELISA、CFT 和二抗体间接法 Dot——ELISA 显著敏感,而且快速、简易、经济,适用于大规模的现场检疫。     

猪瘟PPA-ELISA和Dot-ELISA检测猪瘟抗体的比较及其应用

随着论断技术的快速发展,猪瘟的抗体检测方法也不断增多.血清中和试验、免疫琼脂扩散试验、对流免疫电泳、荧光抗体技术、聚合梅链式瓜等方法都已用于猪瘟的抗体检测,这些方法特异性强、敏感性高,但操作烦琐、费时,而且有些方法的技术和设备条件要求较高,在基层难以推广使用.尤其对于模化猪场大批样品的快速检测,更需要快速和操作简便的论断检测方法.酶免疫技术中的酶联免疫吸附试验(ELISA)被认为是目前检测猪瘟抗体较好的一种方法,该法简便、快速、敏感、特异快,并且试剂盒已商品化.因此我们选用了葡萄球菌A蛋白酶联免疫吸附试验(PPA-FLISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)技术在规模化猪场进行了抗体检测的比较试验和实际应用.现将试验情况报告如下.     

食品过敏原体外检测方法研究进展

食物过敏原可使机体发生一系列过敏反应,因而采用合适的方法对其进行检测是十分必要的。文章主要介绍了食物过敏原的免疫分析检测技术—免疫印迹法、酶联免疫吸附试验、免疫传感器检测等,并简要介绍了非免疫分析检测技术。由于各种检测方法各有其优缺点,因而找到可实现准确、安全、经济、快速、高灵敏效果的检测技术将是未来的发展方向。     

大豆(阿同纳、Glycine max L Merr“Altona”)胚轴内大豆花叶病毒(SMV)分布的ELISA研究

这一试验是参加慕赫等在凡尔赛植病所主持大豆种子ELISA检定研究中的一小部份。应用酶联免疫吸附测定法(RLISA),以聚苯乙烯微皿板(96孔)、SMV抗血清和酶标抗SMV—IgG,测定接种SMV后的大豆种皮颜色黑、白和携带病毒的关系;以及胚轴带病毒的分布和机率。得知种子颜色和带毒无相关性.在微皿板中,鉴定胚轴带病毒,根据光密度值(O.D.值)的反应,健种胚轴测定限度,其O.D值至0.250为止,病种胚轴O.D值至1.150。反应是较清楚的,ELISA法是灵敏的。     

用酶联免疫吸附试验检测马传染性贫血病毒抗体

用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测马、骡传染性贫血抗体,并与琼脂扩散沉淀试验(AGID)相比较,结果ELISA检出率为84.26％—96.45％,AGID相应为25.67％—47.87％,前者检测效果优于后者。     

河豚毒素两种定量检测方法的比较研究

应用小鼠生物试验和间接竞争抑制酶联免疫吸附试验(ELISA)同步检测17份河豚鱼肝组织和20份河豚鱼肌肉组织中的河豚毒素含量，并对2种方法进行比较。结果表明：ELISA法与小鼠生物试验测得的结果相符合。ELISA法由于其测定程序简便易行，速度快，灵敏度高，在河豚毒素的定量检测以及在预防河豚鱼中毒方面具有广泛的应用前景。     

大口径毛细管气相色谱分离和测定银杏叶萜内酯的方法建立

为建立灵敏、简便测定银杏叶萜内酯气相色谱法,试验采用大口径毛细管气相色谱法,对银杏叶中的银杏内酯A(GA)、银杏内酯B(GB)、银杏内酯C(GC)和白果内酯(BB)4种银杏萜内酯进行了分离与测定.用20%的甲醇水溶液提取银杏叶中的银杏内酯A,B,C和白果内酯,乙酸乙酯(EOA)/四氢呋喃(THF)一步纯化,衍生后进行GC-FID检测.样品在16 min内完全分离,GA、GB、GC和BB的相对标准偏差均小于0.8%,平均回收率为94.45%～98.98%.本方法测定银杏叶萜内酯简便、灵敏、准确、重现性好.     

用Envirologix Cry1Ab/Cry1Ac试剂盒快速测定转基因水稻Bt杀虫蛋白含量的研究

 用 Envirologix Cry1Ab/Cry1Ac平板试剂盒检测了两个转 cry1Ab的水稻品系克螟稻 1号 ( KMD1)、克螟稻 2号 ( KMD2 ) ,及未转化的对照品种秀水 11米粒中的 Bt杀虫蛋白含量。结果表明 ,该试剂盒标样制作的标准曲线相关系数为 0 .985～ 0 .998,在 0 .0 5或 0 .0 1水平上显著。同批次试剂盒的不同试验及不同批次试剂盒的测定值均差异不显著。最低检测剂量达 0 .5 ng/g,每次测试时间比 Western dot blotting方法缩短约 2 h。试验表明 ,该试剂盒是定量检测转基因水稻 Bt毒蛋白表达的一种理想产品     

应用酶联SPA免疫吸附试验(ELISA)检测奶山羊布氏杆菌病

本文应用酶联 SPA 免疫吸附试验(ELISA)对710份奶山羊血清进行了布氏杆菌病的检测,并与 SAT 和 CFT 相对应。检测结果:ELISA 的检出率(62％,441/710)高于 SAT(60.56％,430/710,包括可疑反应)和 CFT(2.16％);漏检率(5.5％,39/710)低于 SAT(7.0％,50/710);经抗原处理的 ELISA 和 SAT 均呈阳性或阴性反应血清的 O.D 值,与原血清的 O.D 值相对比,前者差异显著(P<0.05),后者差异不显著(P>0.05)。说明 ELISA 是检测奶山羊布氏杆菌病的一种简单、特异、灵敏和快速的血清学方法之一,可用于本病的诊断检疫。布氏杆菌病是一种人畜共患的慢性传染病,侵害多种家畜和动物,引起流产和不育等病症,影响畜牧业的发展,危害人民身体健康。目前常用的血清学试验方法有多种,各有其优缺点,但这些方法存在着敏感性低或因操作复杂而不易推广。因此,寻求简便、特异和敏感的检测法已为众望所归。用 ELISA 检测人、牛和猪的布氏杆菌病已有报道。现将我们应用酶联 SPA 免疫吸附试验检测奶山羊布氏杆菌病报道如下。     

牦牛促黄体素放射受体分析方法的建立

以大鼠睾丸组织匀浆作受体,~(125)I—hCG作放射配体,hCG作参考标准,且在标准曲线各测定管中加入与待测血浆等量的无LH牦牛血浆,籍以排除血浆干扰因子的影响,成功地建立了LH/hCG的放射受体分析方法。试验表明,该法是一种测定牦牛LH的灵敏可靠的方法。     

土壤中铅的导数极谱测定

本文对土壤中铅的测定进行了探讨,试验证明在“HCl-Vc-KI-(CH_3CH_2)_4NI”底液中,铅有一灵敏的导数波,峰电位为-0.40V(SCE)。阳极导数峰高与铅浓度在2×10~(-7)M—7×10~(-6)M之间呈线性关系。本文同时试验了多种共存离子对铅波的影响,表明该方法适用于土壤中铅的测定,并具有快速、简便等优点。     

马铃薯X病毒的分子鉴定与检测技术

为建立快速、灵敏、特异的马铃薯X病毒(PVX)分子鉴定与检测技术,利用反转录—聚合酶链式反应(RT—PCR)技术扩增得到了PVXcp基因,并进行序列测定,同时采用RT—PCR方法和核酸斑点杂交(NASH)方法对PVX进行了分子检测。结果表明:利用PVXcp基因序列及蛋白氨基酸序列分析可准确鉴定PVX,并可分析各分离物间的分子差异。利用PVX特异性引物和DIG标记的PVXcp基因采用RT-PCR技术和NASH技术可对PVX进行准确的检测,其特异性及灵敏度均优于传统方法。