应用猪瘟荧光抗体对猪瘟自然病例的诊断

在用自制的猪瘟荧光抗体检查猪瘟强毒人工感染猪取得圆满结果的基础上,进行了检查猪瘟自然病例的研究,并以部分自然病例的病料进行猪瘟兔体交互免疫试验,证实该荧光抗体为一种特异性强、检出率高的制品。另外确定,猪只在接种兔化猪瘟弱毒疫苗12天后,其病料即不再对猪瘟荧光抗体诊断产生干扰现象。     

荧光标记衣原体单克隆抗体的快速诊断

本文采用引进的沙眼衣原体单克隆抗体直接免疫荧光技术对门诊拟诊为非淋菌性尿道炎或官颈炎患者143例作了检测,结果显示:在143例中沙眼衣原体阳性者57例(39.9％),其中男122例阳性52例(42.6％):     

猪瘟的快速诊断——用反向间接血凝试验检测猪瘟抗原

以猪瘟免疫血清提取1gG,致敏用丙酮醛、甲醛固定的绵羊红血球,作反向间接血凝试验,可以检出猪瘟病料(脾及淋巴结)中的抗原。以其他IgG,如出败血清IgG、正常猪IgG致敏的血球作对照试验,非特异性凝集极小。以健康猪或其他高热病如出败、猪丹毒、弓形体病猪脾脏作阴性样品对照,血凝滴度也很低或阴性。以猪瘟高免血清作血凝抑制试验,有明显抑制作用。说明这种试验,对猪瘟抗原是有特异性的,可以作为猪瘟诊断用。 在40头血毒猪中,其脾脏有31头(77.5％)是阳性,淋巴结有30头(75％)是阳性。在此40头猪中,仅有3头在脾或淋巴结均为阴性,未检出抗原,因此,实际有37头(92.5％)的脾脏或淋巴结或两者都检出猪瘟抗原。但是,在病猪血液中不能检出抗原(凝集滴度过低),在脾脏浸出液中,如含有血色素过多,也不易检出。在新鲜采取的脾脏或淋巴结中,非特异性凝集不易排除,影响检出结果。脾脏或淋巴结1克剪碎,加蒸馏水或生理盐水5毫升,在8—10℃静置1—2天后,即可排除大部分非特异性凝集。堪称猪瘟诊断中最简便的方法之一,具有血清学的一般特异性。但尚缺乏天然病例的试验。     

猪瘟伪狂犬病重组病毒SA215(A)疫苗株的构建(初报)

采用磷酸钙转染系统 ,将伪狂犬病三基因缺失疫苗SA2 15株DNA与PP6 3LacZE2DNA共转染Vero细胞 ,获得SA2 15 (A) 1、SA2 15 (A) 2和SA2 15 (A) 3等 12个重组病毒株。以光生物素标记的HCVE2基因为探针进行初步鉴定后 ,挑选SA2 15 (A) 1株作BamHⅠ酶切和southern转印杂交鉴定 ,结果表明构建是成功的 ,将其命名为SA2 15(A)。直接荧光抗体检测、SDS -PAGE电泳和western免疫印迹检测结果表明HCVE2基因在重组病毒内获得表达 ,产生大小约 5 1kd的蛋白。对SA2 15 (A)株进行部分生物学特性研究 ,培养特性观察试验表明该毒株可适应Vero、BHK2 1和鸡胚成纤维细胞等多种细胞 ,但对不同细胞系表现有一定的差异。     

用荧光染色法研究山羊瘤胃原虫对细菌吞噬速率的初报

 【目的】采用荧光染色标记细菌（fluorescence labeled bacteria,FLB）技术,研究山羊瘤胃中原虫对细菌的吞噬速率。【方法】利用4只装有永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊,采集瘤胃液以获取瘤胃原虫和细菌。试验设置清洗原虫祛除瘤胃自由细菌的荧光全标组（WFLB）及未清洗原虫保留瘤胃自由细菌荧光标记组（FLB）。【结果】WFLB组和FLB组的吞噬速率分别为398.4 cells/(cell•h)和230.4 cells/(cell•h),换算为细菌N为：2.15 pg N/(cell•h)/和1.24 pg N/(cell•h)。【结论】每天每头羊由原虫在瘤胃内循环中带出的细菌N损失在WFLB组和FLB组分别估计为103.2 mg N/(d•头)、59.5 mg N/(d•头),或者细菌蛋白损失为0.645 g/(d•头)和0.372 g/(d•头)。结果同时表明,荧光染色标记技术可以应用于瘤胃原虫对细菌吞噬速率的研究。     

应用SPA协同凝集快速诊断猪瘟的研究

本试验用抗猪瘟血清标记金黄色葡萄球菌№1800株制成 SPA-IgG 诊断液,采用玻片协同凝集或微量协同凝集试验用于猪瘟诊断。SPA-IgG 液仅与猪瘟病猪脾淋悬液呈阳性反应,而与健猪及其它非猪瘟猪组织液均呈阴性反应。对55份疑似病猪用 SPA 法和荧光抗体法对比,阳性符合率达95%,阴性符合率为91. 6%。该方法设备简单、方法简便,便于基层应用。     

利用绿色荧光蛋白(GFP)标记香蕉枯萎病菌及其稳定性检测

利用PEG-CaCl2介导的原生质体法将携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)的质粒pSC001转化进香蕉枯萎病菌中,荧光显微镜观察结果显示,转化子在蓝光光源的激发下,菌丝及孢子均能产生稳定的绿色荧光,表明GFP基因已成功转化至香蕉枯萎病菌并获得表达.将GFP标记的病原菌进行连续继代培养和接种巴西蕉,结果表明:GFP的导入对病原菌的遗传稳定性和致病性没有显著影响.     

应用间接血凝试验(IHA)诊断猪蛔虫病

以猪蛔虫抗原致敏绵羊红细胞制备检测猪蛔虫特异性抗体的间接血凝诊断试剂,与猪蛔虫抗体发生特异性凝集反应.结果表明,用间接血凝诊断试剂对3 000份猪血清进行现场检测,阳性率为30.00%;而琼脂扩散试验(AGP)的阳性率为13.00%,表明,间接血凝试验(IHA)比GAP敏感,间接血凝诊断试剂可用于猪蛔虫病的快速诊断.     

鮰爱德华氏菌的红色荧光蛋白标记及其应用

为研究鮰爱德华氏菌与宿主的相互作用关系,本研究构建带有红色荧光蛋白基因的pM DmC herry表达载体,通过电击转化法将载体成功导入鮰爱德华氏菌zbl141菌株中,获得了红色荧光蛋白标记的鮰爱德华氏菌菌株。在倒置荧光显微镜下观察,重组鮰爱德华氏菌显示特异性红色荧光。稳定性检测结果表明,标记菌株传至28代,重组质粒稳定率仍为100%。用标记菌株感染斑马鱼仔鱼后,能在激光共聚焦显微镜下实时观察到细菌在鱼体内的分布情况;标记菌株体外感染小鼠巨噬细胞后,也能观察到病原菌与巨噬细胞的相互作用情况。说明标记菌株具有良好的特异性和可视性,为鮰爱德华氏菌对宿主的致病性研究提供了一种良好的生物材料。     

绿色荧光蛋白基因对枯草芽胞杆菌的标记

以质粒pAD123为模板扩增出绿色荧光蛋白基因（gfp）序列，扩增产物连接到经酶切的枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）整合载体pAXc，构建重组质粒pAXc-gfp. pAXc-gfp线性化后转入野生型枯草芽胞杆菌B411，gfp编码序列通过同源泉重组整合列到B.subtilis B411染色体上，获得在无抗性选择压力下稳定表达绿色荧光蛋白的重组子B412.     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的研究：Ⅲ.应用单克隆抗体快速诊断猪瘟

本文介绍了应用酶标单抗(HRP-McAb)的涂片法、双抗体夹心 ELISA、斑点 ELISA 和微量细胞培养联合免疫酶测定法检测猪瘟病毒抗原,结果4种方法检出率基本一致,具有快速、特异、敏感、准确、简便、经济和判断客观的诊断价值,可作为疫区流行病检查和检测猪瘟病毒抗原应用。     

应用间接血球凝集(IHA)试验诊断猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)病

本文用猪囊尾蚴的全囊虫、囊液、头节的粗提抗原(CW_1,CF_1,CS_1),和其超速离心上清液抗原(CW_2,CF_2,CS_2)以及其经葡聚糖凝胶柱(Sephadex G—150)层析提纯的抗原(CW_3,CF_3,CS_3)分别对人工感染的猪囊尾蚴、细颈囊尾蚴猪和不感染的对照组猪,以间接血球凝集试验(IHA)进行定期的检测。结果表明,CW_2,CW_3,CF_2和 CS_2抗原的敏感性较高。进而用此4种抗原对自然感染的猪囊尾蚴猪进行了扩大诊断试验。试验结果:CF_2的敏感性高于其它抗原,但特异性较差,其检出率为76.87%,假阳性率为16.07%;而 CW_3抗原的敏感性虽较 CF_2抗原差,但特并性较强,检出率为64.88%,假阳性率为2.5%。两种抗原的重复性均良好。     

石刁柏离体腋芽快速无性繁殖的研究(初报)

前言石刁柏(Asparagus officimalis L)是百合科天门冬属,雌雄异株多年生草本植物,也是一种营养丰富,换汇率很高的蔬菜作物。石刁柏通过有性杂交制种,种性低劣,产量逐年下降。为保持优良种性,生产上通常采用分株的方法进行无性繁殖,但繁殖系数极     

奶牛隐性乳房炎快速诊断技术(BMT)的应用

随着奶牛业的发展壮大,乳房炎、蹄病和奶牛寄生虫病已成为严重危害奶牛业健康发展的常发疾病了。为有效降低奶牛乳房炎的发生,提高奶牛场的经济效益,降低奶牛的淘汰率,使奶牛业早日走上一条良好的发展之路,积极进行了奶牛隐性乳房炎快速诊断技术(BMT)的应用与推广工作。BMT的优点是直接测定乳汁中体细胞数,方法简易,效果准确,可在牛旁进行。通过5个月的应用,阳性百分比由8月的4.9%下降到1.9%,强阳性百分比由8月的5.9%下降到1.3%;通过2008、2009年同期(10月)比较,奶牛乳房炎的发病率由同期6.2%下降到4.3%,降低了1.9个百分点,这些数据证实了该项技术在防治奶牛乳房炎上效果显著。     

猪瘟荧光抗体的制造和在人工感染猪瘟病例的应用

制成了高质量的猪瘟荧光抗体。用该荧光抗体的128倍稀释液,对猪瘟强毒人工感染猪扁桃体冰冻切片进行染色,隐窝上皮细胞胞浆内可出现特异性荧光。用32倍稀释液对猪瘟强毒人工感染猪的扁桃体、脾脏、淋巴结、腮腺、胰腺、肝脏、肾脏冰冻切片染色,可出现明亮的特异性荧光细胞,此种特异性荧光可被猪瘟阳性血清抑制,但不能被阴性血清抑制。该荧光抗体不能使健康猪、冻死猪和传染性胃肠炎病猪的同种组织冰冻切片出现特异性荧光细胞。     

用荧光染色法对柱状田头菇(Agrocybe aegerita)子实体担子和担孢子的观察

运用荧光染色方法对４株不同地域来源的柱状田头菇子实体的担子和担孢子进行了观察。结果显示,来自欧洲希腊的Ａｇ８、中国四川省的Ａｇ１０和台湾省的ＡａＴ菌株的有性繁殖结构特征是４孢双核;而来自贵州省的Ａｇ９菌株的有性繁殖结构特征是双孢４核。这种４核现象首次在蕈菌中观察到。     

仲胺量测定新方法及其在肿瘤诊断中的应用(初报)

一、乙醇-二硫代氨基甲酸铜盐分光光度法测定仲胺 仲胺类化合物广泛存在于生物体内,测定仲胺的常用经典方法是醋酸-二硫代氨幕甲酸铜盐法:     

间接血凝(IHA)诊断綿羊日本血吸虫病的试验

IHA诊断绵羊日本血吸虫病国内尚未见报告。本试验,通过IHA对疫区粪孵阳性绵羊血清和非疫区阴性绵羊血清进行滴度检测对比,观察和评定了IHA血清抗体滴度的判定界线。同时,对不同疫区绵羊的IHA滴度进行了血清流行病学的分析,分别不同疫区的绵羊群,统     

利用间接荧光抗体技术对微小隐孢子虫Cp16蛋白进行抗原定位

Cp16基因是从核糖体展示文库中筛选的微小隐孢子黏附相关基因,为了确定Cp16蛋白是否是微小隐孢子虫卵囊或子孢子表面抗原,构建了Pet-28 a-Cp16原核表达载体,将其转化至BL21大肠杆菌中进行诱导表达,经纯化获得重组蛋白Cp16。将纯化的重组蛋白免疫BAILB/c小鼠,ELISA方法测定IgG抗体滴度。利用间接荧光抗体技术进行抗原定位的初步研究。结果表明:隐孢子虫卵囊表面及子孢子表面富含Cp16蛋白。