光照时间对兴国灰鹅产蛋和PRL、FSHβ、LH mRNA表达的影响

为研究光照时间对兴国灰鹅产蛋量及产蛋性状相关基因在下丘脑-垂体-性腺轴表达水平的影响,对兴国灰鹅分别进行长光照处理(试验组)和自然光照处理(对照组)。结果发现,整个试验阶段,对照组持续产蛋,产蛋率维持在10%以上,处理组在接受递增式长光照至40 d左右时,产蛋率下降到8%左右,并于试验第47天停产。基因表达水平方面,相对于对照组产蛋期鹅,试验组鹅下丘脑中催乳素(PRL)的mRNA表达水平与输卵管和卵巢中促卵泡素(FSHβ)的表达水平均显著升高,而卵巢中黄体生成素(LH)的mRNA表达水平显著降低。这些结果表明长光照可通过影响PRL的mRNA表达,从而导致FSHβ和LH表达比例失调,最终影响FSHβ和LH的协同作用,从而抑制兴国灰鹅的产蛋活动。     

不同光照条件对兴国灰鹅FSHβ、PRL和VIP基因mRNA表达水平的影响

为研究不同光照条件对下丘脑-垂体-性腺繁殖调控轴的影响,对兴国灰鹅分别进行不同光照时间和强度的处理。结果发现,不同光照时间条件下,长光照试验组个体输卵管中FSHβ基因的表达量极显著低于对照组中的表达量(P0.01);在下丘脑中,试验组个体VIP基因的表达量显著高于对照组(P0.05);而PRL基因在两组相同组织中表达差异均不显著(P0.05)。在30和80勒克斯光照强度条件下,试验组和对照组在所检测的组织中FSHβ、PRL和VIP基因表达规律一致,表达水平差异均不显著(P0.05)。由此可见,光照时间对兴国灰鹅繁殖调控轴中的FSHβ、PRL和VIP基因表达的影响较大,为兴国灰鹅反季节调控繁殖提供理论依据,光照强度对兴国灰鹅繁殖调控的作用还需进一步的研究。     

反季节调控对鹅PRL和PRLR基因表达的影响

为研究反季节生产期鹅催乳素(PRL)和催乳素受体(PRLR)基因表达情况,选取经反季节调控处于产蛋期(试验组)和未调控处于正常休产期(对照组)母鹅,采集垂体、下丘脑和卵巢组织,应用实时荧光定量PCR技术研究PRL和PRLR基因mRNA在下丘脑-垂体-性腺轴中的表达水平变化。结果表明:PRL和PRLR基因在垂体、下丘脑和卵巢组织均有表达,在垂体中表达量最高;PRL基因在试验组鹅垂体中表达量极显著高于对照组,而PRLR基因在试验组鹅垂体中表达量极显著低于对照组;PRL基因在试验组鹅下丘脑中表达量显著高于对照组,而PRLR基因在两组鹅下丘脑中表达元显著差异;PRL基因在两组鹅卵巢中表达量无显著差异,而PRLR基因在试验组鹅卵巢组织中表达量极显著高于对照组。反季节调控可增加鹅垂体和下丘脑中PRL基因表达,抑制垂体PRLR基因表达,增加卵巢中PRLR基因表达。     

笼养模式对黑羽番鸭PRL和PRLR基因表达的影响

为探明不同饲养方式对产蛋期黑羽番鸭催乳素(PRL)和催乳素受体(PRLR)基因表达的影响,应用实时荧光定量PCR技术,对产蛋期(30周龄)笼饲养(试验组)和地面饲养(对照组)的黑羽番鸭垂体和子宫组织进行检测,研究PRL与PRLR基因表达量的变化。结果表明:PRL和PRLR基因在垂体和子宫组织均有表达;试验组黑羽番鸭垂体中PRL基因表达量显著高于对照组,而PRLR基因表达量显著低于对照组;PRL基因在2组黑羽番鸭子宫中表达量无显著差异,而PRLR基因在试验组黑羽番鸭子宫组织中表达量极显著低于对照组。应用笼养技术可增加黑羽番鸭垂体中PRL基因的表达,抑制垂体和卵巢中PRLR基因的表达。     

光照时间和环境温度对种鹅繁殖系统及相关激素mRNA表达、分泌的影响

【目的】研究光照时间和环境温度对扬州鹅种鹅繁殖系统及相关激素mRNA表达、分泌的影响,探明光照时间和环境温度对种鹅繁殖机能的作用特点。【方法】取接受自然光照且日照时长逐渐缩短的200日龄种鹅作为试验对象,试验初期日照时长约为9.7 h·d^-1、气温5℃左右。采用2×3完全随机试验设计,设2个温度处理（0-5℃、25-30℃）和3个光照时间处理（8、12、16 h）,其中光照时间处理在正常白昼基础上进行增减,将120只成年母鹅随机分至6个处理组,每个处理组20只,全封闭饲养,自由采食、饮水。试验第30天,从每个处理随机取5只鹅翅静脉采血3 mL,用于测定相关激素指标,同时从每个处理中随机取3只鹅,屠宰,取下丘脑和垂体速冻、超低温保存,用于测定相关基因表达量;分离生殖系统,进行重量或长度测定,同时取输卵管膨大部制作组织切片。【结果】①16 h光照处理组种鹅血清促黄体素（LH）浓度显著高于8 h和12 h光照处理组（P＜0.05）,16 h光照处理组种鹅血清催乳素（PRL）浓度显著高于12 h光照处理组（P＜0.05）。高温（25-30℃）处理组种鹅血清PRL浓度显著高于低温（0-5℃）组（P＜0.05）。光照时间和环境温度处理对种鹅血清LH、PRL和雌二醇（E₂）浓度的影响存在显著互作效应（P＜0.05）。②12 h光照处理组种鹅卵巢指数、卵泡指数均显著大于16 h光照处理组（P＜0.05）,8 h光照处理组种鹅卵泡数显著大于16 h光照处理组（P＜0.05）,12 h光照处理组种鹅输卵管长显著大于8 h、16 h光照处理组（P＜0.05）;环境温度对种鹅卵巢指数、卵泡指数、卵泡数、输卵管指数和输卵管长未产生显著影响（P＞0.05）。③8、12 h光照处理组和高温处理组种鹅的输卵管膨大部颜色鲜红,假复层柱状上皮和固有层均较厚,皱褶明显,分泌腺丰富;16 h光照处理组、低温处理组种鹅的输卵管膨大部颜色暗红,假复层柱状上皮和固有层较薄,皱褶模糊,分泌腺较少。④16 h光照处理组种鹅垂体PRL基因表达量极显著高于8、12 h光照处理组（P＜0.01）。⑤光照时间与环境温度对种鹅生殖系统、激素基因表达影响的互作效应不显著（P＞0.05）。【结论】16 h长光照抑制了卵巢、卵泡的生长发育,12 h光照增长了输卵管的长度;16 h长光照提高了PRL基因的表达丰度。综合各方面的情况,长光照抑制了种鹅的繁殖机能,扬州鹅种鹅的最适光照时间为12 h。高温提高了种鹅血清LH、PRL浓度,低温影响了输卵管组织结构,故种鹅饲养期间要适当控温,尽量避免种鹅暴露于极端温度环境。     

光照对马岗鹅卵泡发育及相关激素mRNA水平的影响

研究了光照对马岗鹅卵泡发育及相关激素基因表达的影响,试验期对照组接受短光照(11 h光:13 h暗),处理组在接受7 d短光照后接受长光照(16 h光:8 h暗).结果表明在整个试验期,对照组产蛋率维持10%以上,处理组则在接受长光照约15 d后产蛋率快速下降并于试验第55 d停产.在处理组接受长光照17 d(试验第25 d)后,与对照组相比,其下丘脑血管活性肠肽(VIP)和垂体催乳素(PRL)的基因表达稍提高(P＞0.05),血浆PRL水平明显高于对照组(P＜0.05),而促黄体素(LH)水平和卵巢大黄卵泡(LYF)数、小黄卵泡(SYF)数则无差异,仅大白卵泡(LWF)数显著低于后者(P＜0.01);在处理组接受长光照45 d后(试验第53 d),其下丘脑VIP和垂体PRL的基因表达显著提高(P＜0.01),且血浆PRL质量浓度显著高于对照组(P＜0.01),LH水平则明显低于对照组(P＜0.05),卵巢上无任何卵泡,对照组的LYF、SYF和LWF数与试验第25 d时相似.整个试验期,长光照对下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和垂体LH β的基因表达均无明显影响.表明长光照能促进下丘脑VIP和垂体PRL的基因表达,提高血浆PRL水平和抑制卵泡发育.     

实时荧光定量RT-PCR检测狮头鹅繁殖周期中PRL mRNA的表达

以就巢性极强的狮头鹅为研究对象,选取不同繁殖阶段的狮头母鹅各6羽,采用荧光定量RT-PCR方法测定下丘脑-垂体-性腺轴中PRL mRNA的表达水平.结果表明:PRL mRNA在狮头鹅下丘脑、垂体和卵巢中均有表达,垂体PRL mRNA的表达量最高(P＜0.01),下丘脑最低;在整个生殖周期内,就巢期PRL mRNA的表达水平高于非就巢期,休产期最低.由此可见,下丘脑-垂体-性腺轴中PRL mRNA的表达水平与狮头鹅的繁殖周期密切相关,PRL是就巢行为维持和发展的关键激素.     

泌乳期小鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中PrRP 和PrRP-R mRNA的表达规律

【目的】探讨泌乳期小鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中催乳素释放肽(PrRP)及其受体(PrRP-R)mRNA的表达规律,为PrRP生理功能的确定奠定基础。【方法】选用泌乳6,12,18d小鼠,取下丘脑、垂体、卵巢组织,利用半定量PCR方法测定下丘脑、垂体、卵巢中PrRP、PrRP-R mRNA的表达水平;同时利用放射免疫法(RIA)测定血浆的孕酮(P)、雌二醇(E2)和催乳素(PRL)水平,通过双侧相关分析,探究血浆P、E2、PRL水平与下丘脑-垂体-卵巢轴PrRP、PrRP-R mRNA表达量的相关关系。【结果】泌乳期小鼠下丘脑、垂体、卵巢中均有PrRP、PrRP-R mRNA的表达,其中卵巢的PrRP mRNA表达水平最高。泌乳期小鼠血浆E2水平与卵巢PrRP mRNA的表达水平呈显著负相关,而卵巢的PrRP mRNA表达水平与垂体的PrRP-R mRNA表达水平呈显著正相关。【结论】泌乳期小鼠卵巢PrRP可能通过垂体间接抑制E2的分泌,进而调节相关泌乳活动。     

VIP基因在狮头鹅繁殖周期下丘脑-垂体-性腺轴中的表达变化

为了探索狮头鹅繁殖周期下丘脑-垂体-性腺轴中VIP mRNA的表达规律,选取产蛋期、就巢期、休产期狮头鹅母鹅各6只,采用荧光定量PCR方法分别测定了各时期下丘脑、垂体及卵巢VIP mRNA的表达水平。结果表明,狮头鹅就巢期血清催乳素(PRL)质量浓度为30ng/mL,明显高于产蛋期和休产期(P<0.01),下丘脑就巢期VIP mRNA的表达量较其他繁殖周期高(P<0.05),而垂体产蛋期VIP mRNA的表达量最高(P<0.01)。提示狮头鹅下丘脑-垂体-性腺轴中VIP mRNA的表达水平与PRL分泌密切相关,PRL是狮头鹅就巢行为维持和发展的关键激素。     

瘦素及其受体在真孕和假孕母犬下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达

【目的】研究胚胎着床期瘦素(leptin)及其受体(OB-R)在真孕和假孕母犬下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异.【方法】应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学的方法检测胚胎着床期真孕和假孕母犬下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫组织中瘦素及其受体的表达.【结果】瘦素在真孕和假孕母犬的下丘脑、垂体、卵巢、子宫中均有表达,在输卵管中表达阴性,瘦素受体在真孕和假孕母犬各组织中均有表达;瘦素及其受体在真孕母犬下丘脑、卵巢和子宫组织中的表达量显著高于假孕母犬(P0.05),瘦素受体在真孕母犬垂体和输卵管中的表达量显著高于假孕母犬(P0.05).真假孕母犬垂体中瘦素水平差异不显著(P0.05).【结论】瘦素及其受体对于犬的胚胎着床具有一定调节作用.     

性成熟前籽鹅PRL及PRLR mRNA表达量的动态变化

选取1日龄、1、2、3、4和5月龄籽鹅各6只,取其垂体和卵巢,利用real-time PCR技术对垂体组织中PRL和卵巢中的PRLR进行实时定量,来探讨PRL及其受体mRNA表达量的变化规律,进而了解卵巢对PRL的反应能力。结果表明籽鹅垂体组织在出雏当日就具有表达PRL的能力,并且表达量较高,从1～3月龄PRL的表达量持续下降,4月龄时开始上调,1～5月龄相对表达量均显著低于1日龄(P0.05),1、5月龄与2～4月龄差异显著(P0.05)。卵巢中PRLR表达量与垂体中PRL表达趋势相近,卵巢PRLR的表达量在1月龄时最高,与其它各月龄之间差异显著(P0.05)。由此可以看出在性成熟之前,PRL及其受体基因的表达均处于较低水平,卵巢对PRL的反应能力较弱,PRL在卵巢发育过程中所起的作用是不明显的。     

CYP11A1、CYP17A1、CYP19A1基因在小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴的表达

为揭示类固醇生成相关基因CYP11A1、CYP17A1、CYP19A1在绵羊多羔繁殖中的作用,以不同繁殖力小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术检测CYP11A1、CYP17A1、CYP19A1基因在小尾寒羊大脑、小脑、下丘脑、垂体、子宫、卵巢、输卵管中的表达。结果表明:CYP11A1基因主要在小尾寒羊卵巢、输卵管、子宫内表达;CYP11A1基因在单羔小尾寒羊卵巢的表达极显著低于多羔群体(P0.01),在子宫的表达量极显著高于多羔群体(P0.01);CYP17A1基因主要在小尾寒羊卵巢、输卵管、下丘脑表达;CYP17A1基因在多羔小尾寒羊群体下丘脑、子宫的表达量显著低于单羔群体(P0.05)。CYP19A1基因主要在小尾寒羊卵巢、下丘脑表达。本究结果提示CYP11A1、CYP17A1基因可能参与小尾寒羊多羔性状的调控。     

湖羊BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数关系的研究

 【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36 h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组（P＜0.01）,且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组（P＜0.01）,而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异（P＞0.05）;相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r = 0.741,P ＜0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。     

MITF基因表达与绵羊季节性发情及产羔数关系初探

为初步探究MITF基因表达和绵羊季节性发情及产羔数的关系,本试验以季节性发情的苏尼特羊(Sunite sheep,SNT)和常年发情的小尾寒羊(Small Tail Han sheep,STH)为研究对象,利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析SNT在不同光照条件下(短光照、长光照)及STH不同繁殖时期(卵泡期、黄体期)的下丘脑等组织中MITF基因的表达差异及该基因在STH单、多羔母羊卵泡期繁殖器官(卵巢、子宫体、输卵管)中的表达差异。结果表明:1)MITF基因在2个绵羊品种的不同组织中广泛表达且繁殖器官(卵巢、子宫体和输卵管)中该基因表达量较高;2)在长光照条件下SNT垂体中MITF表达量极显著高于短光照条件下表达量(P0.01);3)STH卵巢中MITF表达量在卵泡期极显著高于黄体期(P0.01),而子宫体、输卵管中该基因表达量在黄体期显著(P0.05)或极显著(P0.01)高于卵泡期;4)单羔组STH子宫体、输卵管中MITF表达水平极显著(P0.01)或显著(P0.05)高于多羔组。综上,MITF基因表达与绵羊季节性发情及产羔数存在一定关联,需要进一步进行生物学功能验证。     

外源性神经激肽B对雌性大鼠生殖轴GnRH和Kisspeptin表达的影响

为研究外源性神经激肽B(NKB)对雌性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)GnRH和Kisspeptin表达的影响,将40只60 d的Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠随机分为试验组和对照组,侧脑室分别注射NKB溶液和等体积生理盐水,20 min后处死采集样品.采用免疫荧...     

Lrh-1基因在湖羊HPG轴中表达量变化研究

[目的]揭示湖羊发情周期不同阶段下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴组织中Lrh-1基因的表达变化规律。[方法]建立了湖羊Lrh-1基因的实时荧光定量(qRT-PCR)检测体系,测定其在发情前期、发情期、发情后期和间情期湖羊的下丘脑、垂体和卵巢间质组织中的表达量,分析Lrh-1基因在湖羊HPG轴的表达随发情周期变化的规律。[结果]建立的湖羊组织Lrh-1 mRNA检测体系扩增效率为92.44%,扩增效果良好。在湖羊的下丘脑、垂体和卵巢间质组织中均检测到Lrh-1基因mRNA的表达。其中,在发情后期下丘脑和卵巢间质组织中Lrh-1 mRNA相对表达量显著高于其他阶段的表达量(P0.05),垂体组织中Lrh-1 mRNA相对表达量在发情周期不同阶段间差异不显著(P0.05)。[结论]Lrh-1基因参与发情周期湖羊下丘脑、垂体和卵巢功能的行使,并且该基因的表达量变化可能与湖羊发情周期有关。     

Kisspeptin在青春期雌性皖西白鹅下丘脑和垂体的定位

运用免疫组化PV-9000二步法和DAB显色技术,研究Kisspeptin在青春期雌性皖西白鹅下丘脑和垂体的定位.免疫组化DAB显色结果表明,在下丘脑后内侧核、室周弓状核和室旁核均可观察到大量Kisspeptin免疫反应阳性神经元,下丘脑室周区及外侧区也可观察到不同程度的Kisspeptin阳性细胞;腺垂体中亦可见少量免疫阳性产物,但神经垂体无阳性细胞.Kisspeptin在雌性青春期皖西白鹅下丘脑和垂体中均有分布,初步揭示Kisspeptin在调节促性腺激素的分泌和参与生殖调控以及青春期的启动中均具有非常重要的作用.     

Kiss-1基因在猪初情期下丘脑-垂体-卵巢轴中的定位研究

[目的]为阐明猪的生殖机理和选育早熟品种奠定基础。[方法]采用免疫组化技术研究Kiss-1 mRNA在初生以及30、60、70(初情期)和90日龄小梅山猪的下丘脑、卵巢和垂体内的定位,并利用放射免疫分析(RIA)方法观察母猪血浆LH、FSH含量的变化。[结果]Kiss-1 mRNA在小梅山猪下丘脑、卵巢、垂体中均有表达,以下丘脑弓状核阳性颗粒最多,尤其初情期时最为明显。各级卵泡中以初情期成熟卵泡的阳性颗粒数目最多。Kis-s1 mRNA表达量在小梅山猪下丘脑、垂体和卵巢从初生到初情期逐渐上升,并在初情期达到顶峰,而后逐渐下降。小梅山猪血浆LH、FSH浓度初生时较高,随后迅速下降,60日龄又升高,70日龄达到峰值。[结论]Kiss-1基因是控制猪初情期启动的关键因子     

猪初情期NPY-Y1 mRNA在下丘脑-垂体-卵巢轴的表达定位

[目的]研究猪初情期NPY-Y1 mRNA在下丘脑、垂体和卵巢的分布定位。[方法]选取60日龄、体重为20 kg和160日龄、体重为80 kg的苏姜母猪各3头,麻醉后,取出其下丘脑、垂体和卵巢,制成冰冻切片。采用原位杂交技术检测各样品中NPY-Y1 mRNA的表达定位,并用PBS液取代杂交液作阴性对照。[结果]不同发育阶段的下丘脑、垂体和卵巢中均检测到NPY-Y1 mRNA的阳性杂交信号,且初情期前期（60日龄）样品的阳性信号较初情期（160日龄）强。[结论]下丘脑-垂体-卵巢轴内分布有NPY-Y1 mRNA,其对雌性生殖过程具有调控作用。