茶叶中东莨菪素和东莨菪苷的测定及相关基因表达

东莨菪素和东莨菪苷是香豆素类化合物,具有多种生物活性,是传统中药丁公藤类生药的主要活性成分.茶树多酚、生物碱等次生代谢物丰富,但有关东莨菪素和东莨菪苷代谢相关的研究还鲜有报道.本研究建立了利用高效液相色谱测定茶叶中东莨菪素和东莨菪苷的检测方法,东莨菪素的平均回收率为93.5%,相对标准偏差(RSD)为2.64%;东莨菪苷的平均回收率为91.7%, RSD为3.32%.利用该方法检测了不同发育时期新梢(鱼叶期到一芽三叶期)、不同处理(茶尺蠖为害和低温胁迫)叶片和不同品种/单株叶片中东莨菪素和东莨菪苷的质量分数变化.结果表明,茶树新梢中东莨菪苷的质量分数高于东莨菪素,并且其质量分数随新梢成熟度增加而升高,而东莨菪素的质量分数变化无统计学意义;东莨菪素和东莨菪苷的质量分数与茶树品种遗传差异相关,其中东莨菪素质量分数为18.34～50.88μg/g,东莨菪苷质量分数为25.84～80.76μg/g;东莨菪素和东莨菪苷的质量分数受低温和茶尺蠖胁迫的影响差异无统计学意义.对不同发育阶段茶树新梢中东莨菪苷生物合成相关的基因表达水平进行检测,结果表明,合成通路上游基因的表达模式与东莨菪苷的积累模式间不...     

中平树中东莨菪内酯的分离鉴定及含量测定

采用硅胶柱色谱分离纯化的方法从中平树[Macaranga denticulata(Bl.)Muell.Arg.]中分离得到一种香豆素类化合物,根据理化性质及光谱数据鉴定其为东莨菪内酯。并采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇∶0.1%冰醋酸(39∶61)为流动相,流速1.0 m L/min,检测波长345 nm的色谱条件,用HPLC法测定中平树中东莨菪内酯的含量。结果表明,东莨菪内酯在1.45~7.24μg/m L范围内与其峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.18%,RSD为1.18%(n=6)。该方法简便、准确、快速,可用于中平树药材的质量控制。     

HPLC测定万应跌打酒中东莨菪素的含量

［目的］建立万应跌打酒中东莨菪素的HPLC分析方法。[方法］采用Diamonsil C18（5 μm×250 mm×4.6 mm）色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为360nm,柱温为35 ℃。［结果］ 东莨菪素含量9.008-90.080（甲醇）μg/ml 范围内与其峰面积呈良好的线性关系,r＝0.999 9;平均回收率为98.83％（RSD＝1.18％）。10批万应跌打酒中东莨菪素的含量在0.03-0.12 mg/ml。［结论］该方法科学准确、操作简单、重复性好,可用于万应跌打酒的质量控制。     

山莓东莨菪内酯的提取工艺

为更好地开发利用山莓的食药用价值,以东莨菪内酯提取率为指标,采用正交试验法,考察乙醇浓度、乙醇用量、超声时间、超声功率对东莨菪内酯的提取率。结果表明:山莓中东莨菪内酯的最佳提取工艺为100mL的75%乙醇浸渍12h,在80 W功率下超声提取60min,该条件下的提取率为0.333%。     

东莨菪内酯对家蚕乙酰胆碱酯酶活性的影响

用不同浓度天然产物东莨菪内酯处理桑叶饲喂家蚕(Bombyx mori)后,通过测定家蚕头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,研究东莨菪内酯对家蚕的影响。结果表明,12 h时家蚕出现摆头、吐液等轻微中毒症状,24 h时中毒症状减轻,48 h时中毒症状消失,家蚕恢复正常;5龄第三天家蚕饲喂浸过不同浓度东莨菪内酯的桑叶后,头部AChE比活力变化趋势与对照变化趋势相反,且除了药后24 h时的比活力高于对照外,其余时间段比活力均显著低于对照,表现为抑制作用;在一定浓度范围内,东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制作用呈剂量效应关系,且抑制率随东莨菪内酯浓度的升高而升高。5.0×10-2、2.5×10-2mol/L东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制率分别达到99.4%、90.6%,当东莨菪内酯浓度小于5.0×10-4 mol/L时,其对家蚕头部离体AChE活性的抑制趋势逐渐变缓,抑制中浓度IC50为4.03×10-3mol/L。     

东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响

[目的]探讨东莨菪内酯对家蚕中肠组织谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）活性的影响,为桑园使用东莨菪内酯防治虫害的安全性及家蚕抗性品系选育提供理论依据.[方法]采用毒叶法对家蚕进行添毒,测定东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响,并通过离体抑制试验求出东莨菪内酯对GSTs的抑制中浓度（IC50）.[结果]摄食不同浓度东莨菪内酯（0.026～0.104 mol/L）处理桑叶的家蚕表现出相似的中毒症状（吐液和拒食）,但在添毒36h后中毒症状完全消失.相对于正常的家蚕,摄食东莨菪内酯处理桑叶后家蚕中肠组织的GSTs比活力呈前期降低、中期升高、后期降低的变化趋势.不同浓度（0.001～0.016 mol/L）的东莨菪内酯均显著抑制家蚕中肠组织离体GSTs活性,且抑制率随东莨菪内酯浓度的增加而增加.东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs的IC50为0.00474 mol/L.[结论]东莨菪内酯可抑制家蚕中肠组织GSTs活性.     

姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨形态变化和水分损失的影响

为明确植物源杀螨活性物质姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨的作用方式,测定了阿维菌素、哒螨灵、螺螨酯、姜黄素、东莨菪内酯对朱砂叶螨的毒力,并研究了药剂处理后朱砂叶螨的形态变化和水分损失.结果表明:阿维菌素、哒螨灵、螺螨酯、姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨的48hLC50分别为0.009 5,0.955,661.20,3 055.85和1 886.40mg/L;用各药剂的48hLC50质量浓度处理朱砂叶螨后发现,在形态上,经姜黄素和东莨菪内酯处理后其体长皱缩率在72h分别达到23.17%,19.46%,在168h分别达到35.94%,35.79%,与其他药剂和对照的差异具有统计学意义;在水分损失上,螺螨酯、姜黄素和东莨菪内酯处理后朱砂叶螨的水分损失率在96h内与其他药剂和对照相比差异具有统计学意义.该研究证实姜黄素、东莨菪内酯能够明显地影响朱砂叶螨的形态与体内水分含量,且两种药剂对朱砂叶螨的某些症状与神经毒剂和生长调节剂相似,其作用机理有待于下一步研究证实.     

木薯根采后生理劣变期东莨菪甙、东莨菪素的生物合成

采后2—3天，当次生代谢产物的积累后，木薯根经历采后生理劣变（PPD）过程。这些代谢产物其中有香豆素类发挥植物防御和药理活性作用（如东莨菪素及其糖苷东莨菪苷）。这些分子在木薯和其他植物中的合成过程仍未明晰。     

HPLC法测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

[目的]建立对穿心莲中穿心连内酯和脱水穿心莲内酯进行同时测定的HPLC法。[方法]采用色谱柱Alltech C18（4．6mm×250mm,5μm）;以甲醇-水（54：46）为流动相;流速1．0mL／min;检测波长225nm;柱温35℃。[结果]穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯的线性范围分别为0．0338～2．16μg（r=0．9992）和0．0325～2．08μg（r=0．9996）,平均回收率分别为98．7％、96．5％。[结论]该方法准确、简便、灵敏度高、重复性好,适用于穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的同时测定。     

HPLC法测定果实中花色素苷含量

建立了果实中花色素苷的HPLC测定方法,采用ODS-C18柱(250 nm×4.6 nm),流动相A:1.6%甲酸水溶液;B:1.6%甲酸甲醇溶液,梯度洗脱为0~5 min,85%A 15%B;5~10 min,80%A 20%B;10~30 min,72%A 28%B;30~36 min,40%A 60%B;36~48 min,100%B。检测波长510 nm,流速为1 mL/min。2种花色素苷在0.00104~0.0104 mg/mL范围内线性良好,最低检出限为0.02μg/mL,平均回收率为99.5%和99.25%,平均标准偏差为1.98%和2.50%,并测定了大石早生李和藤稔葡萄中花色素苷含量。     

HPLC法测定川芎中藁本内酯和欧当归内酯A的含量

[目的]测定川芎药材中的藁本内酯和欧当归内酯A的含量。[方法]采用HPLC法,色谱柱为SymmetryShieldTMRP-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,梯度洗脱;检测波长为280 nm;柱温为30℃;进样量为10μl。[结果]藁本内酯和欧当归内酯A浓度在各自范围内与峰面积的线性关系良好,相关系数R分别为0.999 0和0.999 1;测得各样品中藁本内酯含量为15.97～18.71 mg/g,欧当归内酯A的含量为0.67～0.81 mg/g。[结论]该方法准确,操作较为简便易行,精密度及重现性良好,可用于川芎药材的质量评价。     

HPLC法测定兽用银翘散中绿原酸和连翘苷含量

为了提升兽用银翘散的质控技术,对提取方法、提取溶剂、测定波长、流动相等方面进行研究,建立了同时测定兽用银翘散中绿原酸、连翘苷含量的高效液相色谱法。结果表明,银翘散采用50 mL的50%甲醇溶液超声提取30 min后,提取液补重,用C₁₈色谱柱分离,乙腈-0.4%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长为277 nm为最佳提取条件。绿原酸、连翘苷分别在20～400μg·mL^-1和2.5～50.0μg·mL^-1内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.999 99,平均回收率分别为101.5%(RSD=2.47%,n=6)和93.7%(RSD=2.69%,n=6)。该方法具有操作简单、准确性好、精密度高、适用性强等优点,可作为兽用银翘散的质量评价与控制方法应用。     

HPLC法测定人参强力胶囊中红景天苷的含量

建立测定人参强力胶囊中红景天苷含量的HPLC方法。色谱柱为Alltima C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇/水(15/85,V/V),流速1.0mL/min;检测波长275nm;红景天苷在10～500μg/mL(r=0.999 7)范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)98.9%(RSD=1.76%)。本方法操作简便、快速灵敏,可作为人参强力胶囊中红景天苷含量的测定方法。     

HPLC法测定新疆巴旦杏中苦杏仁苷的含量

为了建立新疆巴旦杏中苦杏仁苷的HPLC定量测定方法,采用乙醇回流提取法提取苦杏仁苷,以 Zirchrom C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,10 μm)为固定相,甲醇∶水∶冰醋酸(20∶80∶0.05)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为35℃.测定结果显示,苦杏仁苷在20.0～70.0 μg/mL成良好的线性关系,r=0.999 9 ,日内、日间RSD均为0.59;(n=5),平均回收率99.6;(n=6).研究表明,该方法灵敏度高,结果准确,重现性好,方法简便可行,适用于新疆巴旦杏中苦杏仁苷的含量测定,并为其质量控制提供理论依据.     

中药一匹绸总黄酮提取工艺及其含量测定研究

采用回流提取法提取一匹绸总黄酮,通过单因素试验,考察提取方法、提取溶剂体积分数、提取体积、提取时间对总黄酮含量的影响,采用正交试验,优化提取工艺条件,筛选出一匹绸总黄酮的最佳提取工艺。结果表明,一匹绸总黄酮的最佳提取工艺为75%甲醇、料液比1∶30、回流提取时间1.0 h。该方法重复性较好、方法稳定,能有效测定一匹绸药材总黄酮的含量,为该药材的质量标准研究提供一定的科学依据。     

植物保卫素东莨菪内酯对烟草的诱导抗性研究进展

东莨菪内酯属香豆素类化合物,是烟草中重要的植物保卫素,能抗烟草花叶病、灰霉病、野火版、青枯病、黑胫病等多种病害,其在烟草组织中通过苯丙氨酸解氨酶(PAL)调控合成,当受到不良环境影响或者外源物质(茉莉酸甲酯、2,4-D、核黄素、细胞分裂素等)诱导时,东莨菪内酯在烟草葡萄糖基转移酶(TOGTs)调控转化为东莨菪苷转移到液泡中发挥抗病作用。该文综述了东莨菪内酯对烟草中的生物合成及诱导抗性的相关研究,以期为提高烟草的抗病性及防治提供理论依据。     

不同产地白芍HPLC指纹图谱及芍药苷和芍药内酯苷含量的比较研究

目的建立湘白芍、亳白芍与杭白芍HPLC指纹图谱分析方法,并对3种不同产地药材进行主要化学成分的比较。方法采用HPLC对11批白芍样品进行指纹图谱分析,并测定了主要化学成分芍药苷和芍药内酯苷的含量。结果所建立的方法精密度、稳定性和重现性良好;11批白芍样品的指纹图谱有8个共有峰。结论通过建立白芍指纹图谱的定性、芍药苷及芍药内酯苷的定量,为白芍的质量控制提供了更为全面的方法。     

HPLC法测定芪苓制剂超微粉中白术内酯Ⅲ的含量

芪苓制剂超微粉用甲醇提取,固相萃取小柱纯化,40%甲醇淋洗,60%甲醇洗脱后收集洗脱液.色谱条件:色谱柱ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(30∶30∶40),流速1.0 mL.min-1,检测波长220 nm,柱温30℃.结果显示,白术内酯Ⅲ含量为0.77-27.02μg.mL-1时呈良好的线性关系(r2=0.9989),检测限为3.86 ng.mL-1,平均回收率为93.05%,RSD为4.04%.     

HPLC法测定短柄五加根和茎中刺五加苷E含量

[目的]建立测定不同产地短柄五加根、茎中刺五加苷E含量的HPLC方法.[方法]采用Agilent TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1％磷酸(16:84)为流动相;流速1 mL/min;检测波长220 nm,进样体积为10μL,柱温30℃.[结果]刺五加苷E在8.0～160.6μg/mL与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996),平均加样回收率为98.62％,RSD为0.50％.[结论]该方法操作简便、稳定可靠,适用于短柄五加根、茎中刺五加苷E含量的测定,可作为倒卵叶五加药材的质量控制指标.