茶叶中多酚氧化酶同工酶分析方法的研究

作者对茶多酚氧化酶同工酶的提取、纯化及分离方法进行了比较研究,结果表明:用丙酮粉匀浆提取酶液,经葡聚糖凝胶G—25柱纯化,结合聚丙烯酰胺凝胶盘电泳或醋酸纤维膜电泳,能够把茶多酚氧化酶分离出六至七种同工酶,效果稳定可靠。     

茶叶多酚氧化酶的基因克隆

本试验以嫁接可可茶为材料,提取了高质量的茶树基因组DNA,以纯化的DNA为模板,利用FS和RX引物组合进行PCR扩增,结果扩增出了约1800bp的片段,与预期大小一致。所克隆的PPO基因与其它茶树PPO基因的同源性达到98％,氨基酸序列同源性达到91％,确认为茶叶多酚氧化酶基因。     

茶树多酚氧化酶同工酶的分离纯化

以龙井43号茶树鲜叶为材料,通过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对茶树多酚氧化酶同工酶进行分离纯化,最终分离出1个单一同工酶(PPO V),该同工酶亚基大小约为80ku。     

多酚氧化酶同工酶组成对茶黄素合成的影响

用垂直板聚丙烯酰胺凝的方法,研究了不同来源(茶叶、苹果、梨、蘑菇和漆酶)的多酚氧化酶同工酶的酶带特征。结果表明,不同来源多酚氧化酶同工酶具有相似的酶带,但对酶带数目、Rf值及分子量均存在种间差异。梨有11条同工酶带,苹果4条,茶叶有2条,蘑菇5条,而漆酶只有1条。PPO同工酶带Rf值集中于0.40～0.70的区间内。茶叶多酚氧化酶同工酶的相对分子量大于9.4×104,而梨、苹果、蘑菇和漆酶多酚氧化酶同工酶的相对分子量介于4.5×104～9.4×104。同时研究了多酚氧化酶活性和同工酶组成对茶黄素合成的影响。梨果实多酚氧化酶同工酶谱带最多,酶活性最大,合成茶黄素的能力最强。合成茶黄素能力大小顺序为:梨PPO,茶叶PPO,苹果PPO,漆酶PPO,蘑菇PPO。     

棉花不同抗、感蚜虫品种的多酚氧化酶同工酶分析

棉花不同抗、感蚜性品种的幼嫩花蕾多酚氧化酶（ＰＰＯ）同工酶分析结果表明，感蚜品种酶带多，但弱带比例大。相反，抗蚜品种酶带少，且多为强带。ａ带（Ｒｆ０．０１）、ｂ带（Ｒｆ０．０８）和ｄ（Ｒｆ０．９６）是各品种共有带，其带的峰值大小与抗蚜性呈正相关。ＵＶＰ扫描分析结果显示，ｃ带（Ｒｆ０．５５）只存在于感蚜品种。本文结果可应用于棉花抗蚜性鉴定及其育种上。     

龙井43号多酚氧化酶同工酶酶学性质研究

以龙井43号[Camellia sinensis(L.)O.Ktze.cv.Longjing 43]鲜叶为材料,经分离纯化获得多酚氧化酶-同工酶(PPOⅡ),对其部分酶学性质进行了研究。结果表明,PPOⅡ最适反应pH为6.0;抑制剂抗坏血酸、亚硫酸钠和L-半胱氨酸对PPOⅡ的抑制作用随抑制剂浓度的增加而增强;Cu~(2+)浓度在0.25×10-7mol/L时,PPOⅡ活性最高;PPOⅡ的Km为13.05 mmol/L,v_(max)为0.019 OD_(460)/min。     

小麦籽粒发育过程中多酚氧化酶同工酶的变化

选取了19个冬小麦品种,分别在籽粒满仁期、灌浆中期和蜡熟期取样分析多酚氧化酶同工酶谱的变化。试验结果表明,满仁期多酚氧化酶同工酶谱带最多,随后,低分子量区多酚氧化酶同工酶谱带浓度不断下降,至蜡熟期,低分子量区同工酶谱带已很微弱,收获干燥后的籽粒未检测到同工酶谱带。在籽粒同一发育时期,品种间同工酶谱带非常相似。这些变化对研究成熟小麦籽粒中多酚氧化酶活性变异的原因具有重要意义。     

烟草多酚氧化酶生物信息学分析

为对烟草多酚氧化酶进行生物信息学分析,利用ProtScale、PhyML和Meme工具读取烟草多酚氧化酶,进行疏水性、进化树和保守基序分析。结果表明,烟草多酚氧化酶各成员均为亲水性氨基酸;多酚氧化酶成员的进化树被划分为三类,其中烟草和番茄聚为一类,第二类中的成员最多;NtPPO1、NtPPO2和NtPPO3均含有相同的保守基序,NtPPO1和NtPPO2分布位置较为相似,而NtPPO3与其存在一定的差异。     

梨多酚氧化酶同工酶组成及其对茶黄素合成的影响

用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶的方法,研究了不同品种梨(丰水梨、贡梨、雪梨、水晶梨、香梨)果实多酚氧化酶同工酶的酶带特征.结果表明,不同品种梨多酚氧化酶同工酶具有相似的酶带,但酶带数目、Rf值及相对分子质量均存在种间差异.丰水梨有11条同工酶带,贡梨7条,雪梨5条,水晶梨和香梨分别为6条和4条.PPO同工酶带Rf值集中于0.40～0.70,其相对分子质量集中于4.5×104～9.4×104.同时研究了多酚氧化酶活性和同工酶组成对茶黄素合成的影响.丰水梨果实多酚氧化酶同工酶谱带最多,酶活性最大,合成茶黄素的能力最强.多酚氧化酶合成茶黄素能力大小顺序为:丰水梨,贡梨,雪梨,香梨,水晶梨.     

侧耳（平菇）的酯酶,多酚氧化酶及过氧化酶同工酶的电泳分析

对怀远平菇、凤尾菇、佛罗达平菇、黑龙江平菇的酯酶,多酚氧化酶及过氧化物酶同工酶进行了聚丙烯酰胺弟前平板电泳研究。结果就酶谱来说,它们具有一些相同或相似的种特性的酶带,但其总的酶带数目、酶带的的宽主颜色的深浅均存在种间或品系间的差异,万以酯酶同工酶的酶谱差异最显著,从而２为这４种平菇的分类鉴定提供了简便直观的生化手段,同时建立了生化指标。     

几种木本豆科植物的过氧化物酶和多酚氧化酶同工酶研究

用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对红花槐、龙爪槐、国槐、紫穗槐、刺槐的过氧化物酶和多酚氧化酶同工酶进行分析研究 ,并采用排序法 ,对其亲缘关系进行比较 ,结果表明 :龙爪槐与国槐的亲缘关系较近 ;龙爪槐与紫穗槐、刺槐、红花槐都较远 ;红花槐与刺槐的亲缘较近     

小麦多酚氧化酶研究进展

小麦面粉和面食品的色度是小麦磨粉品质和面食品的主要评价指标。特别是面条、馒头、饺子、烙饼等中式食品对白度的要求相当高。多酚氧化酶(PPO)与小麦面粉及其面食品在加工、贮藏中的褐变直接相关。同时,多酚氧化酶种类的遗传变异和表达差异也决定小麦籽粒中的PPO总活性高低,从而直接或间接影响面粉的白度。笔者综述了近年来小麦多酚氧化酶生化机理、分布和分子生物学遗传分析以及与品质关系等方面的研究进展,并且根据多酚氧化酶的表达特性,讨论了小麦高白度新品种选育的策略。     

羊栖菜多酚氧化酶特性

对羊栖菜(Sargassumfusiforme)多酚氧化酶(PPO)进行浸提和硫酸铵分级盐析粗提,并测定了酶的特性.结果表明:在供试反应体系中,当邻苯二酚量为0.3-1.2mL时,酶活力呈直线增长,底物含量太高会产生抑制作用,当底物含量∶酶含量=2∶1时,酶活力表现最高;其酶活力的最适温度为40-45℃,在35-60℃范围内酶均能保持较高的活力,但超过60℃时,其活力则迅速下降;在50-100℃下水浴处理1h,酶活力丧失50%-75%;酶活力的适宜pH相对偏碱,在pH9.1时表现为一个活力高峰,在pH11.0和12.0时酶活力仍很高.提取的羊栖菜多酚氧化酶,存在不同特性的同功酶.5种供试抑制剂对该酶均有一定的抑制效果,其中NaHSO3和L-半胱氨酸的抑制作用最强,在浓度为50μmol·L-1时,抑制率达100%.     

小麦多酚氧化酶概述

简述了多酚氧化酶的概念、分布,介绍了其生理生化特性及功能,并指出影响小麦多酚氧化酶活性的因素。     

云南野生和逸生苜蓿资源多酚氧化酶和超氧化物歧化酶同工酶研究

 采用聚丙烯酰胺凝胶不连续垂直板电泳系统,对30份云南野生和逸生苜蓿材料多酚氧化酶（PPO）和超氧化物歧化酶（SOD）进行了检测。结果表明：供试材料PPO检测分离出10条酶带,SOD 为6条酶带,二者多态位点百分数均为100%。对酶谱进行谱形分析表明,除1,3,4号3份二倍体材料外,其他材料均具有多条相同的共有谱带,但也存在明显差异;采用类平均法(UPGMA)进行聚类分析,表明30份供试材料亲缘关系的远近与地理分布呈一定的相关性。试验结果可以作为研究云南苜蓿资源遗传关系的基础。     

小麦麸皮多酚氧化酶粗提条件分析

研究小麦籽粒麸皮中多酚氧化酶的提取工艺,得出提取的最佳工艺条件:酶蛋白提取及保存温度为4～10℃,交联聚乙烯吡咯烷酮的添加量为3%,缓冲液的pH值为6,浸提振荡频率为120r/min,提取时间为12h。     

茶树多酚氧化酶基因的SNP分析

选取有代表性的40个茶树品种(系)为材料,先采用PCR-SSCP-银染检测技术,对供试材料的多酚氧化酶(PPO)基因进行SSCP分析,对PPO基因作初步基因分型;根据分型分析结果,对每一类型选择典型品种的PPO基因作进一步的DNA序列分析,用DNASTAR Program进行单核苷酸多态性(SNP)搜寻.结果表明,茶树PPO基因存在丰富的SNP,其类型包括:转换(AG,CT)、颠换(AT,GC,G→T,A→C)与杂合子(C/T,A/G,G/T,A/T,A/C,G/C).在发现的37个SNPs中,有13个SNPs发生在核酸内切酶酶切位点,有10个错义SNPs位点导致氨基酸的改变.在PPO基因的保守序列区,出现SNP的频率较低.     

巨柏细胞色素氧化酶同工酶变异分析

为阐明巨柏Cupressus gigantea的濒危机理,根据聚丙烯酰胺琼脂电泳对巨柏3个大居群的36个个体功能叶片的细胞色素氧化酶的同工酶谱带测定结果进行编码,对各酶谱带进行聚类分析;同时结合细胞色素氧化酶的3个遗传指标进行分析。结果表明,来自同一居群的个体,同工酶谱带相似性高,遗传杂合度小（HeA．=0．726,HeB=0．691,HeC=0．704）,相似性系数大,遗传距离小,这说明居群内个体遗传分化小;而不同居群间的个体则恰好相反（IAB=0．240,IAC=0．259,IBC=0．401;DAB=1．427,DAC=1．351,DBC=0．914）,这主要是由青藏高原特殊的气候条件和巨柏的地理分布格局所造成的。     

烟草中多酚化合物及多酚氧化酶研究进展

烟草中多酚化合物的含量、合成、积累对烟叶的品质有重要的作用。研究多酚氧化酶(PPO)在烟草中的作用机理，合理控制多酚氧化酶的活性，能增加上、中等烟比例和天然香味，降低刺激性，提高烤烟质量。