桂花SVP同源基因的克隆及序列分析

试验以桂花‘日香桂'Osmanthus fragrans cv.rixianggui嫩叶为试验材料,根据转录组数据库中SVP基因的保守序列信息,通过PCR方法克隆得到日香桂SVP基因,将其命名为QfSVP,运用在线生物信息学分析工具对OfSVP序列进行分析。结果表明:OfSVP基因全长1325bp,开放阅读框(ORF)为687bp,编码228个氨基酸。氨基酸序列保守性分析发现,OfSVP所编码的蛋白中含有MADS-box基因家族特有的K-box区域。通过ProtParam ExPASy在线软件分析OfSVP蛋白质分子式为C1121H1859N327O364S9,分子量为26030.60Da,理论等电点PI值为5.80。不稳定指数为68.10,属于不稳定蛋白质。蛋白氨基酸序列比对和系统发育进化分析结果表明OfSVP与油橄榄(Olea europaea)、黄连(Coptis chinensis)和芝麻(Sesamum indicum)的同源性分别达到94%、83%和82%;OfSVP基因的克隆与序列分析对于进一步了解桂花'日香桂'成花机理具有重要意义。     

‘厚瓣金桂’桂花花芽形态分化的研究

 采用石蜡切片法观察了‘厚瓣金桂’桂花(Osmanthus fragrans‘Houban Jingui’) 花芽形态分化过程。研究表明: 厚瓣金桂花芽分化从4 月中旬开始分化苞片原基至8 月底心皮原基形成历时约4 个月,其过程可分为苞片分化期、花序原基分化期、花蕾原基分化期、顶花花萼分化期、花瓣分化期、雄蕊分化期和雌蕊分化期7 个时期。其中, 苞片分化期和雄蕊分化期历时长, 分化较慢, 其它时期历时短, 分化较快。聚伞花序的中间顶花先分化, 需时长, 侧花后分化, 需时短, 因此各小花几乎同时完成花芽分化进程。     

日本矮紫薇花芽形态分化的研究

日本矮紫薇花芽由中上部侧枝和主枝顶芽发育而成,花芽分化从4月末开始至5月末结束,历时30d,包括花序分化和小花分化两个过程,分为形态分化前、开始分化期、花序原基分化期、花蕾分化期、小花花萼分化期、花瓣分化期、雄蕊分化期、雌蕊分化期8个时期,花序和小花分化的顺序分别是离心和向心的.花芽分化与春梢生长有一定的相关性.     

托桂花型菊花花发育的组织结构观察

采用石蜡切片技术对托桂型菊花和非托桂型菊花的花发育过程以及花瓣的组织机构进行观察。结果表明：菊花的花芽分化可分为花序分化和小花分化两个阶段,托桂和非托桂型菊花的花芽分化过程在小花花冠伸长期开始出现差异,桂瓣的发育过程中组织结构的变化更类似于舌状花;成熟的桂瓣和舌状花一样,其花瓣结构均由上下表皮细胞和内部多层叶肉细胞构成,而非托桂花型菊花管状花花瓣仅有上下表皮细胞。桂瓣内层细胞旺盛的分裂能力以及发达的维管束组织可能是菊花形成托桂花型的重要原因。     

阳光玫瑰葡萄生长期花芽分化形态进程及相关生理分子水平变化研究

【目的】探讨阳光玫瑰葡萄生长期花芽分化进程及相关生理分子水平变化，为葡萄生产调控及花芽分化深入研究提供理论参考。【方法】以4年生阳光玫瑰葡萄为试材，通过徒手剥离冬芽鳞片在体式解剖镜下观察冬芽形态结构变化，测定花芽分化过程中第5节位叶片内碳水化合物、矿质元素含量及冬芽内9个成花关键基因的表达。【结果】南宁地区阳光玫瑰葡萄在新梢6片展叶期时开始花芽形态分化，在末花期进入花序原基分化期。叶片可溶性总糖、淀粉含量在花序原基分化期后显著升高。叶片P、K、Ca和Mg元素含量在花芽形态分化起始时下降，在花序原基分化后60 d时含量显著降低。冬芽中VvFT和VvSOC1基因在花芽分化起始时表达水平较高；VvLFY、VvAP1、VvFUL、VvAP2、VvAP3和VvAG基因均在花序原基分化期及花序原基分化期后80～100 d出现表达波峰，VvFLC基因在花序原基分化后60～100 d的表达水平较高。【结论】南宁地区阳光玫瑰葡萄花芽分化进程开始较早。生产上在果实膨大期和软化期前后应适当补充磷、钾、钙、镁肥，以促进果实发育、花序原基及其各级穗轴分化。VvFT和VvSOC1基因参与诱导始原基及花序原基分化，...     

桂花OfNCED3调控转基因烟草叶片类胡萝卜素和叶绿素的合成

从桂花（Osmanthus fragrans）‘堰虹桂’转录组数据库中筛选获得OfNCED3基因序列。氨基酸序列分析发现OfNCED3具有NCED家族特有的2个保守结构域MIAHPKxDP和HDFAITE以及4个保守的组氨酸残基。进化树分析发现OfNCED3与番茄SlNCED1聚为一支。实时荧光定量PCR结果表明，桂花开放过程中，Of NCED3在类胡萝卜素含量较高的‘堰虹桂’花瓣中的表达量显著低于类胡萝卜素含量较低的‘玉玲珑’，推测OfNCED3可能与‘堰虹桂’和‘玉玲珑’花瓣中类胡萝卜素含量差异有关。通过农杆菌介导的遗传转化方法获得过表达OfNCED3烟草株系。利用分光光度计和超高效液相（ultra high performance liquid chromatography,UPLC）测定叶绿素、类胡萝卜素和ABA的含量，并采用实时荧光定量PCR分析类胡萝卜素通路上相关基因的表达差异，结果发现异源过表达Of NCED3导致转基因烟草叶片中叶绿素和类胡萝卜素含量下降，ABA含量增加，类胡萝卜素合成基因的表达量明显上调，且下游合成基因上调幅度高于上游合成基因。本研究表明Of NCED...     

树莓花芽分化的研究

试验对树莓花芽分化时期的形态特征及发育进行了定期观察。结果表明:树莓花芽分化始期为8月初,8月下旬至9月进入高峰期。当年只分化到花序原基分化期便停止分化。翌年4月中下旬开始,花序原基向前推进,依次进入花朵、萼片、花瓣、雄蕊、雌蕊原基的分化阶段同时进入芽外分化阶段。树莓生理分化期为8月上旬。树莓的芽由纯花芽和混合芽2种芽组成。     

树莓花芽分化的观察

1991～1992年,对树莓花芽分化时期的形态特征及发育进程进行了定期观察。结果表明,树莓花芽分化始期为8月末,9月中下旬进入高峰期,约60～70d。形态特征是雏梢生长点向上隆起成半球状。10月上旬至翌年4月中旬,随初生髓部的伸展,半球状生长点(顶花序原基)向前推进,随后形成腋花序原基,即为花序原基分化期。随同冬芽萌发展叶,依次进入花蕾、萼片、花瓣、雄、雌蕊原基的芽外分化阶段,各期约7～15d。至5月中旬出现花药和胚珠原始体。此期距结果新梢的花序显露还有2～3d。基生枝下部花芽分化始期比中上部迟一个月,分化数量也有较大下降。     

葡萄MADS-box转录因子家族全基因组鉴定及表达分析

从葡萄基因组中共鉴定出54个MADS-box基因,其中Type-Ⅰ型10个,Type-Ⅱ型44个,分布于15条染色体中,编码的蛋白质序列为62～596个氨基酸,外显子数1～16个。启动子区含有大量光信号、植物激素、胁迫和分生组织等相关功能域。根据实时荧光定量RT-PCR的结果发现,SEP、FUL、FLC、SVP、SOC1和ANR1亚类基因随叶片生长表达水平逐步升高,在成熟叶中最高,衰老叶片中下降;果实第1次膨大期和果实转色期是SEP、SOC1和ANR1亚类基因的两个表达高峰期;单氰胺处理诱导SVP、AGL15、SOC1、AP3/PI、AGL12和FLC亚类基因在休眠过程中表达量持续上升,在休眠解除过程表达量下降。     

芍药PlSVP基因的克隆及其花期调控功能分析

从芍药（Paeonia lactiflora）中克隆SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP)基因,研究其对花期的调控功能,为芍药分子育种储备重要基因资源。采用RT-PCR方法从‘大富贵’芍药中克隆了PlSVP基因,其开放阅读框包含687bp碱基,编码228个氨基酸。系统进化树分析发现,PlSVP编码的蛋白与同属的牡丹PsSVP蛋白亲缘关系最近。qRT-PCR分析结果表明,PlSVP主要在营养器官中表达,在根中表达量最高,其次是叶片;在生殖器官花瓣中表达量极低。将PlSVP转化入哥伦比亚型野生型拟南芥,发现转PlSVP基因的株系较野生型的抽薹、开花时间分别延迟7和15d;在拟南芥svp-41突变体中过表达PlSVP发现,其不再呈现早抽薹、早开花表型,即PlSVP基因回补了svp-41突变体的功能缺失。进一步比较研究表明,拟南芥转PlSVP基因植株中FT、SOC1、LFY、AP1等SVP下游开花促进基因的表达量均显著下调。以上结果表明,芍药PlSVP基因负调控植物开花时间,并且可能通过抑制FT、SOC1、LFY、AP1等基因表达而发挥其负调控功能。     

基于银杏花芽3个分化时期转录组测序的相关基因筛选与表达分析

鉴定银杏花芽分化调控的关键基因,揭示银杏花芽分化调控的主要分子机制,为缩短银杏童期和选育银杏早花品种提供理论指导。本研究中采用高通量测序技术对银杏花芽分化3个时期（花芽未分化期、花芽分化始期、花芽分化盛期）的样品进行转录组测序,并分析数字表达谱,筛选开花调控相关基因并进行荧光定量PCR（RT-qPCR）表达验证。转录组测序共产生27.52 Gb原始数据,注释到8大功能数据库（GO、COG、KEGG、KOG、NR、Pfam、Swiss-Prot、eggNOG）上的 unigene 总数为35 179个。通过GO分类和KEGG Pathway 富集性分析,将unigene分别归于55个GO类别和126个代谢途径。差异表达基因分析显示,花芽未分化期较花芽分化始期有2 253个基因上调,2 032个基因下调;花芽分化始期较花芽分化盛期有1 770个基因上调,1 901个基因下调;花芽未分化期较花芽分化盛期有1 865 个基因上调,2 042个基因下调。发掘出大量的开花相关的基因涉及5个开花调控途径（光周期途径、春化途径、赤霉素途径、自主途径和年龄途径）。筛选出gene.Gb_17618（GI序列）、gene.Gb_19790（FT/TFL1序列）、gene.Gb_16301（AG序列）、gene.Gb_28337（花发育MADS-box序列）、gene.Gb_01884（SOC1序列）和gene.Gb_41704（CO序列）等6个银杏花芽分化差异表达关键基因序列,荧光定量PCR检测表达水平与转录组结果一致。     

蝴蝶兰PhSVP的克隆及其在花发育过程中的表达分析

从蝴蝶兰杂交品种‘大辣椒’中克隆到SVP同源MADS-box基因PhSVP，使用RACE方法获得PhSVP全长，其开放阅读框为687 bp，编码228个氨基酸。蛋白序列多重比对表明PhSVP蛋白包含一个高度保守的MEF2-like MADS结构域和一个中度保守的K-box结构域，且与兰科的SVP/AGL24同源蛋白相似度高，进化树分析也表明PhSVP蛋白与其他兰科植物的SVP/AGL24同源蛋白亲缘关系最近。PhSVP的空间表达模式表明其在营养器官表达量高，在萼片、侧瓣和唇瓣等生殖器官表达量低。进一步对PhSVP在成花转换和花发育过程中花序顶端的表达进行分析，表明PhSVP的转录水平在营养分生组织向花序分生组织过渡的过程中无显著变化，仅在花序分生组织阶段有少量上升，但在花发育早期花分生组织阶段中的表达水平显著升高，而在花发育后期的萼片原基、花瓣原基和合蕊柱原基阶段持续下降。此外还发现A类基因PhAP1在花发育过程中的花序顶端的表达模式与PhSVP相似，而B类基因PhPI和C类基因PhAG在花瓣原基和合蕊柱原基阶段的表达量最高。检测了PhSVP在抽葶期、花蕾期和盛花期的根、叶和花葶中的转录水平，结果表明PhSVP在花蕾期的根中的表达量稍高于其他时期，在不同阶段的叶中的表达水平无显著差异，而在抽葶期花葶中的表达量显著高于花蕾期和盛花期。试验结果暗示蝴蝶兰PhSVP可能起到调控花分生组织状态的维持、避免花器官原基过早分化的作用。     

抽薹开花调控基因SVP 的作用机制

SHORT VEGETATIVE PHASE（SVP）基因属于MADS 盒基因,它编码的蛋白转录因子对开
花具有抑制作用。SVP 主要在营养生长阶段表达,受自主途径等多个开花路径调控,并可以调节开花途径
整合子FLOWERING LOCUS T（FT）,SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS 1（SOC1）
的表达,从而调控抽薹开花时间。本文综述了SVP 基因调控抽薹开花的作用机制,并结合SVP 基因的研
究现状展望了未来的研究方向。     

芥菜开花整合子SOC1启动子的克隆及其与FLC、SVP蛋白互作的研究

为了深入研究芥菜开花整合子SOC1基因的表达调控机制,利用染色体步移法从芥菜‘QJ’中克隆了SOC1编码区上游782 bp的启动子,并构建SOC1基因启动子的酵母表达载体pAbAi-SOC1,与蛋白表达载体pGADT7-FLC、pGADT7-SVP共转化酵母Y1HGold菌株。酵母单杂交表明：芥菜FLC和SVP蛋白均能与SOC1的启动子相互作用。进一步分析发现：SOC1启动子含3个CArG-box表达调控基序。分别亚克隆这3个基因片段（SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3）,并再次构建酵母重组质粒pAbAi-SOC1-1、pAbAi-SOC1-2和pAbAi-SOC1-3,与pGADT7-FLC、pGADT7-SVP分别融合到Y1HGold菌株。融合菌株均能在相应SD/-Leu/AbA培养基上生长,说明SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3都能被芥菜FLC、SVP蛋白识别并结合。再次构建SOC1-1、SOC1-2、SOC1-3的CArG-box删除突变体及A-T互换突变体,则均不能与FLC、SVP蛋白互作。由此说明：SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3的3个CArG-box基序确实能特异性识别FLC、SVP,发生DNA-蛋白相互作用。这为利用启动子调控SOC1基因的转录表达等深入研究奠定了理论基础。     

山楂花芽分化的观察

(一)山楂花序为多个伞房花序簇生于果枝顶端,每花序有花15～40余朵,最多达50朵左右。结果后花序梗干枯,其下的顶部数个侧芽,在条件良好时,仍能形成花芽,连续结果。 (二)山楂花芽形态分化,可分为六个时期。即花序原基分化期、花蕾期、萼片期、花瓣期、雄蕊期和雌蕊期。昌黎地区山楂花序原基于9月上旬出现,9月下旬出现花蕾原基,10月下旬到11月上旬出现萼片原基,大部分花芽以单花原基状态进入休眠期。但在休眠过程中仍缓慢进行分化,翌年早春3月上旬出现花瓣原基,3月下旬开始出现雄蕊原基,雌蕊原基出现在4月上旬以后,全部花芽分化所需时间达8个月左右。 (三)不同枝条花芽分化的开始时间不同。一般短枝顶芽分化早,长枝较晚,但到分化后期(雄蕊及雌蕊分化期),各类枝条间差异不大,基本上在同一时期分化结束。 (四)山楂花芽前期分化持续时间长,后期分化持续时间短。如花蕾原基最早于9月下旬出现,最晚为3月上旬,持续达160天,而雄蕊及雌蕊原基最早出现到最晚出现仅持续10天左右的时间。 (五)山楂花芽是在枝条停止生长3～4个月后开始分化花序原基,此时果实已接近成熟,枝条积累有机营养物质较多,加之抑花内源激素减少,促花激素增多,有利于形成大量花芽。根据山楂花芽分化开始晚,冬季休眠期中进行缓慢分化,雄蕊及雌蕊均在早春花芽萌动过程中形成的特点,应在8月中旬到采收前后增施氮、磷、钾肥料。肥水条件差的地方,早春萌动时追施速效性肥料,有利于提高花序质量,增加座果率。 (六)山楂花芽的鳞片平均数为16.1个,叶片平均数为9.5个,总节数平均为25.6节。不同年份、不同管理条件下山楂花芽分化的临界节数有一定幅度的变化,不同枝类间以长枝花芽的临界节数多,短枝及结果枝上花芽的临界节数较少。     

喷施赤霉素推迟和减少澳洲坚果成花的效应

以5 a生Own Choice品种为试材,研究赤霉素对澳洲坚果成花的影响。对用赤霉素处理植株与对照植株的花芽分化物候期进行了比较,并对花芽分化期间细根、枝条、叶片中的内源激素进行了测定分析。结果表明,赤霉素处理促进植株营养生长,抑制成花,花序伸长时期明显推迟,成花量显著减少,每节花序数量为1.45～1.52,而对照植株每节花序数量为2.55～2.60;澳洲坚果花芽分化期间,枝、叶中内源激素GA3、IAA水平下降,ABA水平上升,枝叶中较高的(ABA+ZT)/(GA3+IAA)比值可能有利于花芽分化;赤霉素处理使枝条、叶片中内源GA3、IAA含量增加,ABA含量减少,(ABA+ZT)/(GA3+IAA)的比值降低,但对根的激素影响较小。     

甜樱桃畸形果发生与预防

甜樱桃连体双果、山鼻果等畸形果来源于花芽分化过程中雌蕊原基分化不正常.从文献报道分析认为,整个花芽分化期,特别是花萼原基分化期和花瓣原基分化期的温度环境是引发畸形果最重要的因素,伴随环境温度升高,内源乙烯增加,相应地花芽集中分化期喷布乙烯利等可收到与高温类似的效应,而喷布NAA、ABA或GA3则有减少畸形果发生的作用;花芽分化期的土壤湿度状况对甜樱桃畸形果的发生无影响;畸形果发生程度还与甜樱桃品种特性有关.基于此,提出选择畸形果发生少的布鲁克斯、红宝石、甜心等品种,以及在花萼原基分化期和花瓣原基分化期遮阴防高温、喷布GA3等防范措施.     

矮生山茶‘恨天高’GA20ox1的克隆及其对转基因烟草株形的影响

根据山茶（Camellia japonica）同源序列设计特异性引物,利用同源克隆和3′,5′-RACE技术,从云南山茶（C. reticulata）矮生品种‘恨天高’茎尖组织中克隆出GA20–氧化酶（GA20-oxidase,GA20ox）基因,命名为CrGA20ox1（GenBank登录号：KP635268）,基因全长1 178 bp,开放阅读框1 146 bp,编码381个氨基酸。实时荧光定量PCR分析发现,GA20ox1在4种不同的山茶中均得到表达,其中乔木类的浙江红山茶（C. chekiangoleosa）GA20ox1表达量最高,其次是岳麓连蕊茶（C. handelii）及金花茶（C. nitidissima）,表达量最低的为矮生品种‘恨天高’。结果表明该基因的表达量高低与测试物种的株高有关。GA20ox1在4个物种不同组织中的表达模式基本一致,且在茎尖组织中的表达量均高于叶片。CrGA20ox1转基因烟草分析结果表明,过表达CrGA20ox1烟草株高约为野生型的3.6倍,而沉默表达 CrGA20ox1烟草株高约为野生型的一半。     

枣花分化发育过程及其内源激素动态研究

为了研究枣花形成及调控机制,以鲜食枣品种‘七月鲜’为试材,观察花芽分化发育过程,并对内源激素含量进行检测。结果表明,枣花形成包括花芽分化和花发育两个阶段,单花分化需11 d,分6个时期（未分化期、分化初期、萼片分化期、花瓣分化期、雄蕊分化期和雌蕊分化期）,花发育历经7个阶段（花蕾期、蕾裂期、萼片平展期、花瓣平展期、雄蕊平展期、花丝萎蔫期和子房膨大期）。枣吊发育过程中IAA含量显著降低,枣花中IAA则表现为蕾裂期极显著上升,子房膨大期又极显著下降;ABA含量在枣吊长5 cm时极显著升高后缓慢下降,在枣花中的变化与IAA相似,在雄蕊平展期极显著降低;GA3含量始终处于较低水平,枣吊长5 cm时显著增加,而后缓慢降低,在枣花中则是蕾裂期极显著降低后一直稳定在较低水平。以上结果显示,在枣花形成过程中,花芽孕育期需要较低水平的IAA和较高水平的ABA和GA3,需要较低的IAA/GA3及较高的ABA/GA3和ABA/IAA;开花期则需要高水平的IAA、ABA、ABA/GA3和IAA/GA3,对GA3和ABA/IAA的需求相对较低。     

红球姜花芽发生和发育的研究

 采用石蜡切片法、扫描电镜以及立体解剖镜观察了红球姜(Zingiber zerurnbet)花芽的形态发生和结构发育过程。研究表明：红球姜花芽分化从4月底开始分化苞片原基至6月中旬心皮原基形成历时约1个多月。其过程可分为9个时期：花序原基分化期、苞片原基分化期、花蕾原基分化期、苞叶原基分化期、花萼原基分化期、花瓣原基分化期、雄蕊原基分化期、雌蕊原基分化期、花药和胚珠分化期。球果状花序分化从最下部的小花开始依次向上进行。