牛胚胎玻璃化冷冻保存研究初报

传统的胚胎冷冻方法需诱发结晶,按一定速率降温,不仅程序复杂费时间（需几小时）,而且还得使用价值昂贵的胚胎冷冻仪。为此,１９８５年Ｒａｌｌ等人首先发明了玻璃化冷冻法［１］,不使用冷冻仪,将冷冻时间缩短（约为３０ｍｉｎ）。但他们选用的是以大约７ｍｏｌ／Ｌ二甲基亚砜为主的抗冻剂,因其化学毒性大,对胚胎的存活带来一定影响［２,３］。１９８６年Ｓｃｈｅｆｆｅｎ等人,利用丙三醇及丙二醇为抗冻保护剂,因化学毒性仍较大,冷冻保存后的胚胎成活率仍不稳定［４］。针对化学毒性问题,１９９０年Ｋａｓａｉ等人利用化学毒性…     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展

玻璃化(vitrification)是指利用物理学原理将高浓度的抗冻保护剂急速降温后，由液态转化为外形类似玻璃状的稳定而透明的非晶体化固体状态的过程。玻璃化的固体保留了液体正常的分子和离子分布，可以视为一种无序黏稠的超冷液体，因而避免了细胞内形成冰晶而对细胞产生伤害。1985年，Rall等率先将玻璃化冷冻方法用于小鼠胚胎的冷冻保存，推动了该方法在哺乳动物胚胎冷冻保存的方面的应用。之后，玻璃化冷冻保存不断改进，     

早期胚胎玻璃化冷冻保存技术研究进展

本综述阐明了胚胎玻璃化冷冻原理，比较了玻璃化冷冻技术各种方法及其优缺点，分析了胚胎玻璃化冷冻的影响因素，展望了玻璃化冷冻技术的应用前景。     

性别控制胚胎玻璃化一步法稀释冷冻保存技术的研究

为了创立在用户庭院就能应用的玻璃化保存性别控制胚胎的冷冻剂稀释处理方法，采用细管内3种不同液体层构成（A、B、C）法，对新鲜分割胚一步法稀释后的存活能力进行了研究；其次用特定细管最小容量冷却法与上述3种不同液体层构成中效果较好的B法对玻璃化冷冻溶解的新鲜分割胚、体外受精分割胚及冷冻溶解的体外受精分割胚进行一步法稀释后的存活能力予以对比。结果，3种不同液体层构成间胚胎的存活能力无显著差异，B法较高；应用特定细管最小容量冷却法在冷冻溶解的新鲜分割胚、体外受精分割胚及冷冻溶解的体外受精分割胚一步法稀释后的存活能力均显著高于B法。结果表明，特定细管最小容量冷却法是更有效的保存方法。     

牛胚胎玻璃化冷冻保存技术及国内近期研究进展

本文就胚胎玻璃化冷冻保存的原理、冷冻保护剂的作用和冷冻方法及近期国内牛胚胎玻璃化冷冻的研究进展情况进行了详细的综述.     

胚胎玻璃化冷冻保存技术及其在牛和猪应用的研究进展

1　前言胚胎冷冻保存是胚胎移植技术真正走向商业化应用的关键环节。自从英国学者Ｗｈｉｔ ｔｉｎｇｈａｍ等人在 1 972年首次报道利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功以来 ,胚胎冷冻保存技术即受到人们的广泛关注 ,并投入了大量的人力和物力进行研究开发利用。随后 ,牛、兔、绵羊、大鼠、山羊、猪和人等的胚胎冷冻保存研究也相继获得成功。冷冻方法也在不断改进。1 977年 ,Ｗｉｌｌａｄｓｅｎ发明了快速冷冻方法 ,将原先需要大半天的冷冻过程缩短在 2ｈ以内 ;超快速冷冻技术的出现 ,又使冷冻过程缩短在 1ｈ之内。 1 985年Ｒａｌｌ玻璃化冷…     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存概况及其常用方法

哺乳动物卵母细胞和胚胎的超低温冷冻保存技术,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等生物技术不可缺少的部[1].Rall和Fahy于1985年首次报道了用玻璃化方法来冷冻保存小鼠胚胎,这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤,提高了冷冻效率[2].     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展

自1985年胚胎玻璃化冷冻(v itrification)保存技术发明以来,玻璃化法先后在小鼠、兔、绵羊、牛、猪、山羊等动物胚胎上获得成功,近年来有关哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究主要集中在冷冻和解冻方法上,相继发明了一些新的玻璃化冷冻方法:冷环玻璃化法(cryo loop)和开放式细管法(open pu lled straw,OPS),并且对解冻后细管内直接脱除防冻剂进行了广泛深入的研究,使得冷冻胚胎移植更易于在生产上推广应用。现将胚胎玻璃化冷冻的原理、冷冻保护剂、冷冻方法、解冻后保护剂脱除方法的最新研究进展作一综述。     

影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素

试验对影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素进行探讨，以找出理想的玻璃化冷冻方法。在测试的５种玻璃化溶液中，含３５％乙二醇（ＥＧ）和１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的溶液（ＶＳ１）对胚胎的毒性最小。用ＶＳ１冷冻桑椹胚和囊胚的理想程序是：在室温下使胚胎分别在２０％ＥＧ和３５％ＥＧ中平衡２、３分钟后，移入ＶＳ１中，０．５分钟内（囊胚也可在２分钟后）投入液氮中冷冻。桑椹胚的存活率为９１．７％（３３／３６），囊胚的存活率为９７．１％（３３／３４）～９７．３％（３６／３７）。８～１６细胞胚胎的理想冷冻程序为：在室温下使胚胎在２０％ＥＧ、３５％ＥＧ中平衡２、３分钟，移入４℃的３７％ＥＧ＋１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中平衡２分或１０分钟后冷冻，胚胎存活率分别为１００％（３７／３７）、８６．１％（３１／３６）。     

家兔扩张囊胚玻璃化冷冻保存技术的研究

本试验对家兔扩张囊胚的玻璃化冷冻保存技术进行了探讨。首先在２０℃室温下，将扩张囊胚直接移入ＥＦＳ４０溶液中短时间平衡后，直接投入液氮中冷冻保存（一步法）；或胚胎在１０％～２０％ＥＧ（或ＥＦＳ２０）溶液中经预先处理后，再移入ＥＦＳ４０中冷冻保存（二步法），解冻后的胚胎发育率达到９５％～１００％。当室温提高到２５℃时，一步法和二步法冷冻的胚胎均得到了较高的发育率（８９％～９０％）。利用２０℃条件下一步法即２分钟平衡后冷冻的胚胎移植后，妊娠受体的产仔率为２９．２％（７／２４），同对照组产仔率３２．４％（１１／３４）相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

家兔孵化囊胚玻璃化冷冻保存技术的研究

采用两种方法对家兔孵化囊胚作玻璃化冷冻保存在25℃室温下，将孵化囊胚直接移入EFS40溶液中短时间平衡后，直接投入液氮中冷冻保存(简称一步法)；或将胚胎在10％或20％EG溶液中经预处理后，再移入EFS40溶液冷冻保存(简称二步法)。结果表明，一步法冷冻后的胚胎发育率为68％，与对照组(鲜胚)的差异极显著(P<0.01)；二步法冷冻后的胚胎发育率高达93％，与对照组的差异不显著(P>0.     

兔子精液冷冻保存综述

精子在冷冻保存过程中会受到不可逆的冷冻损伤或者部分功能改变,因此精子的冷冻保存是一个大挑战。虽然从广义上讲,物种之间的精子冷冻保存是非常相似的,但是每个物种的精子有着各自的特殊性,迫使研究人员不断优化冷冻保护剂和操作程序以更好地适应其特殊性。对家兔精液冷冻保存的概况进行了阐述,讨论了家兔精液冷冻保存的研究概况以及影响冷冻精液和人工授精的因素。     

小鼠桑椹胚简易玻璃化冷冻技术再探讨

本试验继小鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存成功后，在室温（２５℃）下利用不同浓度的ＥＦＳ玻璃化溶液，对小鼠的桑椹胚简易玻璃化冷冻技术进行再探讨。结果是胚胎在１０％ＥＧ溶液中预先处理５分钟，再移入事先配置好含有ＥＦＳ３０的０．２５ｍｌ塑料细管中１分钟平衡后直接投入液氮中冷冻，解冻后获得的发育率最高（９４％）。冻胚移植后妊娠率和产仔率分别为５６％（９／１６）及４２％（４９／１１６）。与对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５）     

家畜胚胎冷冻保存研究现状

本文对家畜胚胎冷冻保存的原理、冷冻方法、冷冻保护液的成分、胚胎解冻方法与冷冻保护剂的脱除等研究现状进行了综述。     

小鼠2-细胞胚胎细管法和OPS法玻璃化冷冻保存技术的研究

本试验在室温 (2 0℃和 2 5℃ )条件下 ,利用不同浓度的玻璃化溶液 (EFS和EDFS) ,对小鼠 2 细胞胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻保存。在 2 0℃室温条件下 ,用EFS4 0平衡 1min细管一步法冷冻 ,解冻后囊胚发育率仅为35 .0 % ,和新鲜 2 细胞体外培养的对照组 (6 5 .0 % )的差异极显著 (P <0 .0 1)。当 2 细胞胚胎在 10 %EG +10 %D溶液中预处理 5min ,再移入EDFS中平衡 30s二步法冷冻保存 ,解冻后囊胚发育率达 4 7.8%～ 4 8.8% ;当室温升至2 5℃时 ,二步法冷冻保存后 2 细胞的囊胚发育率达到 5 2 .2 % ,与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。改用OPS二步法EFS30冷冻组保存后的 2 细胞胚胎的囊胚发育率高达 6 2 .2 % ,为试验中的最佳组。用最佳细管法和OPS法冷冻组解冻后培养至囊胚移植给受体母鼠均获得产仔     

几种冷冻保存方法对奶牛胚胎保护效果的研究

选取奶牛体内生产胚胎93枚(其中囊胚54枚,桑椹胚39枚),比较研究了不同冷冻方法和保护剂对其的保护效果。结果表明:乙二醇处理组对奶牛囊胚的保护效果优于One-Step-Freezing组、甘油组和玻璃化组(回收率、形体正常率和继续发育率四组分别为91.0%、82.0%、66.6%;91.0%、91.0%、88.8%;86.6%、85.0%、83.3%和80.0%、66.7%、50.0%),其中继续发育率在乙二醇组、甘油组和玻璃化组间差异显著(P<0.05);而桑椹胚的各项指标以乙二醇处理组最高,玻璃化组最低,但各组间差异不显著。结果说明乙二醇处理组对胚胎的保护效果优于其它几个处理组。     

Advances in Holding and Cryopreservation of Equine Oocytes and Embryos

Methods for holding of oocytes and embryos during shipment as well as for their cryopreservation can greatly aid equine reproductive management. Oocytes can be held at room temperature overnight or at cooler temperatures for two nights without affecting maturation or embryo development after intracytoplasmic sperm injection. In contrast, methods for cryopreservation of equine oocytes that support high rates of embryo development have not yet been established. Equine embryos may be held overnight at temperatures from 5°C to 19°C without reduction in viability, but longer holding periods, or higher holding temperatures, may be detrimental. Small equine embryos (<300 μm), either in vivo derived or in vitro produced, can be slow frozen or vitrified successfully. In the last decade, methods have been developed to allow in vivo–derived expanded blastocysts, up to Day 8, to be vitrified successfully after blastocoele collapse. These methods of shipment and preservation allow mare owners in remote locations to have access to sophisticated assisted reproductive technologies.     

牛胚胎玻璃化冷冻保存研究进展

1 玻璃化冷冻的基本原理 所谓的玻璃化冷冻就是在完全的玻璃化状态下冷冻保存细胞、组织或器官.为了在一定冷冻速度下形成玻璃化,需要使用高浓度的可渗透性低温保护剂. 玻璃化冷冻法是根据物理学原理,将高浓度的低温保护剂(约7 mol/L)在超低温环境下凝固,形成无规则的玻璃化固体,这种固态物质能保持液态时的正常分子与离子分布,因而在细胞内发生玻璃化起到保护作用.这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤.此外,这种方法采用迅速通过临界温度区,从而减轻了一些动物胚胎冷冻中常见的冻伤现象.