生物素—亲和素强化斑点试验检测口蹄疫病毒抗体的研究

常规酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测。ＨＲＰ稳定性好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶性检测系统，进行免疫强化斑点试验检测口蹿疫病毒抗体。用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替和二抗体，通过ＡＰ标记怕亲和素检测生物素化抗体，是后加底和ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法具有良好的特异性和重复性，由于引入生物系统和ＡＰ，使灵敏度大大提高，能检     

用生物素-亲和素强化免疫斑点试验检测口蹄疫病毒的研究

传统酶联免疫吸附试验一般用辣根过氧化物酶(HRP)标记IgG进行检测。HRP的稳定性虽好,但敏感性稍差。为了克服这一不足,引入碱性磷酸酶(AP)检测系统,进行免疫强化斑点试验检测口蹄疫病毒的研究。用光敏生物素标记纯化的A蛋白(SPA)代替第二抗体,通过AP标记的亲和素(Avidin-AP)检测生物素化抗体,最后加入底物BCIP和NBT显色判定。该法操作简单、检测时间短,并具有良好的特异性和重复性。由于引入生物素系统和AP,检测的灵敏度比曾通ELISA高。     

用生物素—亲和素强化免疫斑点试验检测口蹄疫病毒的研究

传统酶联免疫吸附试验一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测。ＨＲＰ的稳定性虽好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶（ＡＰ）检测系统，进行免疫强化斑点试验检测口蹄疫病毒的研究。用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替第二抗体，通过ＡＰ标记的亲和素（Ａｖｉｄｉｎ－ＡＰ）检测生物素化抗体，最后加入底物ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法操作简单，检测时间短，并具有良好的特异性和重复性。     

生物素——亲和素技术对鸡新城疫病毒的定位检测

生物素—亲和素技术的特异性强、灵敏度高。15只鸡在人工感染和自然感染新城疫强毒后,对内脏器官进行了测定。将病料制成冰冻切片和印片,然后染色,从肝、心、脾、肺、肾、脑和法氏囊均查出了新城疫病毒,其中以肺、脑、脾和法氏囊的含毒量较高。但相同的器官当感染途径不同时,其含毒量没有显著差异。这是确诊鸡新城疫的一种新技术。     

斑点ELISA检测口蹄疫病毒的研究

斑点ＥＬＩＳＡ检测口蹄疫病毒的研究杨永钦，黄德生，李乐（云南省畜牧兽医研究所，昆明６５０２２４）材料与方法一、病毒系本所保存的口蹄疫种毒Ｏ型和ＡｓｉａⅠ型；二、豚鼠高免血清ＰＢＳ将种毒制成１０￣（－１）悬液，部穿刺接种０．５ｍｌ，重复免疫３次，无菌抽...     

口蹄疫病毒抗体检测

口蹄疫是一种急性、高度接触性、烈性的传染病,是由口蹄疫病毒引起的,常常发生在偶蹄动物,偶尔也见于人和其它动物。世界动物卫生组织已经将该病列为法定申报传染病,我国将其列为一类动物疫病。我国主要通过实施强制免疫来预防控制该病,疫苗免疫之后所产生的抗体水平是评价免疫效果的重要手段,也可以根据免疫后的效果来制定合理免疫程序。本实验室主要通过口蹄疫液相阻断和3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒来进行抗体检测。     

生物素-亲和素斑点酶联免疫吸附试验快速检测鱼源副溶血性弧菌的研究

本研究建立了快速检测鱼源副溶血性弧菌的BA-Dot-ELISA方法.用该法可检出每毫升接种10个菌,增菌18h的培养物.该法敏感性为10~4个/mL,比Dot-ELISA敏感10～100倍.不与溶藻性弧菌、亲水气单胞菌等13种杂菌发生交叉反应.增菌前杂菌多于副溶血性弧菌10~6时,对检测结果有影响.可在22～24h报告结果,比常规培养法快4～6d以该法对带鱼、小黄花鱼、马面鱼、鲤鱼等311份样本进行检测,检出率分别为47.0%、41.7%、14.8%和11.8%,与常规培养法相差不显著(P>0.05).生化试验复检结果表明,检出的阳性可凝菌株均为副溶血性弧菌.该法适用于在短时间内对大批样本的检测.     

应用生物素-亲和素系统检测感染兔弓形虫抗体的实验研究

鉴于弓形虫病感染的多样化,病原诊断又较困难,血清学检测逐渐成为常规辅助诊断方法之一.七十年代末国内外相继建立了检测血清中抗弓形虫抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA).近年来,生物素-亲和素系统(BAS)已用于多种抗原抗体系统但未见检测弓形虫抗体的报道.本文应用亲和素和生物素标记的过氧化物酶复合物(ABC)为标记物的ABC-ELISA方法检测感染兔弓形虫抗体的实验研究并与常规ELISA法进行对比观察,现将初步试验结果报告如后.     

生物素-亲和素标记技术

生物素-亲和素系统(BAS)是一种具有高亲和力、灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点的信号放大标记技术,研究证明生物素与亲和素依靠接触表面均一的多层膜来维系其稳定的结合。随着不断的探索和研究,该技术现已发展出多种标记方法,例如桥-亲和素-生物素标记法、亲和素-生物素-过氧化物酶法、标记生物素-抗生物素法,由于该标记技术具有优秀的性质,因此很快渗透到多个学科,在细胞和抗原的定位和检测中体现出极其重要的作用。目前,BAS已广泛应用于免疫学、分子生物学和组织化学等领域,并取得较好的效果。文章对该技术的特点、方法和应用做了简述。     

光生物素标记的口蹄疫病毒cDNA探针的制备及其对口蹄疫病毒RNA检测的试验研究

本文首次报道了利用pF1034质粒制备FMDV O型特异性探针,并通过PCR反应扩增FMDO_1K株病毒基因组的第2962位与3071位之间共110bp序列,制备了能检测O型、A型和亚洲I型FMDV RNA的群(组)特异性探针。用硝酸纤维素膜斑点杂交试验表明,二者均能检测出10pg水平的O_9K毒株的纯RNA;但前者只与O型FMDV RNA杂交,与A型及亚洲I型FMDV RNA无交叉杂交现象;而后者则能与O型、A型和亚洲I型的FMDV RNA发生杂交反应。对照试验显示:此两种探针与SVDV ssRNA、BTV dsRNA、EHDV dsRNA、DHV ssRNA、PRV DNA、乳鼠组织细胞RNA、BHK_(21)克隆13细胞RNA及DNA等均不出现交叉杂交现象,但与IBR DNA有假阳性杂交反应。     

口蹄疫抗体检测试验的试验设计

目的改进试验方法和试验步骤,降低试验成本。方法改进型口蹄病毒O型液相阻断ELISA抗体检测实验。结论试验每份血样的检测成本为4元。     

犊牛口蹄疫病毒抗体检测与分析

正为确定犊牛口蹄疫病毒疫苗的免疫时间,本试验分别用口蹄疫O型单苗,口蹄疫O型、A型二价苗对试验犊牛在90日龄首免、120日龄二免,二免后的1、2、3、4、5、6个月分别采血,用口蹄疫O型、口蹄疫A型阻断ELISA抗体试剂盒检测免疫后犊牛的抗体水平及合格率,以确定其免疫计划。1材料与方法1.1试验材料口蹄疫病毒O型由中农威特生物科技股份有限公司生产;口蹄疫O型、A型二价疫     

口蹄疫病毒3ABC抗体检测结果分析

口蹄疫(FMD)是一种高度接触性传染病,对国际贸易具有深远的影响,世界动物卫生组织(OIE)和联合国粮农组织(FAO)将口蹄疫列为A类烈性传染病之首.控制和消灭FMD策略包括疫苗免疫和屠宰可疑畜群.可疑畜群就是被FMDV感染动物和带毒动物.只有将感染动物和隐性带毒动物与疫苗免疫动物加以区分才能为FMD的控制和消灭提供科学的依据.3ABC-I-ELISA方法不但可以检测隐性感染动物而且可以区分感染动物和免疫动物.     

口蹄疫病毒抗体SA-ELISA快速检测方法的建立

旨在解决如何对现有方法进行优化创新以建立口蹄疫抗体检测新方法的问题,本研究在基于原有液相阻断ELISA的基础上进行方法优化,实现口蹄疫病毒抗体的快速、灵敏检测。本研究通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素(HRP-SA)相结合建立新的液相阻断ELISA检测方法(SA-LPBE),在猪,牛、羊血清样品中具有较高的符合率。结合实际情况,判定优化后牛、羊血清抗体效价≥128,猪血清效价≥64时,判定为阳性,与商用检测试剂盒结果一致。并且经符合率分析,与原试剂盒具有92.3%的符合率,其批内变异系数<5%,批间变异系数<10%。该方法改变了原有的需要制备兔抗豚鼠抗血清再标记HRP技术路线,根本上提高了酶促反应的效率,保证了方法原有敏感性的同时提高了方法的特异性;利用生物素标记抗体与HRP-SA反应迅速、标记原料稳定、检测背景值等优点实现了将液相阻断ELISA试剂盒操作时间由2 d缩短为3 h,解决了原有方法操作繁琐、用时过长、操作疲劳、不稳定、易出错等问题。建立的SA-LPBE可应用于FMDV抗体检测,为FMD流行和临床检测提供了技术方法。     

生物素——亲和素双抗原夹心斑点酶联免疫吸附试验检测动物蓝舌病抗体的研究

测定蓝舌病(BT)群特异性抗体最常用的血清学方法是琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID),为了提高反应的灵敏度和特异性,1980年以来国内外学者们又发展了ELISA间接法和阻断法。因聚苯乙烯板对蓝舌病抗原的吸附较差,板间差异较大,而且结果判断需要专用仪器等,所以1987年加拿大学者Afsher等用硝酸纤维素膜做为载体     

免疫学检测新技术——生物素—亲和素系统在免疫检测中的应用

随着医学和生物学的不断发展,对免疫学检测技术要求越来越高——敏感、快速、准确、简便等。继免疫酶法、荧光免疫测定法、放射免疫测定法(RIA)后,由 Guesdon(1979年)创建的生物素——亲和素系统(BAS)在免疫检测中的应用具有上述特点,且比常规酶联免疫吸附试验(ELISA)敏感20～80倍(Kendall,1983),可达到0.1ng/ml的水平,相当于甚或高于 RIA 测定法(Sutton,1985),已显示其巨大的应用潜力,引起