中药"增免散"对鸡腔上囊细胞凋亡和外周血T细胞亚群的影响

将300只1日龄雏鸡随机分成正常对照组、中药“增免散”组、环磷酰胺组、环磷酰胺组 左旋咪唑组、环磷酰胺 “增免散”组,6日龄用鸡新城疫(ND)La Sota疫苗免疫点眼滴鼻,14、21、28、35日龄测定鸡血液ND抗体效价、外周血液CD4 、CD8 T淋巴细胞浓度、腔上囊器官指数、腔上囊细胞凋亡率,探索中药“增免散”的免疫增强机理。结果表明:中药“增免散”不但能提高外周血液中CD4 /CD8 T淋巴细胞百分比,促进鸡腔上囊的生长发育,降低腔上囊细胞凋亡率,而且对环磷酰胺的免疫抑制有部分拮抗作用。     

青蒿组方对球虫感染雏鸡血液中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的影响试验

为研究青蒿组方中药对鸡免疫力的影响,试验选取14日龄三黄鸡120只,平均分为4组:感染给药组(1组),感染不给药组(2组),不感染给药组(3组),不感染不给药组(4组).感染组人工接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊.接种后第4、7、10 d运用流式细胞仪测定各组鸡血液中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞值及二者的比值.结果:1组CD4^+、CD8^+T淋巴细胞值及其比例在接种后第4、7、10 d均高于2组,差异显著(P<0.05);2组CD4^+、CD8^+T淋巴细胞平均比值低于其他3个组.结论:青蒿组方中药可促进鸡血液中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞生成,进而增强机体的免疫功能.     

雏鸡感染毒害艾美耳球虫后免疫器官T细胞亚群的动态变化

采用ABC法检测了毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）初次、二次感染雏鸡后，其免疫器官T细胞亚群的动态变化。结果发现：雏鸡初次感染E．necatrix后，其胸腺和脾脏的CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞于感染后4～21d不同程度高于未感染的对照雏鸡，14～16d达峰值，随后缓慢下降。其中CD4^＋T细胞较CD8^＋T细胞增殖辐度大，持续时间也较长。Enecatrix二次感染雏鸡后，上述免疫器官的CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞数量在感染后2～7d呈下降趋势，随后回升，至10～14d明显高于对照和初次感染雏鸡。其中CD8^＋T细胞在二次感染后降幅较小，回升更迅速，增殖幅度也较大。表明鸡CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞在抵抗E．necatrix感染的不同时期发挥不同的作用。     

紫锥菊、黄芪对感染IBDV雏鸡胸腺、小肠中CD4~＋、CD8~＋ T淋巴细胞动态分布的影响

将14日龄雏鸡随机分为3组,A组灌服1 mL的紫锥菊、黄芪合剂,B、C组灌服生理盐水,连续灌服7 d。21日龄时A、B组雏鸡接种传染性法氏囊病病毒（IBDV）,用免疫组化法观察雏鸡胸腺、小肠中CD4＋、CD8＋T淋巴细胞动态分布的变化。结果表明,用药组和攻毒对照组相比较,CD4＋T淋巴细胞差异显著（P〈0.05）,但是CD8＋T淋巴细胞差异不显著（P〉0.05）,与空白对照组相比CD4＋淋巴细胞显著增多。胸腺、小肠中24日龄时CD4＋、CD8＋T细胞数量较其他日龄差异显著（P〈0.05）。总试验期胸腺中CD4＋、CD8＋含量是所测总数的60%。表明紫锥菊、黄芪对机体免疫有显著增强作用,以胸腺中CD4＋、CD8＋含量多于小肠,能显著降低IBDV对机体造成的损伤。     

传染性法氏囊病病毒超强毒感染SPF鸡免疫器官中CD4+和CD8+T淋巴细胞动态分布

利用免疫组织化学染色对传染性法氏囊病病毒（IBDV）超强毒LX株感染SPF鸡免疫器官中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的动态分布进行了研究。超强毒LX株接种2周龄SPF雏鸡，在其法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓和哈氏腺中均可检出IBDV抗原的存在和CD4^ 与CD8^ T淋巴细胞的数量改变。在法氏囊中，CD4^ 淋巴细胞主要存在于淋巴滤泡间隙和滤泡皮质，而CD8^ T淋巴细胞则丰在于整个淋巴滤泡和滤泡间隙，并且CD8^ T淋巴细胞数量明显多于CD4^ T淋巴细胞，在接种后14d仍未见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞数量减少。脾脏中CD4^ T淋巴细胞主要存在于外周小动脉淋巴鞘或散在，而CD8^ T淋巴细胞则多存在于外周小动脉淋巴鞘和红髓。接种后胸腺中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞在皮质中减少，但在髓质增多，尤其是CD8^ T淋巴细胞数明显多于CD4^＋T淋巴细胞。盲肠扁桃体中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞主要存在于发生中心，尤其是CD8^ T淋巴细胞数比CD4^ T淋巴细胞明显多。骨髓和哈氏腺中也可见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞，而且CD8^ T淋巴细胞更多。在这些淋巴器官中，病毒损伤部位出现CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的迁入聚集，表明T淋巴细胞可能参与IBDV超强毒的免疫致病过程。     

复合黏膜免疫佐剂对鸡小肠细胞免疫的影响

分别应用复合黏膜免疫佐剂Ⅰ和Ⅱ与新城疫Ⅳ系弱毒苗混合（佐剂Ⅰ组和佐剂Ⅱ组）,经口免疫鸡后,研究鸡小肠黏膜局部CD3^＋T细胞、上皮内淋巴细胞和干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）mRNA表达水平的变化。结果表明,在整个免疫期内CD3^＋T细胞和上皮内淋巴细胞数量都呈上升趋势,在首免后第3和第5周时十二指肠CD3^＋T细胞佐剂Ⅱ组比佐剂Ⅰ组显著增加（P〈0.05）,空肠CD3^＋T细胞佐剂Ⅱ组比佐剂Ⅰ组极显著增加（P〈0.01）,第7周时Peyer’s斑上皮内淋巴细胞佐剂Ⅱ组比佐剂Ⅰ组极显著增加（P〈0.01）;整个免疫期内佐剂Ⅱ组和佐剂Ⅰ组IFN-γmRNA表达水平呈下降趋势,表达量较低。本研究表明2种复合黏膜免疫佐剂都能明显增加黏膜局部免疫细胞的数量,提高小肠局部黏膜免疫力。     

高温下清凉冲剂对鸡免疫器官中CD4+、CD8+ T细胞数量的影响

采用免疫组化方法检测鸡免疫器官中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量，探讨高温下清凉冲剂对机体细胞免疫机能的影响及其药理作用。108只农大3号35目龄公雏，随机分为3组，每纽36只鸡，即常温对照组、高温对照组和高温用药组。用药组饲喂中药煎荆（浓度为1g／ml），用药量与饲料量比为1：1000。在试验的第1、4、8、10天各组捕杀5只。分别采取胸腺、脾脏、法氏囊检测。结果高温下。用药组免疫器官中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量均高于高温对照组。第8、10天差异极显著（P〈0．01）。表明高温下清凉冲剂可以增加鸡免疫器官中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量，有效地提高鸡细胞免疫水平。     

中药"球康"对E.tenella感染鸡肠道CD4+和CD8+T细胞的影响

本试验采用免疫组化方法检测球虫感染鸡肠道组织中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量,探讨中药“球康”抗球虫的作用机理。试验共设不感染不给药组、不感染给“球康”组（2％拌料）、感染给“球康”组和感染不给药组共4组。感染球虫后第2、4、5、7和9天,每组随机捕杀4只鸡,采取盲肠中段进行检测。结果,雏鸡感染球虫后,盲肠组织中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量显著高于不感染组,感染给中药“球康”组鸡CD4＋T细胞数量在第2,4,5和9天均高于感染不给药组,在第4天和第5天差异显著（P＜0．05）;CD8＋T细胞数量在第2,5,7和9天高于感染不给药组,第5天差异显著（P＜0．05）,第7天达到最高峰。说明中药“球康”通过增加球虫感染鸡肠道黏膜CD4^＋、CD8^＋T细胞数量,提高细胞免疫水平,以增强机体对球虫的抑杀作用。     

AA肉鸡血液CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化规律

采用流式细胞仪检测1、3、5、7、14、21、28、35、42、49日龄AA肉鸡血液中的CD3、CD4、CD8阳性T细胞比例。研究结果表明:1～5日龄T细胞逐渐进入血液参与细胞免疫,7、21日龄注射疫苗起免疫应答作用,28日龄后基本形成稳固的细胞免疫水平。     

中药复方连翘对感染法氏囊病毒雏鸡免疫功能的影响

160只7日龄健康岭南黄鸡随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组,每组40只,Ⅰ为正常对照组、Ⅱ为感染病毒组、Ⅲ为中药复方治疗组、Ⅳ为中药复方制剂组,Ⅱ、Ⅲ组均于8日龄感染传染性法氏囊病毒（IBDV）,Ⅲ、Ⅳ以20g&#183;kg^-1单剂量灌服中药复方连翘汤。分别于试验后第7、14、21、28日龄采外周血及免疫器官法氏囊和脾脏,测定血细胞的吞噬能力、外周血T淋巴细胞的百分率和T淋巴细胞的转化率,流式细胞仪测定鸡外周血和脾T淋巴细胞亚群CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T细胞的含量;放血致死称体质量、脾和法氏囊质量,计算免疫器官指数。在感染IBDV7d后取脾脏和法氏囊组织,制备组织样品进行组织学及透视电镜观察。结果表明：中药复方连翘制剂可使雏鸡外周血细胞的吞噬能力、T淋巴细胞的百分率和T淋巴细胞的转化率、法氏囊和脾脏的质量明显提高,对感染IBDV后免疫器官法氏囊和脾脏有明显的改善和恢复作用,提高外周血和脾淋巴细胞中CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T细胞百分率,改变CD4^＋／CD8^＋比值促进对机体免疫系统的调控。感染病毒组的上述指标显著下降,中药复方连翘治疗组与感染病毒组相比能显著提高上述指标。     

接种La Sota疫苗雏鸡外周器官中CD4+T细胞的来源及其作用

切除胸腺的２日龄雏鸡,接种抗鸡Ｔ细胞表面分子ＣＤ４的单克隆抗体,于１２日龄时以ＬａＳｏｔａ疫苗免疫。然后,在不同的日龄分别用ＦＡＣＳ,ＭＴＴ及间接ＥＬＩＳＡ测定脾脏和外周血中ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋Ｔ淋巴细胞亚类数量,脾Ｔ淋巴细胞转化功能及病毒特异的血清ＩｇＧ抗体的动态变化。     

鸡IL-6真核表达载体的构建及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究

利用RT—PCR方法从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞RNA中扩增出IL-6基因,与pCI—neo连接构建真核表达质粒pCI—IL-6,并研究pCI—IL-6在CEF细胞中的表达及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用。研究发现,pCI—IL-6在CEF细胞中得到表达,pCI—IL-6和LaSota疫苗联合免疫组HI抗体、CD4^＋、CD8^＋和CD3^＋T淋巴细胞百分含量从免疫后第14天起均高于LaSota疫苗单独免疫组。其中,HI抗体效价在第14、21和35天时差异显著（P〈0．05）,在第28天时差异极显著（P〈0．01）;CD4^＋、CD8^＋和CD3^＋T淋巴细胞百分含量在第14天后表现为差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）。在免疫后第35天进行攻毒,pCI—IL-6和LaSota疫苗联合免疫组的保护率为89．5％,而LaSota疫苗单独免疫组的保护率为76．5％。结果表明,pCI—IL-6真核表达质粒在鸡体内成功表达,并能明显提高新城疫LaSota疫苗的免疫效果,具有免疫增强作用。     

玉屏风散对雏鸡传染性法氏囊病疫苗免疫效果的影响

为了验证传统中药方剂玉屏风散对鸡传染性法氏囊病(IBD)疫苗免疫效果的影响,将玉屏风散以高(A)(1%)、中(B)(0.75%)、低(C)(0.5%)剂量拌料饲喂7日龄雏鸡,连喂12 d;14日龄用法氏囊疫苗免疫,分别于21、28、35、42和49日龄用ELISA法测定外周血IBDV抗体;于21和35日龄用流式细胞术测定外周血CD4+和CD8+T细胞亚群;于21、35和49日龄用碳粒廓清试验测定外周血巨噬细胞的吞噬活性.结果表明,玉屏风散可显著提高血清IBDV抗体水平,28日龄后A组抗体水平显著高于其他各组(P<0.05),35日龄后B、C组抗体水平明显高于对照组(P<0.01);CD4+数量及CD4+/CD8+值在21日龄时A、B组显著高于C组和对照组(P<0.05或P<0.01),35日龄时A组显著高于其余各组(P<0.01);玉屏风散也能提高鸡外周血巨噬细胞的吞噬活性,A组效果最好(P<0.05或P<0.01).结果提示,玉屏风散可提高雏鸡的特异性体液免疫和非特异性细胞免疫水平.     

不同光照条件下褪黑素对鸡鸭鹌鹑外周血淋巴细胞及其亚群变化的影响

为探讨不同褪黑素水平对禽类机体免疫系统的调节作用，通过控制不同光照条件，分3组（短光照组、长光照组和对照组）饲养鸡45只、鸭45只、鹌鹑45只，采用荧光双色染色法和流式细胞仪分别检测鸡、鸭、鹌鹑外周血中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞及其亚群和Bu-la^＋B淋巴细胞数量变化。结果，短光照组由于体内褪黑素水平较高，外周血中CD3^＋CD4^＋T细胞、CD3^＋CD8^＋T细胞、Bu-la^＋B细胞及白细胞总数都有不同程度升高，且与对照组相比差异显著；长光照组由于体内褪黑素分泌较少，外周血中CD3^＋CD4^＋T细胞、CD3^＋CD8^＋T细胞、Bu-la^＋B细胞及白细胞总数都有不同程度降低，且与对照组相比差异显著。结果表明，内源性褪黑素对鸡、鸭、鹌鹑外周血中淋巴细胞及其亚群的数量变化有显著影响。     

雏鸡淋巴细胞变化规律的流式细胞仪检测研究

为进一步研究鸡在出孵1个月左右时间内T、B淋巴细胞及其亚群的发育状况，将SPF雏鸡分别在3、5、7、9、11、14、17、22、27、32日龄时取血液、脾脏、法氏囊及胸腺，分离并制成淋巴细胞悬液，流式细胞仪双染色法检测Bu-la^＋B淋巴细胞、CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和TCRγδ^＋CD3^＋T淋巴细胞含量及血液淋巴细胞的凋亡规律。结果：在出孵1个月内T、B细胞处于分化发育阶段的初期，除胸腺外，呈上升趋势，但T细胞亚群的变化无规律，B细胞在法氏囊中和T细胞在脾脏中3～9日龄发育最快；血液淋巴细胞凋亡趋于下降，尤其是在9日龄以后：此间不断有成熟的淋巴细胞产生，不断进入血液和脾脏，使其数量有上升趋势。但是，血液中第7日龄时Bu—la^＋B淋巴细胞和CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数量均最低，说明体液免疫和细胞免疫水平第7日龄时都最低，并在17日龄时进入水平较高的又一个低谷。TCRγδ^＋CD3^＋T细胞则变化幅度不大。     

猪IFN-γ和IL-4重组质粒对口蹄疫疫苗的免疫佐剂效应研究

为了研究猪IFN-γ和IL-4对疫苗的免疫佐剂效应,用pcDNA3.1/IFN-γ和pcDNA3.1/IL-4的重组质粒与口蹄疫双价疫苗配伍免疫小鼠,检测小鼠抗口蹄疫抗体水平和CD4＋/CD8＋T细胞比值的动态变化,观察其免疫佐剂效应。结果表明pcDNA3.1/IFN-γ和pcDNA3.1/IL-4重组质粒都能显著提高小鼠抗口蹄疫抗体水平（P〈0.01）,其中pcDNA3.1/IFN-γ提高亚洲Ⅰ型FMD抗体水平的佐剂效应较pcDNA3.1/IL-4的显著（P〈0.01）,而pcDNA3.1/IL-4提高O型FMD抗体水平的佐剂效应显著高于pcDNA3.1/IFN-γ（P〈0.01）,pcDNA3.1也显示出了一定的佐剂效应;免疫后不同时间pcDNA3.1/IFN-γ和pcDNA3.1/IL-4组CD4＋/CD8＋T细胞比值显著高于其他组（P〈0.01）,且第21天与第7、45天的差异极显著（P〈0.01）。     

鸡直肠中T淋巴细胞的发育研究

通过免疫组织化学方法,应用CD3、CD4和CD8单克隆抗体研究了CD3＋、CD4＋和CD8＋B淋巴细胞在鸡直肠中的出现、迁移、组织定位分布以及数量变化规律等一系列发育过程。T淋巴细胞均在雏鸡出壳后7日龄时出现。在定位分布变化上,出壳后1～4日龄时,T淋巴细胞数量没有明显增加,7日龄时,CD4＋大量分布在肠绒毛皮下固有层中,少量分布在黏膜肌层和黏膜固有层中,CD3＋分散分布在黏膜肌层和黏膜固有层中,极少数的CD8＋出现在黏膜肌层中。随着日龄的增长,T淋巴细胞的数量持续增多,多数位于黏膜固有层,雏鸡生长至21日龄时,T淋巴细胞的数量维持稳定,其中数量以CD4＋细胞最多,CD3＋细胞次之,CD8＋细胞最少。鸡出壳后初期直肠的体液免疫逐渐增强,并在21日龄时达到成熟水平。     

H9N2亚型禽流感流行株灭活疫苗种毒的筛选

为研究中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡免疫水平的影响,本实验采用流式细胞技术检测柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血CD4^＋T细胞亚群,以及CD8^＋T细胞亚群数目的动态变化。结果表明,接种球虫后,     

刺五加多糖对雏鸡脾脏中CD4+ 和CD8+T淋巴细胞定位分布的影响

为了研究刺五加多糖（ASPS）对雏鸡脾脏中CD4+和CD8+ T淋巴细胞定位分布的影响,从组织学角度评价ASPS对脾脏的免疫调节作用,试验将1日龄海兰褐公雏饲养至7日龄时选取150只,随机分为3组：空白对照组、ASPS低剂量组（ASPSL）和高剂量组（ASPSH）,每组50只,所有组每天注射1次,连续注射3天。免疫后的第7、14、21和28天分别取其脾脏制作冰冻切片,采用免疫组织化学方法检测CD4+和CD8+ T淋巴细胞的定位分布。结果显示,与空白对照组比较,免疫注射后21天和28天时ASPSL组和ASPSH组CD4+ T淋巴细胞的数量均显著增加（P<0.05）,而且ASPS能够促进红髓中CD4+ T淋巴细胞向动脉周围淋巴鞘迁移,从而使单个动脉周围淋巴鞘面积较对照组明显增加,而ASPS对脾脏中CD8+ T淋巴细胞的数量和分布无明显影响。由此可知,ASPS能够通过影响脾脏中CD4+ T淋巴细胞的定位分布发挥免疫调节作用,这对于进一步揭示ASPS的免疫调节机制具有重要意义。     

vMDV感染鸡CD^4＋与CD^8＋T细胞动态变化

人工感染１日龄ＳＰＦ雏鸡马立克氏病强毒株（ｖＭＤＶ）,在不同的感染期,以流式细胞仪分析感染鸡脾脏和外周血淋巴细胞中ＣＤ４＋和ＣＤ８＋细胞的动态变化。结果表明,感染鸡脾脏和外周血中ＣＤ８＋Ｔ细胞异常增高,而ＣＤ４＋Ｔ细胞表现为暂短的升高,其后迅速下降。ＣＤ４＋与ＣＤ８＋Ｔ细胞的这种异常变化是ｖＭＤＶ感染雏鸡后Ｔ细胞表型变化的重要特征之一。