疱疹病毒引起内质网应激/未折叠蛋白反应研究进展

内质网是真核细胞内蛋白质折叠及翻译后修饰的主要场所,还参与调控Ca2+和脂类物质储存合成,具有重要生理功能。疱疹病毒是一类具有囊膜的DNA病毒,其表面糖基化囊膜蛋白的合成加工依赖于内质网,在病毒复制过程中,大量合成的糖基化囊膜蛋白在内质网内过度堆积则会引起内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）,进而发生未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）。某些疱疹病毒可能已经进化出调控UPR的机制,为复制过程创造最佳环境,它们在宿主细胞内复制时,会引起相关内质网UPR信号级联反应,如细胞损伤、炎症反应、细胞凋亡等。综述了内质网应激/未折叠蛋白（ERS/UPR）对病毒的反应机制,从Ⅰ型单纯疱疹病毒、伪狂犬病病毒、马立克病病毒、鸭肠炎病毒和其他疱疹病毒等感染引起ERS分子机制及相关信号通路进行阐述,以期为疱疹病毒相关疫苗和药物作用靶点的研发提供理论依据。     

内质网应激与病毒感染(综述)

内质网在细胞内负责蛋白质和脂类合成、加工及成熟。当病毒感染细胞时,也同样会利用内质网完成病毒本身蛋白质合成。同时,大量病毒蛋白堆积,会诱发内质网的应激反应,随后内质网调控各种信号通路维持细胞稳态与生命体的整体利益,进而引起细胞自噬及凋亡、代谢综合征。有些病毒会通过改变对自身复制不利应激通路的蛋白表达,同时,维持对自身有益的方面来加强病毒本身的复制。本文对内质网应激和未折叠蛋白反应信号通路及对一些病毒感染与内质网应激的相互作用和一些病毒感染导致的代谢综合征进行简要综述,总结了关于内质网应激与病毒感染的最新研究成果,旨在为内质网应激有关的抗病毒感染研究提供思路。     

猪成熟脂肪细胞产生的胰岛素抵抗与应激

 猪脂肪细胞内环境的稳定在脂类代谢过程中起着重要作用。在肥胖等疾病发生过程中,成熟脂肪细胞面临由于能量过剩、炎性反应等造成的内质网应激,导致由于脂肪细胞负荷过重而致内环境稳定的破坏,从而产生胰岛素抵抗。本文就近年来关于猪脂肪细胞应激导致胰岛素抵抗的最新研究进展进行综述,为了解成熟脂肪细胞应激与胰岛素抵抗产生的机制提供参考。     

内质网应激在骨骼肌中的功能研究进展

内质网是真核生物中一类参与调控蛋白质合成、折叠、加工及其质量监控的重要细胞器。当内质网的折叠能力不能满足细胞内新合成的未折叠蛋白需求时,细胞会处于内质网应激状态,激活细胞的未折叠蛋白响应(UPR)。该动态过程对实现细胞的稳态、维持机体的正常生理功能至关重要。近年来的研究表明,内质网应激过程有可能是控制畜禽肉产量的新途径,通过对内质网应激在动物骨骼肌发育中的作用研究,今后有望通过育种、营养等措施,实现提高肌肉产量的目的。对内质网应激在脊椎动物骨骼肌生长发育中的作用及其相关机制做出综述,为提高肌肉产量和全面解析内质网应激信号的生理功能提供理论依据。     

PEDV E蛋白对宿主细胞UPR反应关键蛋白GRP78表达的影响

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)能够引起仔猪的大量死亡,造成重大经济损失.PEDV E蛋白在病毒的出芽以及复制过程中起重要作用.将重组质粒pCMV-Myc-E与真核表达载体pCMV-Myc分别转染HEK-293T和PK15细胞系,验证PEDVE蛋白在宿主细胞的...     

长春新碱激活内质网应激途径诱导人成纤维细胞凋亡的研究

在体外培养人皮肤瘢痕组织成纤维细胞时,用长春新碱(VCR)刺激后,采用TUNEL染色观察成纤维细胞的凋亡情况;用流式细胞技术测定成纤维细胞的凋亡率; Western blot检测细胞凋亡相关蛋白、内质网应激通路相关蛋白的变化,探讨VCR通过内质网应激途径诱导成纤维细胞凋亡。结果表明:细胞经VCR刺激后, TUNEL染色和流式细胞技术检测结果提示在VCR刺激后成纤维细胞明显发生凋亡。Western blot检测显示经VCR处理后成纤维细胞中促凋亡蛋白表达升高,内质网应激标记蛋白和内质网应激信号通道蛋白的表达上升;而内质网通道抑制剂4-苯基丁酸钠盐可有效逆转这一现象。这一研究提示VCR可诱导成纤维细胞凋亡,而这一现象可能是通过激活内质网应激途径而实现的。     

肝细胞胰岛素抵抗模型中PRKCZ的表达及其与胰岛素抵抗的相关性

目的检测肝细胞胰岛素抵抗模型中肝癌HepG2细胞中PRKCZ的表达,并分析其与胰岛素抵抗的关系。方法通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PRKCZ在胰岛素抵抗和正常情况下的表达,生物信息学方法分析PRKCZ与胰岛素信号通路蛋白的相互作用。结果与正常对照组相比,肝细胞胰岛素抵抗模型组中PRKCZ表达量明显下降。蛋白相互作用网络表明PRKCZ与PIK3CA和Akt有直接的相互作用。结论 PRKCZ蛋白可能通过与PDPK1、PIK3CA、Akt1、GSK3B的相互作用,影响胰岛素信号通路PI3K/Akt的正常转导,引起胰岛素抵抗。     

转录因子bZIP60调控植物抗病抗逆的研究进展

未折叠蛋白反应(UPR)在植物的逆境胁迫、病原物侵染、生长发育中发挥重要作用,转录因子bZIP60是UPR信号之一。在明确了拟南芥、水稻、玉米、小麦等内质网应激时需肌醇酶(IRE1)介导bZIP60 mRNA剪接激活的基础上,归纳了bZIP60对逆境和病原物的响应机制,总结了IRE1/bZIP60信号在植物抗病抗逆中的研究进展。正常生长条件下,以前体蛋白bZIP60U的形式跨内质网膜。发生应激时,IRE1识别并剪切bZIP60 mRNA的双茎环结构,产生含转录激活域和核定位信号的活性蛋白bZIP60S,并在细胞核内形成二聚体,结合到应激反应相关基因的启动子,通过上调胁迫应答相关基因提高植株抗性。     

靶向猪内质网应激通路的microRNAs预测与验证

【目的】预测并验证靶向猪内质网应激通路中关键基因的microRNAs(miRNAs),为进一步研究miRNAs对猪内质网应激信号通路调控提供理论基础。【方法】首先利用伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾上皮(PK15)细胞,高通量测序检测差异表达的miRNAs。然后通过TargetScan预测靶向内质网应激通路关键基因ATF6、IRE1、PERK、GRP78、XBP1的miRNAs。构建含有候选miRNAs作用位点的双荧光素酶报告基因重组载体,并分别与miRNA-mimics共转染幼仓鼠肾(BHK-21)细胞,通过测定荧光素酶活性来验证内质网应激通路关键基因与候选miRNAs的靶标关系。然后在PK15细胞中分别过表达候选miRNAs,利用qRT-PCR和Western blot检测候选miRNAs对内质网应激通路关键基因mRNA和蛋白表达的影响。【结果】miRNA测序结果显示,PRV感染后共引起35条miRNAs差异表达。TargetScan预测显示,靶向ATF6、IRE1、PERK、GRP78、XBP1的交集miRNAs为miR-142-5p、miR-145-5p、miR-150和miR-1...     

内质网应激在肺泡上皮间质转分化发生中的作用

目的 探讨衣霉素诱导的内质网应激在肺泡上皮细胞-间质转分化(EMT)中的影响及作用机制.方法 以质量浓度为1.25、2.5、5.0 mg/L的衣霉素(TM)分别处理人肺腺癌上皮细胞A549 24 h,MTT法检测细胞活力;RT-PCR和免疫印迹法检测GRP78、CHOP、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、Smad2/3、转录因子Snail的表达;以5μg/L TGF-β1分别处理A549细胞24 h或48h后,免疫印迹法检测GRP78和p-elF2α的表达.结果 1.25 mg/L的TM处理A549细胞24 h后,GRP78 mRNA和蛋白表达升高,CHOPmRNA表达上调;E-cadherin蛋白表达下降,Smad2/3活化,Snail表达上调.而TGF-β1处理A549 24 h,GRP78和p-elF2α表达均上调.结论 衣霉素诱导的内质网应激可介导A549细胞发生EMT,同时EMT发生过程中伴随着内质网应激的发生.     

熊果酸与胰岛素抵抗研究综述

随着世界经济的快速发展,生活方式的改变,Ⅱ型糖尿病的发病率逐年升高。胰岛素抵抗作为Ⅱ型糖尿病的显著特征,成为研究的热点。熊果酸属于五环三萜类化合物,具有多种生物学效应。近来研究发现,熊果酸可以通过降低血糖、调节血脂、清除体内自由基、保护胰腺β细胞,缓解机体的胰岛素抵抗,从而具有医药开发潜力。     

坦布苏病毒感染诱导雏鸭体内未折叠蛋白反应

[目的]检测坦布苏病毒在雏鸭体内诱导未折叠蛋白反应的信号通路(PERK、IRE1和ATF6),为揭示坦布苏病毒致病机制提供理论基础.[方法]取1日龄SPF雏鸭,腹腔接种坦布苏病毒(JS804株),于接种后12、24、36和48 h从对照组和攻毒组各取5只剖杀,分别取肝脏、心脏和脑组织,利用组织总RNA提取试剂盒提取各个...     

肝细胞胰岛素抵抗模型中RhoA的表达及其与胰岛素抵抗的相关性

目的检测RhoA在肝细胞胰岛素抵抗状态下表达量的变化,并对RhoA与胰岛素抵抗的相关性进行分析。方法采用蛋白印迹技术检测RhoA在正常对照组和肝细胞胰岛素抵抗组的表达差异,采用生物信息学方法对RhoA与胰岛素信号通路相关蛋白的相互作用进行分析。结果肝细胞胰岛素抵抗组中RhoA表达显著高于正常对照组(P0.05)。蛋白质相互作用分析表明RhoA直接与PIK3CA、ROCK1和PTEN相互作用。结论 RhoA可能通过与PIK3CA、ROCK1和PTEN的相互作用,影响胰岛素信号通路PI3K/AKT的正常转导,引发胰岛素抵抗。     

胰岛素抵抗与高血压及脑卒中的关系分析

目的：了解胰岛素抵抗（IR）与高血压、脑卒中之间的关系。方法：急性脑卒中患者68例根据病变性质分为脑梗死组（A组）和脑出血组（B组）,同期单纯高血压患者30例作为（高血压组（C组）、健康体检者30例作为对照组（D组）。检测4组的空腹血糖（FPG）、胰岛素（FINS）、总胆固醇（CH）和甘油三酯（TG）水平。结果：A、B两组的FINS显著高于D组（P〈0．01）,其腋岛素敏感指数（ISI）显著低于D组（P〈0.01）,C,D两组的FINS、ISI差异有统计学意义（P〈0．01或0．05）。结论：高血压并急性脑卒中以及单纯高血压均存在IR,以前者尤为明显;IR为脑卒中发生的重要危险因素之一。     

甲状腺功能亢进症患者糖代谢及胰岛素抵抗和胰岛素分泌功能的变化

目的:探讨甲状腺功能亢进症(甲亢)患者糖代谢及胰岛β细胞分泌功能、胰岛素抵抗的变化及意义。方法:对甲亢患者72例行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素释放试验,并测定糖化血红蛋白(HbA1C)、血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)水平。经抗甲状腺药物治疗9～12月后复查以上指标,分别计算胰岛素敏感指数(ISI)、胰岛素抵抗指数(HO-MA-IR)、胰岛β细胞分泌功能指数(HOMA-IS)。结果:甲亢合并糖代谢异常者占52.78%(38/72),其中,糖耐量减低(IGT)占34.72%(25/72),空腹血糖受损(IFG)占6.94%(5/72),达糖尿病标准者占11.11%(8/72);甲亢组的餐后2h血糖(2hPG)、HbA1C及HOMA-IR指数显著高于正常对照组(P<0.05),而ISI、HOMA-IS低于对照组(P<0.05);经治疗甲状腺激素恢复正常以后,糖调节受损(IGR)中86.67%(26/30)的患者的血糖及HbA1C恢复正常;前后比较其2hPG、HbA1C及HOMA-IR明显下降(P<0.05),而ISI、HOMA-IS升高(P<0.05)。...     

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经功能及内质网应激IRE1α-XBP-1-CHOP通路的影响

目的 探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy,DPN）大鼠内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ER stress）IRE1α-XBP-1-CHOP通路的影响。方法 建立DPN大鼠模型,设置空白对照组（Control）、模型对照组（Model）、氧化三甲胺组（TMAO）、糖络宁低剂量组（LTLN）和糖络宁高剂量组（HTLN）,分别灌胃给药12周。采用放射免疫试剂盒测定稳态胰岛素抵抗指数;采用透射电镜和劳克坚劳蓝染色观察坐骨神经结构;测定鼠尾热痛阈值、神经传导速度和蛋白基因产物9.5（protein gene product 9.5,PGP 9.5）蛋白的表达并检测周围神经功能;采用Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP 78）、X盒结合蛋白1（X-box binding protein1,XBP-1）、凋亡蛋白C/EBP同源蛋白（CCAAT/enhancer binding protein Homologous protein,CHOP）、B细胞淋巴瘤-2（B cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）和磷酸化真核翻译起始因子2α（phospho-ukaryotic translation initiation factor 2α,P-eIF 2α）的蛋白表达;通过免疫荧光组织化学法检测肌醇激酶1（inositol requiring enzyme1α,IRE 1α）、生长停滞及DNA损伤基因34（growth-arrest and DNA damage-inducible gene 34,GADD 34）和内质网氧化蛋白（endoplasmic oxidoreductin-1-like,Ero1α）指标。结果 与模型组比,糖络宁高、低剂量组能够有效改善坐骨神经的结构和功能,并能够影响内质网应激IRE1α-XBP-1-CHOP凋亡通路提高GRP 78、Bcl-2和P-eIF 2α的表达（P<0.05）,降低P-IRE1α、XBP-1、CHOPGADD 34、Bax和Ero1α的表达（P<0.05）。结论 糖络宁能够通过抑制ER stress中IRE1α-XBP-1-CHOP凋亡途径相关蛋白的表达,从而减轻ER stress诱导的细胞凋亡,改善坐骨神经的结构和功能从而防治DPN。     

FMO3调节NEFA介导的犊牛原代肝细胞内质网应激

内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)与许多代谢性疾病有关,比如胰岛素抵抗、脂肪肝等营养代谢性疾病。脂肪肝是围产期奶牛常见多发的营养代谢性疾病,严重危害着奶牛养殖业的发展。含黄素单加氧酶3(Flavin containing monooxygenase,FMO3)是近年来发现的与内质网应激有密切联系的调节分子。因此,我们推测FMO3有可能参与调节奶牛的内质网应激过程,从而影响脂质代谢。试验通过体外培养犊牛原代肝细胞感染FMO3过表达和低表达腺病毒载体,检测FMO3过表达和低表达对NEFA介导的犊牛原代肝细胞内质网应激的影响,以明确FMO3对奶牛肝细胞内质网应激的调节作用。结果发现,FMO3过表达腺病毒载体明显增加了NEFA介导的奶牛肝细胞内质网应激相关因子的mRNA表达水平,低表达腺病毒明显降低了NEFA介导的内质网应激相关因子的mRNA表达水平,这为阐明奶牛内质网应激的发病机制提供了一定的理论依据。     

内质网小分子量热激蛋白的研究进展

热激可以导致热激蛋白的产生,包括产生由核基因编码的内质网小分子量热激蛋白。内质网小分子量热激蛋白是热激蛋白超家族成员,含有2个保守区域和内质网滞留序列;当植物受到内质网胁迫时,内质网小分子量热激蛋白能够保护内质网;对内质网小分子量热激蛋白与植物的耐热性、耐冷性关系进行了初步分析。     

实验性肝硬化大鼠胰岛素抵抗的研究

临床研究发现肝硬化患者可出现胰岛素抵抗。针对这一发现,利用四氯化碳毒性肝硬变模型,进一步研究其葡萄糖耐量及血胰岛素水平。研究发现：肝硬变大鼠出现胰岛素抵抗,但肝硬化程度与血糖水平及血中胰岛素水平无明显相关。