家蚕细胞色素C基因的克隆及其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放

 【目的】细胞色素C是线粒体凋亡路径上的关键因子,通过家蚕细胞色素C基因的克隆和其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放研究,为家蚕细胞凋亡的研究奠定基础。【方法】利用生物信息学和分子生物学方法克隆家蚕细胞色素C基因,通过紫外线照射诱导家蚕细胞凋亡,应用流式细胞仪和Western-blotting检测家蚕凋亡细胞的线粒体膜电位变化和细胞色素C的释放。【结果】在家蚕中克隆了一个含有细胞色素C保守结构域的同源基因,该基因cDNA长570 bp,有3个外显子,开放阅读框（open reading frame,ORF）长324 bp,编码108个氨基酸,存在参与细胞凋亡时与下游凋亡蛋白酶激活因子（Apaf－1）相互作用的保守关键位点;紫外线诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1凋亡后12 h,细胞线粒体跨膜电位明显下降,同时检测到了细胞色素C由线粒体向细胞质释放。【结论】在家蚕细胞凋亡中可能存在细胞色素C由线粒体释放的路径。     

Etoposide通过线粒体路径诱导Hela细胞凋亡

目的研究Etoposide诱导Hela细胞凋亡的分子机制.方法 Etoposide处理含有10%胎牛血清DMEM培养液培养的Hela细胞;Caspase-3活性检测试剂盒检测Etoposide处理Hela细胞Caspase-3活性;激光共聚焦显微镜和Western blot技术检测细胞色素C从线粒体的释放.结果 Etoposide能够导致Hela细胞凋亡;Etoposide处理Hela细胞内的Caspase-3活性增加;Etoposide诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质.结论 Etoposide通过线粒体路径诱导Hela细胞凋亡.     

昆虫细胞凋亡的线粒体通路研究进展

介绍了哺乳动物和一些代表昆虫的线粒体凋亡途径研究进展,特别是与线粒体途径密切相关的凋亡调控因子,如细胞色素C,caspases家族,Bcl-2家族等的功能作用,阐述了线粒体在昆虫细胞凋亡中的作用,为进一步研究昆虫细胞凋亡机制以及发展以昆虫细胞凋亡因子为靶标的特异性杀虫剂提供理论基础。     

热激诱导番茄果实细胞色素C的释放

细胞程序化死亡(Programmed Cell Death,PCD)在植物生长发育及胁迫反应过程中起着重要的作用。线粒体中细胞色素C的释放是植物发生PCD的早期特征之一。番茄果实作为一种模式植物在热胁迫过程中有许多抗逆反应。试验优化了番茄果实线粒体蛋白和细胞质蛋白的提取及Western杂交检测技术,并检测到番茄果实经热激处理后细胞色素C从线粒体释放到细胞质,为番茄果实PCD的深入研究奠定基础。     

植物细胞凋亡机理的研究

以2-甲基萘醌诱导胡萝卜愈伤组织细胞的原生质体,通过DNA电泳和蛋白质印迹,证明了胡萝卜愈伤组织细胞原生质体发生凋亡过程中有典型的DNA梯形条带出现;随着诱导时间的延长,细胞色素C不断从线粒体释放到胞浆中;核蛋白PARP也随着诱导时间的延长不断降解,并且受caspase的特异抑制剂DEVD所抑制。该实验结果表明植物细胞凋亡过程中有caspase参加,并受细胞色素C的影响。     

细胞凋亡对宰后肌肉嫩化作用机理的研究进展

嫩度是决定肉食用品质的重要指标。宰后肉的嫩度发生不连续变化,严重降低了消费者的购买意愿,因此阐明宰后嫩化机理一直是肉品科学领域的研究热点。自“凋亡”的概念引入至宰后肌肉嫩化过程后一直广受关注,动物被屠宰放血后,活性氧（reactive oxygen species,ROS）大量累积,ATP（adenosine triphosphate）逐渐耗尽,必然导致细胞死亡。宰后肌细胞死亡和肌肉嫩化都是在一系列调控因子作用下激活肌肉内源酶,并由内源酶水解蛋白质破坏细胞结构,因此这两个生化过程被认为高度相关。本文综述了宰后肌细胞主要以凋亡的形式死亡,分析了除凋亡外,宰后早期产生少量ROS时细胞会通过自噬启动自身防御系统,宰后后期ATP逐渐耗尽肌细胞可能从凋亡转变为坏死;明确了线粒体通路是宰后肌肉中细胞凋亡酶激活的关键路径,线粒体死亡因子释放是细胞内死亡级联反应的总开关,其开放状态直接决定着细胞以何种途径进行死亡,并进一步从线粒体膜通透化和内膜嵴重构两方面,讨论了宰后线粒体损伤诱导凋亡因子的释放机理;综述了线粒体损伤变化及其对嫩化过程的影响,并从线粒体通过参与能量代谢影响肌肉pH以及通过释放凋亡因子调控细胞凋亡酶活性两方面分析了其潜在机理;探讨了宰后肌肉线粒体与内质网间相互作用以影响Ca²⁺信号传导以及细胞凋亡过程,或与溶酶体相互作用,破坏溶酶体膜稳定性,使其释放组织蛋白酶以激活线粒体Bax和Bid而加速线粒体膜通透性;综述了细胞凋亡酶在宰后早期被激活,并参与部分肌原纤维蛋白的有限降解,但随着宰后时间的延长,ATP逐渐耗尽等因素导致细胞凋亡酶失活,因此细胞凋亡酶只参与宰后早期的嫩化过程。综述内容可为完善宰后肌肉嫩化过程提供理论参考。     

线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素致PC12细胞凋亡中的作用

探讨线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素诱导PC12细胞凋亡中作用.取对数生长期PC12细胞,用含0、62.5、125、250 μg· mL-1硫酸黏菌素DMEM培养液,作用24 h,采用Hoechst33258荧光染色法检测PC12细胞凋亡,Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bax、Bcl-2蛋白表达含量,试剂盒检测Caspase-3活性.与对照组相比,125、250 μg· mL-1硫酸黏菌素剂量组细胞PC12细胞Cyt-C、Bax蛋白表达量、Caspase-3活性显著升高(P＜0.01);Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0.01),具有剂量-效应关系.说明线粒体途径介导PC12细胞凋亡是硫酸黏菌素神经毒性作用机制之一.     

线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素致PC12细胞凋亡中的作用

探讨线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素诱导PC12细胞凋亡中作用。取对数生长期PC12细胞,用含0、62.5、125、250μg.mL-1硫酸黏菌素DMEM培养液,作用24 h,采用Hoechst33258荧光染色法检测PC12细胞凋亡,Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bax、Bcl-2蛋白表达含量,试剂盒检测Caspase-3活性。与对照组相比,125、250μg.mL-1硫酸黏菌素剂量组细胞PC12细胞Cyt-C、Bax蛋白表达量、Caspase-3活性显著升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),具有剂量-效应关系。说明线粒体途径介导PC12细胞凋亡是硫酸黏菌素神经毒性作用机制之一。     

电离辐射与线粒体DNA的变异

线粒体DNA(mitchondrial DNA,mtDNA)是裸露的双链环状DNA分子结构．缺少组蛋白外衣的保护,复制快速．缺乏校读功能以及缺乏有效的DNA修复系统,极易发生突变。而电离辐射作为一种致DNA损伤的因素．现已发现它可以诱导线粒体DNA的突变,其中包括4977bp的缺失、点突变、插入突变等。在凋亡调节诸多通路中,线粒体在电离辐射诱导的细胞凋亡通路中起中心调控作用。各种死亡信号通过Bcl-2家族蛋白或直接诱导线粒体膜的通透性的改变、细胞色素C释放和caspases激活,最终引起细胞凋亡。线粒体膜的通透性改变的机制．目前还未完全明了。本文就电离辐射与线粒体DNA的变异以及线粒体DNA变异与凋亡的关系作一简要综述。     

半边旗二萜类成分PAG通过ROS诱导的线粒体凋亡克服肝癌多药耐药

目的 研究半边旗二萜类成分PAG对人肝癌耐药细胞株增殖与凋亡机制.方法HepG2/ADM细胞用不同浓度(0～75μmol/L)PAG处理24、48、72 h,分别用MTT、流式细胞术、Western blot、DCFH-DA法检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达、活性氧自由基(ROS)水平.结果PAG呈剂量依赖性抑制细胞增殖及caspase 3、PARP和Bcl-2表达,增加G2/M期细胞分布、细胞凋亡、细胞内ROS水平及actived-caspase 3、cleaved-PARP和Bax表达,促进线粒体中细胞色素C释放到胞质;l mmol/L乙酰半胱氨酸可阻断PAG对细胞增殖的抑制作用.结论 半边旗二萜类成分PAG可通过ROS诱导的线粒体凋亡克服肝癌多药耐药.     

细胞凋亡信号传导通路的研究进展

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活靶分子而产生细胞效应,引发细胞凋亡。一般认为,细胞凋亡存在3条主要通路:线粒体通路、内质网通路和死亡受体通路,各通路间互相联系,共同调节细胞凋亡。     

镉代谢分子机制研究进展

镉是一种人体非必需的重金属元素,镉的吸入会对人体产生许多不利影响,包括细胞癌变和凋亡等。现有的研究对镉的吸收、镉引起细胞毒性等领域的生化、分子机制做了大量工作,但对于镉在体内代谢的具体分子机制还不是很明晰,需要进一步阐释。该文讨论了镉的吸收和镉在体内的转运储存机制。并对镉与氧化应激,镉引起细胞凋亡的信号通路变化等研究进展进行了综述。     

哺乳动物卵巢中的细胞凋亡及其调节

细胞凋亡是近几年细胞生物学研究的热点。卵巢中发生的生殖细胞减少、卵泡闭琐和黄体退化都与细胞凋亡密切相关。就上述三个过程中的细胞凋亡进行了概述 ,并简要介绍了新近发现的几种因素对卵巢细胞凋亡的调节。     

病毒感染对Ⅰ型和Ⅱ型细胞凋亡影响的研究

细胞凋亡是多基因严格控制的过程如Bcl-2家族、胱冬酶家族、c-myc、P53等.随着分子生物学技术的发展,人们对多种细胞凋亡的过程有了相当的认识,但是病毒家族对机体感染过程中对凋亡发生和抑制的过程确切机制尚不完全清楚.该研究将集中阐述与经典的细胞凋亡和副凋亡相关的信号转导途径和病毒蛋白参与其中的多种调节因子的作用机理.     

Critical role of cytochrome c1 and its cleavage in porcine reproductive and respiratory syndrome virus nonstructural protein 4-induced cell apoptosis via interaction with nsp4

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) actively induces cell apoptosis both in vitro and in vivo,which can contribute critically to viral pathogenesis.Previous studies have shown that the PRRSV nonstructural protein 4(nsp4) is an important mediator of this process,but the underlying molecular details remain poorly understood.In this study,we found that the PRRSV nsp4 interacted with the mitochondrial inner membrane protein cytochrome c1(cyto.c1) and induced its proteolytic cleavage.Interestingly,the cleaved N-terminal fragment of cyto.c1 was found to exert apoptotic activity,which could cause mitochondrial fragmentation,resulting in apoptotic cell death.And RNA interference(RNAi) silencing experiments further confirmed the crucial role which cyto.c1 played in nsp4-and PRRSV-induced cell apoptosis.Thus,our data provide an important piece of mechanistic clues for PRRSV-induced cell apoptosis and also elucidate a novel mechanism for the 3 C-like proteases in this finding.     

Monoclonal antibody-mediated tumor regression by induction of apoptosis

To characterize cell surface molecules involved in control of growth of malignant lymphocytes, monoclonal antibodies were raised against the human B lymphoblast cell line SKW6.4. One monoclonal antibody, anti-APO-1, reacted with a 52-kilodalton antigen (APO-1) on a set of activated human lymphocytes, on malignant human lymphocyte lines, and on some patient-derived leukemic cells. Nanogram quantities of anti-APO-1 completely blocked proliferation of cells bearing APO-1 in vitro in a manner characteristic of a process called programmed cell death or apoptosis. Cell death was preceded by changes in cell morphology and fragmentation of DNA. This process was distinct from antibody- and complement-dependent cell lysis and was mediated by the antibody alone. A single intravenous injection of anti-APO-1 into nu/nu mice carrying a xenotransplant of a human B cell tumor induced regression of this tumor within a few days. Histological thin sections of the regressing tumor showed that anti-APO-1 was able to induce apoptosis in vivo. Thus, induction of apoptosis as a consequence of a signal mediated through cell surface molecules like APO-1 may be a useful therapeutic approach in treatment of malignancy.     

凋亡与自噬性死亡

细胞凋亡是一种由基因控制的自主性死亡过程,而自噬也被认为是非凋亡形式的程序性细胞死亡的方式。本文综述了凋亡、自噬的特征、机制及其联系。     

乐果对大鼠肝细胞凋亡作用的研究

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(染毒终浓度分别为0、3、10、30、100和300 μmol·L-1),染毒12、24 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(△Ψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,研究乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响.结果表明,肝细胞染毒12和24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3 μmol·L-1组外,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01),且呈时间-剂量效应.3 μmol·L-1组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P<0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+度逐渐下降;细胞内ROS水平在3-100 μmol·L-1范围内随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300 μmol·L-1组略有下降,除3 μmol·L-1组外,与对照组相比均差异极显著(P<0.01);△Ψm除24h 300 μmol·L-1组外均出现持续下降.表明低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和△Ψm可能参与了这一过程.     

拟黑多刺蚁卵子发生的观察

利用HE染色方法对拟黑多刺蚁卵子发生进行显微研究。结果发现,拟黑多刺蚁卵子发生可以分为3个时期11个阶段,即卵母细胞分化期、卵母细胞生长期和卵母细胞卵黄形成期。在卵子发生的整个过程中,卵母细胞、滋养细胞及滤泡细胞形态均有明显变化;在卵母细胞生长及卵黄形成期,滋养细胞核内的多核仁现象、灯刷染色体与旺盛的物质合成有关;卵母细胞本身也合成一些物质;滤泡细胞参与卵黄蛋白的合成,并为外源性卵黄蛋白提供通道。因此,卵母细胞内卵黄蛋白的形成是自体合成和外源合成同时并存;滤泡细胞还参与了卵黄膜及卵壳的形成。并发现,拟黑多刺蚁与果蝇卵子发生有相似的卵母细胞凋亡现象,主要发生在卵黄形成前期,这种凋亡可能是由于环境因素的影响,即生物对不良环境的适应性对策。