小鼠Toll样受体9基因的克隆、表达及其活性的初步鉴定

从小鼠巨噬细胞中提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增小鼠Toll样受体9(mTLR9)cDNA,构建真核表达质粒p3XFLAG-CMV-7.1-mTLR9,转染293T细胞,利用Western Blotting检测蛋白表达,并用双荧光素酶报告基因系统检测mTLR9对其介导的信号通路下游转录因子NF-κB转录活性影响.结果表明,本试验成功克隆到小鼠TLR9cDNA,构建的重组体转染细胞后表达的蛋白分子质量与预计相符,并能激活下游转录因子NF-κB的转录活性.     

结肠癌组织中MIF、VEGF-C和MMP-9的表达及其临床意义

目的探讨结肠癌组织中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、血管内皮生长因子C（VEGF-C）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达以及与肿瘤分期、分化程度和转移等之间的关系。方法应用免疫组织化学法检测122例结肠癌组织中MIF、VEGF—C和MMP．9蛋白表达情况,并结合临床病理进行分析。结果结肠癌组织中MIF、VEGF-C和MMP-9的阳性表达率显著高于远癌肠黏膜的表达（P〈0．01）;结肠癌MIF、VEGF-C和MMP-9的表达与Dukes分期、组织分化程度及有无淋巴结转移有关（P〈0．05）;MMP-9、VEGF-C共同表达与其他组相比淋巴结转移率明显增高（P〈0．05）。结论MIF、VEGF—C和MMP-9蛋白在结肠癌肿瘤形成、恶性进展和浸润、转移等方面起着重要作用,检测这些指标对进一步了解结肠癌细胞的生物学行为、判断预后具有重要意义。     

GPA对CCl4肝损伤模型小鼠肝、脾组织作用的研究

为了研究大蒜多糖(GPA)对机体组织的药理作用,以小白鼠为研究对象,试验分5组:正常对照组、模型对照组及3个治疗组,除正常对照组外,其他4组采用CCl4灌胃的方法建立小鼠化学性肝损伤模型,3个治疗组分别用100、200、400 mg/kg不同浓度大蒜多糖对小鼠进行治疗,给药7d后,摘取小鼠肝脏、脾脏,进行组织学观察,并...     

纳米氧化锌对小鼠B16黑素瘤细胞生长和分化的影响

为评价纳米氧化锌(Zn O NPs)在皮肤病治疗和化妆品应用方面的生理毒性,以小鼠B16黑素瘤细胞为细胞模型,研究15、30、90 nm下Zn O NPs对B16细胞的体外生长和分化的影响及其作用机制。以不加纳米氧化锌和加体相氧化锌的处理分别作阴性、阳性对照。结果表明,15、30 nm,体相Zn O NPs处理与B16细胞共培养作用3 d,当Zn O NPs为4μg/m L以下时,Zn O NPs并未明显抑制细胞生长,引起细胞死亡;当Zn O NPs浓度大于8μg/m L时,明显抑制细胞生长。随着Zn O NPs浓度增加,细胞体积变小,细胞间隙变大,黏附性降低,细胞变圆,从培养瓶底脱落死亡。Zn O NPs诱导细胞中酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP-1)、酪氨酸相关酶相关蛋白2(TYRP-2)的mRNA表达量升高,导致细胞内酪氨酸酶活性和黑色素生成水平增高,促进了B16黑素瘤细胞的分化。相同Zn O NPs浓度下,15 nm Zn O NPs比30、90 nm Zn O NPs作用明显。     

小鼠RPL9基因克隆及组织表达差异性研究

根据已报道的小鼠核糖体蛋白L9基因( RPL9)序列设计PCR引物,克隆RPL9基因,并以β-actin为内参基因,采用相对荧光定量RT-PCR方法,检测、分析RPL9基因mRNA在小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑及脂肪7个组织中表达量的差异。结果表明,成功克隆出RPL9基因序列全长,该基因在小鼠的7个组织中均有不同程度的转录表达,其中,在脂肪中的表达量最高,在肾、脾和脑中的表达量较高,在心、肝中的表达量较低,在肺中表达量最低。     

小鼠FGF9在大肠杆菌中的表达与纯化

为了建立小鼠FGF9的原核表达体系,获得纯化的FGF9重组蛋白,采用PCR技术扩增FGF9,并将其克隆入原核表达载体pET30a(+)中,经测序验证后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,采用亲和层析技术进行目的蛋白的纯化,并用Western blotting进行了免疫原性验证.测序结果显示插入到载体中的片段与FGF9的天然序列一致,在BL21(DE3)中表达出了可溶性的FGF9重组蛋白,其表达量达到总蛋白的40 %;用镍螯合亲和层析方法获得了纯度大于95 %的FGF9重组蛋白.     

苹果汁对吸烟小鼠肝、肾、肺SOD和MDA的影响

研究苹果汁对吸烟小鼠肝、肾、肺组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的影响。选用昆明种小鼠,随机分成3组,对照组正常饲喂、吸烟模型组吸烟、预防组吸烟后进行苹果汁预防,7 d后检测小鼠肝、肾、肺组织匀浆中SOD活性及MDA含量。结果显示,预防组与正常组相比,肺、肾SOD活性显著升高,肝、肺、肾MDA含量降低达极显著水平;预防组与吸烟模型组相比,肝、肺、肾SOD活性升高达极显著水平,MDA含量则显著下降。     

7个地理种群小鼠TLR9基因的遗传多样性分析

[目的]分析我国7个地理种群小鼠TLR9基因的遗传多样性。[方法]利用PCR技术扩增并测序7个地理种群100个小鼠样品的TLR9基因。使用MEGA 7.0、DnaSP等软件对基因序列进行分析,计算遗传距离、遗传多样性,并构建系统发育树。[结果]获得的TLR9基因片段长度为1 030 bp,位于参与对病原体相关分子模式识别的LRR结构域的编码区,A、T、C、G的平均含量分别为22.9%、22.2%、32.8%和22.0%,各地理种群间碱基含量没有明显差异。通过计算各地理种群间遗传距离及核苷酸多样性发现,这7个地理种群小鼠TLR9基因序列较为保守,并无明显遗传分化。以褐家鼠(NM_198131)作为外群构建系统发育树,其结果与遗传多样性分析相一致。[结论]7个地理种群小鼠TLR9基因遗传多样性较低,具有极高的保守性。     

鸭β-防御素9基因的克隆、组织分布及其原核表达

 【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素9（AvBD9）基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-duck AvBD9,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达;亲和层析纯化蛋白,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因,序列分析表明该基因大小为204 bp,前体肽包括67个氨基酸残基。AvBD9基因在鸭体内广泛分布。SDS-PAGE电泳表明鸭AvBD9基因在大肠杆菌中高效表达,表达的重组鸭AvBD9融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约31 kD。重组鸭AvBD9蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性,在-70～100℃或pH 3～10处理30 min后仍有抗多杀性巴氏杆菌作用。【结论】鸭AvBD9基因为204 bp,编码67个氨基酸残基,在鸭组织中广泛分布。重组鸭AvBD9蛋白基因在大肠杆菌中高效表达,该重组蛋白具有广谱的抗菌活性,对温度和酸碱性有较高的稳定性。     

仔猪Galectin-9基因在断乳前、后胃肠道组织中的表达差异

依据电子延伸序列克隆猪Galectin-9基因,研究其在仔猪消化道中的分布,并采用荧光定量PCR检测该基因在断乳前、后仔猪胃肠道组织中的表达差异;结果:成功克隆出了猪Galectin-9基因,并被GenBank收录(Accession. FJ428535),该基因在仔猪消化道中广泛分布,与断乳前相比,断乳后Galectin-9的mRNA在胃、空肠组织中的表达量显著下调(P<0.05),而在十二指肠、回肠、盲肠和结肠中的表达与对照组相比差异不显著(P>0.05)。     

Beclin1 mRNA在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨自噬相关基因Beclin1在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 RT-PCR检测50例鼻咽癌、20例癌旁黏膜和15例鼻咽黏膜慢性炎症组织中Beclin1表达,并分析其与临床分期、病理组织类型和转移的关系。结果鼻咽癌、癌旁黏膜、慢性炎症组织中,Beclin1阳性表达率分别为48.0%、85.0%、93.3%,mRNA相对表达量分别为（0.658±0.158）、（0.802±0.086）、（0.809±0.097）;鼻咽癌组织中Beclin1阳性表达率及mRNA相对表达量均显著低于癌旁黏膜及慢性炎症组织（P〈0.05或0.01）。Beclin1 mRNA表达与鼻咽癌临床分型、组织学分型、淋巴结转移有关（P〈0.01）。结论 Beclin1基因在鼻咽癌组织中表达下调,提示自噬活性的改变可能对鼻咽癌的发生、发展起一定作用。     

nm23基因在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的 :探讨nm2 3基因表达与宫颈癌转移及预后的关系。方法 :采用免疫组化方法 ,检测经病理证实的 30例正常宫颈上皮组织 (对照组 )及 5 5例宫颈癌组织 (实验组 )中nm2 3的表达水平。结果 :(1)在正常宫颈组织中 ,2 9例呈nm2 3高表达 (96 .7% ) ,仅 1例呈nm2 3低表达 (3.3% ) ,在宫颈癌组织中 19例呈nm2 3高表达 (34.4 % ) ,36例为nm2 3低表达 (6 5 .6 % ) ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。 (2 )nm2 3在宫颈癌临床分期晚、细胞分化程度差、有转移、复发及预后差的患者中表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :nm2 3的表达可作为反映宫颈癌恶性潜能的指标之一。     

阿朴酯颗粒剂对小鼠肝肾组织毒性、血清炎性因子及体液免疫水平的影响

【目的】观察长期添加阿朴酯颗粒剂对昆明小鼠肝脏、肾脏组织结构与功能及其体液免疫水平的影响,系统评价其安全性,为阿朴酯在畜禽生产中的科学应用提供参考依据。【方法】通过急性毒性试验测定阿朴酯颗粒剂对昆明小鼠的半数致死量（LD₅₀）,然后设50% LD₅₀（1.4 g/kg）和80% LD₅₀（2.2 g/kg）作剂量组,以等量生理盐水为空白对照。单次灌胃1.4 g/kg阿朴酯悬浊液后,于灌胃后第4、12、36和60 h及第7和14 d进行眼球采血,用于测定血常规指标;按1.4和2.2 g/kg的剂量分别连续灌胃阿朴酯悬浊液21 d后,分析小鼠体重增重、血清生化指标、尿常规指标及免疫指标的变化情况,并采集小鼠肝脏和肾脏制作石蜡切片进行组织学观察。【结果】阿朴酯颗粒剂对昆明小鼠的LD₅₀为2.74 g/kg,95%置信限为2.69~3.41 g/kg。依据WHO毒性分级标准,阿朴酯颗粒剂属低毒级物质。按1.4 g/kg的剂量单次灌胃阿朴酯悬浊液后,昆明小鼠血液中性粒细胞数量在灌胃后第4 h显著升高（P<0.05,下同）,白细胞总数在灌胃后第12和36 h显著升高,淋巴细胞数量在灌胃后第4和12 h极显著升高（P<0.01,下同）,红细胞总数和平均红细胞血红蛋白含量在灌胃后第36 h显著升高。以2.2 g/kg的剂量连续灌胃阿朴酯悬浊液21 d后,昆明小鼠的体重增重和平均日增重极显著降低,血清中的碱性磷酸酶活性和尿素含量极显著升高、而谷草转移酶活性和肌酐含量极显著降低;尿液中白细胞数量及蛋白、微白蛋白和酮体含量显著上升;肝脏黄染、淤血,肝索与肝窦紊乱不清,肝细胞碎裂溶解,发生肿胀或坏死;肾脏明显肿大、黄染,肾小体破损消亡,髓质部呈弥漫性出血;血清免疫细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-10水平显著或极显著升高,而免疫球蛋白IgM和SIgA浓度显著下降。【结论】阿朴酯颗粒剂属低毒级物质,但高剂量使用可快速升高血细胞数量,破坏小鼠肝肾组织结构并引起功能障碍,且对体液免疫有抑制作用。因此,建议在家禽生产中不可超量或长期添加,尤其拌料时需保证均匀,避免误食高剂量阿朴酯而造成肝肾功能损伤。     

nm23与p53在皮肤癌中的表达及其临床意义

目的：探讨ｎｍ２３、ｐ５３在皮肤癌中的表达及其临床意义。方法；应用霉卵白素（ＳＰ）免疫组化技术对４１例皮肤癌标本染色。结果：ｎｍ２３阴性表达者肿瘤浸润深度及区域淋巴结转移率明显高于阳性表达者（Ｐ均〈０．０１）；ｐ５３阳性表达者肿瘤浸润浓度及区域淋巴结转移率明显高于阴性表达者（Ｐ均〈０．０５）。结论：ｎｍ２３基因缺失和ｐ５３基因突吕的浸润及淋巴结转移中起重要作用。     

粘附分子CD44v6在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:了解粘附分子CD44v6在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学法(SP法)检测CD44v6在69例宫颈癌组织及20例正常宫颈组织中的表达。结果:正常宫颈组织中的CD44v6呈阴性表达。69例宫颈癌组织中CD44v6的阳性表达率为68.1％(47/69)。CD44v6的阳性表达在不同的病灶大小、临床分期、细胞分化程度及有无淋巴结转移的宫颈癌组织中差异有统计学意义(P<0.05～0.01);在不同的病理类型及年龄的患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论;CD44V6可能在宫颈癌的生长、浸润及转移过程中起重要作用,可望作为反映宫颈癌恶性潜能的新指标。     

子宫内膜癌组织雌激素受体、孕激素受体和PTEN的检测及临床意义

目的了解雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法采用S-P免疫组织化学法对107例子宫内膜癌组织中的ER、PR和PTEN基因表达进行检测,并结合其临床表现结果作统计学分析。结果不同临床分期、组织学分级、肌层浸润深度的子宫内膜癌组织中ER、PR的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01),有或无盆腔淋巴结转移的子宫内膜癌组织中的ER、PR表达差异均无统计学意义(P>0.05);不同组织学分级的子宫内膜癌组织中PTEN表达差异有统计学意义(P=0.05),而不同临床分期、肌层浸润深度及盆腔淋巴结转移情况的子宫内膜癌组织中的PTEN表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论检测ER、PR有助于了解子宫内膜癌的生物学行为,可作为子宫内膜癌术前或(和)术后的治疗参考。     

DHA对小鼠脂肪组织和肝脏生脂及脂解基因转录表达的影响

【目的】探讨二十二碳六烯酸(DHA)对小鼠脂肪组织和肝脏生脂相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白-1c基因(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶基因(FAS),及脂解相关基因激素敏感脂酶基因(HSL)和甘油三酯水解酶(TGH)时序表达的影响。【方法】用不同浓度DHA(6.25和12.5 g/kg)灌胃小鼠,分别于0,1,2,4,8,16和24 h处死,取脂肪组织和肝脏,提取总RNA,半定量(semi-quantitative,SQ)RT-PCR方法检测生脂及脂解基因PPARγ、SREBP-1c、FAS,及脂解相关基因HSL和TGH的时序表达规律。【结果】脂肪组织中DHA均可促进PPARγ、FAS、HSL和TGH基因的转录表达,8 h达到峰值,其后表达量下降;抑制SREBP-1c基因的表达,8 h达到最低,之后上升。肝脏中DHA均可抑制PPARγ、SREBP-1c、FAS和HSL基因的转录表达,且表达量分别于8,8,8和16 h达到最低,之后表达量上升;DHA对TGH的作用不显著(P>0.05)。【结论】DHA通过促进脂肪组织中脂肪分解及抑制肝脏中脂肪合成与分解来调节动物体脂沉积。     

运输胁迫对四指马鲅幼鱼肝脏、鳃和脾脏组织结构的影响

[目的]探究运输胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼肝脏、鳃、脾脏组织结构的影响,提高种苗运输存活率,为其规模化养殖提供技术支持.[方法]以四指马鲅幼鱼为研究对象,分别设对照组(未运输)、混合组(运输,同时添加抗应激混合物)和空白组(运输,不添加任何抗应激剂),抗应激剂为维生素C∶谷氨酰胺=1∶1.混合组和空白组幼鱼经6h运输后分别取样(肝脏、鳃和脾脏),经石蜡切片和HE染色,显微镜下观察测定肝脏、鳃和脾脏的细胞形态、组织结构、生活及生理状态.[结果]对照组幼鱼表现正常,未出现死亡现象,混合组幼鱼的累计死亡率为12.5%,空白组的累计死亡达27.5%.对照组幼鱼的各组织均呈正常形态;混合组幼鱼的肝脏部分区域细胞排列疏松,肝小板结构不清晰;空白组幼鱼的肝脏组织整体失去固有形态,肝小板结构消失不见,大部分细胞核变性呈椭圆形或纺锤形.混合组幼鱼的鳃丝排列混乱,少数鳃小片末端或整体肿胀,血窦内红细胞出现部分堆积现象,线粒体丰富细胞体积变大;空白组的鳃小片整体肿胀,血窦加粗,部分鳃小片因红细胞过多而胀破,线粒体丰富细胞体积变大且数量增多.混合组幼鱼的脾脏白髓区域相对增大,黑色素—巨噬细胞中心数量及大小均有所增加;空白组幼鱼的脾脏组织红髓区域占据大部分,白髓区域相对较少,呈零散分布,巨噬细胞中心减小.[结论]运输胁迫导致四指马鲅幼鱼肝脏、鳃及脾脏组织损伤,抗应激剂混合物虽然在一定程度上起到缓解作用,但并不能完全消除.     

乳腺癌组织中MMP-9、P53的表达和微血管密度的检测及其意义

目的观察乳腺癌细胞中MMP-9、P53的表达及组织中微血管密度与患者腋淋巴结及远处肿瘤转移之间的关系,以探讨它们与乳腺癌生物学行为的关系及机制。方法通过组织化学方法检测MMP-9、P53在肿瘤细胞中的表达,在显微镜下计算肿瘤组织中微血管密度值,观察其与患者腋淋巴结及远处肿瘤转移之间的关系。结果MMP-9主要分布在胞浆,20例乳腺纤维腺瘤细胞均未表达MMP-9,乳腺癌细胞内随同侧腋淋巴结转移量的增多,MMP-9阳性级别增加(P<0.01);P53主要表现为核阳性,20例乳腺纤维腺瘤细胞中18例未表达P53,随同侧腋淋巴结转移量的增多,P53表达级别增加(P<0.01);随同侧腋淋巴结转移量的增多,微血管密度明显增加(P<0.01)。结论肿瘤细胞中MMP-9、P53蛋白的高表达及MVD值可以作为评估患者腋淋巴结转移及其它部位远处转移的重要指标。