IBV感染鸡气管黏膜上皮基底细胞特性研究

【目的】研究IBV感染鸡气管黏膜上皮细胞(Chicken trachea epithelium cells,CTECs)中基底细胞的特性,以进一步揭示IBV感染与α-2,3-唾液酸受体之间的关系。【方法】利用光学显微镜观察、电子显微镜技术、RTPCR方法,对接种IBV的细胞进行观察和检测,研究IBV对基底细胞的感染特征。【结果】与CTECs感染IBV结果相反,单独培养的基底细胞接种IBV后,无明显的形态学损伤和亚细胞结构(溶酶体、细胞核)的损伤,细胞中也检测不到IBV的增殖。【结论】气管黏膜上皮细胞可以被IBV感染,单独的基底细胞不能被IBV感染,提示α-2,3-唾液酸受体是否存在与IBV感染具有重要的关系。     

鸡肺泡上皮Ⅱ型细胞的培养与鉴定

为研究禽流感等敏感病毒及其他致病因子对肺泡上皮Ⅱ型细胞(AEC-Ⅱ)的致病性,建立了鸡AEC-Ⅱ细胞体外培养方法.采用胰蛋白酶和Ⅳ型胶原酶联合消化法时 18 日龄鸡胚肺组织进行消化,经差速离心和免疫黏附,获得了鸡 AEC-Ⅱ细胞,再经纯化、体外培养和碱性磷酸酶染色法鉴定.结果表明,鸡AEC-Ⅱ细胞在接种后18 h开始贴壁进入适应期,细胞为圆形,呈岛屿状生长;接种后 24～72 h,进入对教生长期,细胞为多边形,并融合成单层,胞浆内有明显的颗粒;接种后第 4 天细胞数量达到高峰(1.38 × 105个/mL),并进入稳定生长期,胞浆内颗粒开始减少;接种后6～7 d,细胞进入衰退期,胞浆内颗粒显著减少,细胞逐渐死亡、脱落.另外,4代(F4)之前的AEC-Ⅱ传代细胞贴壁时间早,形态均一,纯度高.说明接种后24～72 h内获得的AEC-Ⅱ原代细胞和F4之前的传代细胞可以供体外试验研究.     

山东省鸡鼻气管鸟杆菌的分离与鉴定

【目的】对山东省鸡鼻气管鸟杆菌进行分离鉴定。【方法】采集山东省不同地区有呼吸道症状的病(死)鸡,进行鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)的分离,根据培养特性及生化试验和玻片凝集试验结果对分离的菌株进行鉴定;应用PCR方法对分离菌株16SrRNA基因的一段保守序列进行扩增,应用琼脂扩散沉淀试验(AGP)对分离菌株的血清型进行鉴定,并对分离株进行药敏试验。【结果】试验共分离到5株ORT,所有分离菌株均能扩增到1条长671bp的特异性片段,而阴性对照菌株的扩增结果为阴性;5株ORT分离菌株可分为3个血清型,其中血清A型3株、血清B型1株、血清D型1株;分离ORT菌株对羟氨苄青霉素、头孢曲松、丁胺卡那、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。【结论】从山东省病死肉鸡中分离鉴定到5株ORT。     

应用流式细胞仪分选中性粒细胞的研究

以外周血为样本,应用FACS Aria流式细胞仪分选中性粒细胞,摸索分选最佳条件。采用分选质控试剂Accudrop Beads和鞘液为材料,在FACS Aria流式细胞仪上,对分选液滴的振荡频率(Freq)、振动幅度(Ampl)和液滴间隔值(Gap)进行调试,摸索分选的最佳设定值。结果表明,喷嘴使用70mm,主液流窗Ampl值设定为5.5,Drop1值为197,Gap值为8,侧液流断点窗液滴延迟值为45.31,2nd值为15,3rd值为7,从白细胞中分选中性粒细胞,纯度可达99%。     

鸡传染性支气管炎病毒在鸡胚肾细胞和气管环培养中的适应性比较

将６株鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分别接种鸡胚肾细胞（ＣＥＫＣ）和气管环培养（ＴＯＣ）。６株病毒无论是否已经适应于鸡胚，都在气管环培养中能引起病变。病毒适应于ＣＥＫＣ，是与病毒在鸡胚和细胞培养上的传代次数有关。分别用ＳＰＦ鸡胚、非免疫鸡胚和普通鸡胚制备的ＴＯＣ测定ＩＢＶ－Ｍ４１株的ＩＤ５０，结果用ＳＰＦ鸡胚和非免疫鸡胚制备的ＴＯＣ测定的ＩＤ５０都获得较高滴度，而在普通鸡胚制备的ＴＯＣ中ＩＤ５０明显低。     

硬腭黏膜移植联合转位皮瓣治疗眼睑基底细胞癌切除后眼睑缺损的临床观察

目的观察硬腭黏膜移植联合转位皮瓣治疗眼睑基底细胞癌切除后眼睑缺损的疗效。方法 25例眼睑基底细胞癌的患者行眼睑基底细胞癌切除,利用硬腭黏膜做睑板,取眼周全厚带蒂皮瓣对眼睑皮肤缺损进行整形修复。结果 25例眼睑皮瓣存活,睑板形成良好,术后外观好,无暴露性角膜结膜炎、睑外翻等并发症。结论采用硬腭黏膜做缺损睑板联合面部带蒂转移皮瓣的手术方法治疗眼睑基底细胞癌切除后缺损疗效确切。     

不同日龄鸡呼吸道黏膜中IgA分泌细胞的分布规律

目的 了解鸡呼吸道黏膜不同时期的免疫状态。方法 选择海兰白鸡鸡胚(18、20 日龄)及不同日龄(1、4、7、14、21、35和56 日龄)雏鸡的鼻、喉、气管和肺脏样品,利用免疫组织化学方法研究IgA⁺分泌细胞的出现、定位分布及数量变化过程。结果 呼吸道各个器官黏膜中胚胎时期均没有IgA⁺细胞出现,鼻和肺脏中1日龄时出现,喉黏膜中4日龄时出现,而气管黏膜中7日龄时才出现。随着日龄增长,各器官呼吸道黏膜中IgA⁺细胞数量均逐渐增加。鼻黏膜以及肺脏初级支气管和次级支气管交叉处4日龄时较早地形成淋巴聚集物,喉黏膜中7日龄时形成,气管黏膜中35日龄时形成。在这些淋巴聚集物中IgA⁺细胞均主要分布于淋巴聚集物的外周。35日龄时,在鼻、喉和气管黏膜固有层以及上皮内均存在较多的IgA⁺细胞,从而能够更有效和直接地分泌SIgA,执行黏膜免疫功能。56日龄时,4种器官的呼吸道黏膜中IgA⁺细胞的数量达到峰值,并在黏膜底部形成生发中心,具有了黏膜相关性淋巴组织的典型特征,从而更有效地执行黏膜免疫功能。结论 鸡呼吸道黏膜中IgA⁺细胞的分布和数量均呈现日龄相关性变化,并且在35日龄时,鼻、喉、气管和肺脏中IgA⁺细胞数量和分布部位均达到一定规模,能够为呼吸道黏膜提供免疫保护。     

细胞外高钙致鸡肾小管上皮原代培养细胞损伤的试验研究

 建立了鸡原代肾小管上皮细胞的培养方法,作为高钙对肾小管损害的体外研究模型。在此模型上应用不同浓度的钙进行处理,通过MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定法观察对细胞活性和细胞膜的损伤情况。结果表明,分别用 2.5(试验组Ⅰ)、4.0(试验组Ⅱ)、5.5(试验组Ⅲ)、7.0(试验组Ⅳ)、8.5(试验组Ⅴ)和10.0mmol·L-1(试验组Ⅵ)Ca2+处理细胞,各组的细胞活性与对照组相比均显著降低(P<0.01),且细胞外钙浓度越高,细胞活性降低越明显。但用不同浓度的Ca2+处理细胞,对培养液中LDH的活性     

大蒜溶液对小鼠小肠黏膜结构、上皮内淋巴细胞和杯状细胞的影响

用组织学和组织化学方法研究不同浓度的大蒜素溶液对小鼠小肠黏膜结构及部分黏膜免疫相关细胞分布与数量的影响.试验选用8周龄BALB/C雄鼠50只,分为5组,每组10只,每组分别饲喂5种不同浓度的大蒜素溶液,每天80ml,实验期为10天.结果显示,1%大蒜素溶液对小鼠小肠肠绒毛长度、V/C比值、黏膜厚度,黏膜免疫相关细胞数量影响最大,对改善和增强小鼠小肠的消化吸收功能,提高肠道的防御能力效果最佳.     

鸡脂肪源间充质干细胞的分离与鉴定

【目的】建立鸡脂肪源间充质干细胞的分离与鉴定方法.【方法】用I型胶原酶消化法分离天露黄鸡脂肪间充质干细胞(AMSCs),CCK-8检测细胞生长活力,RT-PCR鉴定其特异性标记物,化学法对其进行成脂和成骨分化诱导.【结果和结论】原代及传代的细胞呈成纤维细胞样形态,并能传代至10代,其活力无明显变化;细胞生长曲线呈S型;RT-PCR检测显示AMSCs的特异性标志物CD71、CD44和CD29表达呈阳性,而属于造血干细胞的特异性标志物CD34和CD45呈阴性;AMSCs通过不同诱导液被成功诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,在成脂分化过程中有脂滴形成,油红O染色呈阳性,过氧化物酶体增殖物激活受体基因γ(PPARγ)和脂肪酸基因(FAS)的mRNA表达量升高;在成骨分化过程中有钙结节形成,茜素红染色呈阳性,碱性磷酸酶(ALP)活性检测对照组与诱导组比较差异显著(P﹤0.05),ALP基因和骨形态发生蛋白基因(BMP2)的mRNA表达量升高.研究表明,鸡AMSCs具有分化为多种细胞的潜能.     

鸡链球菌病病原分群鉴定

从河南省荥阳、淇县、武陟、修武、兰考、郑州等地送检鸡只的病料中分离到17株链球菌，经对其中13个典型菌株进行系统生化分群鉴定，结果表明，上述地区发生的鸡链球菌病主要是由C群兽疫链球菌（6／13）、D群鸟链球菌（4／13）和D群粪链球菌（2／13）引起，另有1株未能定群。     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及鉴定

应用淋巴细胞杂交瘤技术,以纯化的原核表达产物His-ChIFN-γ作为免疫原,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测原,制备抗鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和ECL法鉴定单克隆抗体(mAb)的生物学特性。获得4株可稳定分泌抗ChIFN-γmAb的杂交瘤细胞株1G10、2C3、3E5、3E3,其腹水ELISA效价为2×104~8.2×105;Ig亚类分别为IgG1、IgG1、IgG1和IgG2a。Dot-ELISA和ECL试验结果均表明:4株mAb只与表达ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,而与未表达ChIFN-γ的菌株不反应,表明4株mAb均特异性针对ChIFN-γ。鸡脾脏淋巴细胞经PMA刺激后,经固定、破膜,用mAb 2C3标记,利用流式细胞术可成功地检测到表达ChIFN-γ的T淋巴细胞。mAb为家禽的免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节等研究提供依据。     

鸽小肠上皮细胞的分离培养与鉴定

本试验旨在建立鸽小肠上皮细胞体外分离培养和鉴定的方法体系,为研究鸽小肠上皮细胞的营养转运吸收、细胞增殖代谢等机制提供原代细胞模型.采用胶原酶消化法和组织块贴壁法分离鸽小肠上皮细胞,并通过相差消化法对其纯化,最后运用免疫荧光分析和基因表达分析鉴定鸽小肠上皮细胞.结果表明,2种方法均可成功分离培养鸽小肠上皮细胞,细胞呈铺路...     

适合草莓倍性鉴定的流式细胞术方法的建立

比较了3种提取液制备红颊、川九1号、吉林草莓细胞核悬液流式细胞术检测效果,结果显示,提取液Ⅲ主峰粒子团清晰而集中,背景碎片少,试剂配方简单配制容易,且3种草莓材料倍性差异区分明显,优于其他2种提取液。对红颊草莓不同部位或不同来源的材料进行流式细胞术检测效果比较,结果表明,组培苗的检测效果明显优于大田试材,组培苗叶片因取材容易、主峰清晰、杂峰少、细胞碎片少而成为最佳试材。     

鸡胚胎干细胞单细胞克隆制备方法的比较

提取鸡X期胚盘细胞,体外培养传至第3代,采用口吸管法、细胞稀释法及克隆环法将细胞集落分离成单个细胞,并将其接种至96孔板上,每孔1个细胞,采用细胞化学法和免疫荧光法检测细胞表面标志物,探讨鸡胚胎干细胞单细胞克隆制备的实际操作的可行性,并对其生物学特性进行鉴定.结果表明:口吸管法、克隆环法、细胞稀释法克隆率分别为0、1.0%、4.2%.3种方法相比较,细胞稀释法具有操作简单易行、实验时间短、对细胞伤害小等优点,经碱性磷酸酶活性和阶段特异性表面抗原1免疫荧光鉴定均呈阳性,扩增出的克隆能稳定增殖且不分化.     

硫酸化黄芪多糖对雏鸡十二指肠黏膜组织形态和免疫细胞的影响

【目的】制备硫酸化黄芪多糖(Sulfated astragalus polysaccharide,sAPS),研究其对雏鸡十二指肠组织发育及黏膜免疫相关细胞分布的影响。【方法】采用氯磺酸-吡啶法对黄芪多糖(Astragalus polysaccharid,APS)进行硫酸化修饰,制备sAPS,氯化钡-明胶浊度法测定sAPS中硫含量,并计算sAPS的硫酸基取代度。运用组织学制片技术和染色方法分别观察APS及sAPS干预后7d和14d鸡十二指肠的组织学特点,对肠壁黏膜层上皮内淋巴细胞(Intraepithelial lymphocytes,IEL)、柱状上皮细胞间杯状细胞(Goblet cells,GC)和肠壁内肥大细胞(Mast cells,MC)数量进行统计分析。【结果】制得的sAPS中硫含量为14.3%,计算得到sAPS的硫酸基取代度为1.325。给予APS和sAPS干预后,sAPS组雏鸡十二指肠的绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度比值均明显高于对照组和APS组,隐窝深度明显低于对照组和APS组,sAPS组黏膜上皮内淋巴细胞、杯状细胞及肠壁肥大细胞的数量也明显高于对照组和APS组。【结论】sAPS对雏鸡十二指肠组织发育及肠道黏膜免疫的促进作用较APS强。