乳酸杆菌及芽孢杆菌对32种抗菌药物的敏感性研究

本文通过分离鉴定出6株猪源乳酸杆菌（简称RS）,并对6株RS、1株植物乳酸杆菌以及4株芽孢杆菌进行了药敏试验。结果表明：猪源乳酸杆菌对抗菌药物的耐受性达31．25％～53．13％。其中对RS-2和RS-4株菌不敏感的药物达17种之多;而植物乳酸杆菌仅对10种药物有耐受性。对大多数抗菌药物极敏感,与猪源乳酸杆菌存在明显差异;芽孢杆菌对多种抗生素敏感,只有杆菌肽抑菌圈为零。     

4株益生菌对抗菌药物的耐受性试验

试验用9种常用抗菌药物,采用2种不同试验方法对蜡样芽孢杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌和酵母菌进行了药物耐受性试验。结果发现,蜡样芽孢杆菌能耐受3种抗菌药物,耐受率33.3%,乳酸杆菌、双歧杆菌均能耐受6种抗菌药物,耐受率66.7%,而酵母菌对所有抗菌药物均具有耐受性,耐受率100%。     

鱼源鸡源猪丹毒杆菌对抗菌药物的敏感性试验

关于猪丹毒杆菌对抗菌药物的敏感性研究,以往的资料仅涉及猪源菌株,未见有鱼源和鸡源菌株的有关报道。我们以16种常用抗菌药物对分离自鱼和鸡的17株猪丹毒杆菌进行了本试验。现将结果报告如下。     

动物微生态制剂菌种的毒性试验

本次试验对18株细菌进行了毒性试验,其中鸡肠源细菌8株,分别为蜡状芽孢杆菌、2株枯草芽孢杆菌、短乳杆菌、戊糖乳杆菌、2株植物乳球菌和棉籽糖乳球菌;猪肠源细菌10株,分别为蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、玉米乳杆菌、乳酸乳球菌乳酸亚种、植物乳球菌、棉籽糖乳球菌、棉籽糖肠球菌和粪肠球菌。通过用这些细菌对小白鼠进行为期30d的正常量和加倍量的饲喂,实验组小白鼠均未出现中毒现象,试验结束时,通过对小白鼠的解剖,实验组小白鼠的肝脏和肾脏与对照组小白鼠一样,未出现任何异常变化。结果表明：本次试验所选用的18株细菌均较安全,可作为动物微生态制剂的菌种应用。     

广西猪源益生菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了解广西地区猪粪便与微生态发酵饲料中益生菌的存在情况及合理开发和利用猪源益生菌,本试验共采集了15份猪粪便样品和5份益生菌发酵饲料并对其进行益生菌的分离,研究益生菌的形态学特性、生理生化特性及16S rRNA分子序列,进行生长曲线、耐胆盐试验、温度敏感试验、模拟胃肠道耐受试验、耐药性试验、体外抑菌试验、小鼠安全性试验、体内/外抑菌试验,对分离菌株进行生物学特性的研究分析。结果显示,本试验共分离鉴定出6种、29株益生菌,分别为1株屎肠球菌（C2）、2株乳酸肠球菌（C1、C3）、3株植物乳杆菌（R20、R30、R37）、4株干酪乳杆菌（R41~R44）、7株枯草芽孢杆菌（K1~K7）和12株蜡样芽孢杆菌（Y1~Y12）。从中筛选出6株具有生长性能好、耐胆盐、耐高温、对胃肠道耐受、体外抑菌能力强的益生菌：乳酸肠球菌C1、屎肠球菌C2、植物乳杆菌R20、干酪乳杆菌R41、枯草芽孢杆菌K1和蜡样芽孢杆菌Y3。将筛选出的具有优良特性的菌株进行小鼠安全性试验,结果表明,在10⁹ CFU/mL浓度下灌胃6株益生菌对小鼠是安全无毒害的。与此同时,C2、R20、R41、Y3能极显著提高小鼠日增重（P<0.01）,K1能显著提高小鼠日增重（P<0.05）。体内抑菌试验结果表明,C2、R20、K1能降低沙门氏菌G21感染的小鼠的死亡率,有一定程度的体内抑菌作用。各项试验结果表明,R20和K1可作为猪源益生菌的选择菌株。     

广西猪源益生菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了解广西地区猪粪便与微生态发酵饲料中益生菌的存在情况及合理开发和利用猪源益生菌,本试验共采集了15份猪粪便样品和5份益生菌发酵饲料并对其进行益生菌的分离,研究益生菌的形态学特性、生理生化特性及16S rRNA分子序列,进行生长曲线、耐胆盐试验、温度敏感试验、模拟胃肠道耐受试验、耐药性试验、体外抑菌试验、小鼠安全性试验、体内/外抑菌试验,对分离菌株进行生物学特性的研究分析。结果显示,本试验共分离鉴定出6种、29株益生菌,分别为1株屎肠球菌(C2)、2株乳酸肠球菌(C1、C3)、3株植物乳杆菌(R20、R30、R37)、4株干酪乳杆菌(R41～R44)、7株枯草芽孢杆菌(K1～K7)和12株蜡样芽孢杆菌(Y1～Y12)。从中筛选出6株具有生长性能好、耐胆盐、耐高温、对胃肠道耐受、体外抑菌能力强的益生菌:乳酸肠球菌C1、屎肠球菌C2、植物乳杆菌R20、干酪乳杆菌R41、枯草芽孢杆菌K1和蜡样芽孢杆菌Y3。将筛选出的具有优良特性的菌株进行小鼠安全性试验,结果表明,在10~9 CFU/mL浓度下灌胃6株益生菌对小鼠是安全无毒害的。与此同时,C2、R20、R41、Y3能极显著提高小鼠日增重(P0.01),K1能显著提高小鼠日增重(P0.05)。体内抑菌试验结果表明,C2、R20、K1能降低沙门氏菌G21感染的小鼠的死亡率,有一定程度的体内抑菌作用。各项试验结果表明,R20和K1可作为猪源益生菌的选择菌株。     

猪源益生性芽孢杆菌的筛选与鉴定

选用革兰染色和芽孢染色的方法,从健康仔猪的新鲜粪便中筛选出37株芽孢杆菌,其中有11株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强抑制效果,并对这11株菌进行猪胆盐、人工胃液、人工肠液和硫酸铜的耐受力试验及分泌淀粉酶、蛋白酶和纤维酶的能力进行测定。试验结果显示:猪肠源性芽孢杆菌对胆盐和人工消化液有较好的耐受性;微量元素铜离子对芽孢杆菌的增殖有抑制作用;芽孢杆菌都能产生淀粉酶,但是产纤维素酶和蛋白酶都不明显。从中挑选出各种特性较好的1株YB5进行生理生化及16S r DNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌。     

重组猪源IFN-λ1植物乳杆菌的构建与表达验证

为构建猪源3型干扰素(pIFN-λ1)的重组植物乳杆菌并进行验证。通过PCR方法扩增含有植物乳杆菌锚定信号肽的猪源IFN-λ1基因(pIFN-λ1),插入到pSIP411表达载体电转入到中间克隆宿主菌NZ3900中,获得重组质粒pSIP-pIFN-λ1;再次电转入到表达宿主植物乳杆菌Lp18获得重组植物乳杆菌;制备重组植物乳杆菌并验证其表达。结果显示,成功扩增出650 bp目的条带,电转入植物乳杆菌Lp18中成功构建重组Lp18:pSIP-pIFN-λ1。Western Blot、免疫荧光和流式细胞分析等方法验证重组蛋白pIFN-λ1的表达,获得阳性结果,阳性率为22.96%,且进一步证明其展示并锚定在植物乳杆菌表面。本试验成功构建了1株能稳定表达猪源IFN-λ1蛋白的重组植物乳杆菌,为猪源IFN-λ1的开发应用研究提供理论基础。     

高铜和高锌对饲料中益生菌活性的影响

试验研究了饲料贮存过程及饲料中添加高水平铜和锌对本实验室保藏的9株益生菌活性的影响,从而筛选出活性高的益生菌,并以带毒平板法测定益生菌株对铜、锌的最大耐受浓度。将9株益生菌分别制成单一菌制剂添加到空白、高铜、高锌的仔猪料中,分别贮存60 d。结果表明:无论在饲料贮存过程中还是添加高铜高锌后,2株芽孢杆菌的活菌数均无显著变化。3株酵母菌对高铜、高锌的耐受性均较差。4株乳酸菌在贮存过程中活菌数有不同程度降低,且对高铜高锌有不同耐受性,戊糖片球菌、植物乳杆菌与干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌相比,对高铜、高锌抗逆性相对较强,但活性不如芽孢杆菌。     

11株枯草芽孢杆菌益生特性研究

试验旨在研究11株枯草芽孢杆菌的抑菌、产酶、耐受性和体外消化率等益生特性。从11株枯草芽孢杆菌中初筛得到9株体外抑菌特性和产酶特性均较好的芽孢杆菌;经过热、人工胃肠液、胆盐等耐受性复筛,结果表明9株芽孢杆菌中有6株对胆盐、胃酸、肠液等人工模拟的消化道内环境和生产过程中的热耐受性较强;经模拟动物体消化道的试验结果表明,9株芽孢杆菌中有5株（BLCC1-1、BLCC1-2、BLCC1-3、BLCC1-4、BLCC1-6）对不同组合饲料的消化效果较好。综合以上试验结果,既表现出较好的产酶、抑菌和耐受性,又对组合饲料有良好的消化效果的枯草芽孢杆菌有BLCC1-1、BLCC1-2、BLCC1-4和BLCC1-6,这4株枯草芽孢杆菌具有作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中的潜力,可进一步开展研究。     

氨基酸微量元素螯合物对异育银鲫生长及其品质的影响

试验研究了氨基酸微量元素螯合物对异育银鲫生长及其品质的影响。结果表明,①氨基酸微量元素螯合物替代无机微量元素能显著促进异育银鲫生长,提高饲料利用效率,其中,以65%替代无机微量元素的促生长效果最好,饲料利用效率最高,日特定生长率和饲料利用效率分别增加25.37%和26.32%。②用氨基酸微量元素螯合物替代无机微量元素后,鱼体水分、灰分含量无显著差异,以65%替代无机微量元素后,鱼体蛋白含量提高1.75%;鱼体脂肪含量在35%、50%、65%替代无机微量元素后,均有增加。③氨基酸微量元素螯合物35%、50%、65%替代无机微量元素,对鱼体肥满度没有产生影响,但内脏比均增加。④氨基酸微量元素螯合物以35%、50%、65%替代无机微量元素后,提高了成活率、降低了养殖饲料成本。⑤在氨基酸微量元素螯合物基础上再添加黄霉素,具有更好的促生长效果和更高的饲料利用效率。     

常用中草药对水产动物致病菌体外抑菌效果研究

试验旨在探讨黄柏、诃子、知母、苏木等常用中草药对水产动物致病菌的体外抑菌效果,为今后水产养殖细菌性疾病的防控提供参考。以美人鱼发光杆菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌临床分离株为试验菌株,以抑菌圈直径、最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）及联合抑菌指数（FICI）作为检测指标,研究常用中草药对水产病原菌的抑菌活性。采用水提法提取中草药有效成分,并通过琼脂平板打孔法测定中草药对水产致病菌抑菌圈,微量肉汤稀释法测定中草药MIC和MBC及微量肉汤棋盘稀释法测定联合抑菌指数（FICI）。结果显示,16种中草药对水产致病菌具有不同程度的抑菌作用。药敏试验结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种水产致病菌均具有抑菌效果,抑菌圈直径在10.5~29.0 mm之间,而4种病原菌对马齿苋均表现为耐药;MIC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MIC值为7.81~250.00 mg/mL;MBC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MBC值为7.81~500.00 mg/mL;联合抑菌试验结果显示,苏木与夏枯草、女贞子及青皮联用仅对美人鱼发光杆菌起到协同抑菌作用,对嗜水气单胞菌、创伤弧菌及哈维氏弧菌均无抑菌作用,女贞子和青皮组合仅对哈维氏弧菌抑菌作用为相加作用,该组合在抑菌效果上对其他病原菌表现为无关或颉颃作用,其他药物组合在抑菌效果上对4种病原菌则表现为无关或颉颃作用;联合抑菌圈测定结果表明,中草药联合使用对4种病原菌抑菌作用不一。本试验结果表明常用中草药对水产动物致病菌具有一定程度的抑菌作用。     

鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及药敏试验分析

从广东、福建不同地区临床疑似鸭疫里氏杆茵感染病死鸭中分离到12株鸭疫里氏杆菌,通过细菌形态、培养特怔、生化试验,鉴定为鸭疫里氏杆菌。采用微量液体二倍稀释法,测定了14种常用抗菌药物对12株鸭疫里氏杆菌的抗菌活性,结果表明,有2个菌株均对14种药物高度敏感,其MIC值均≤1μg/mL,其它菌株MIC值差异较大,所有抗菌药对Y4菌株的最小抑菌浓度较高,其MIC值均≥32μg/mL。     

Separation and Preliminary Identification of Intestinal Probiotics of Laying Hens

[Objective] The paper was to isolate and identify probiotics in the intestine of laying hens. [Method] The intestinal probiotics in laying hens at peak period were isolated using conventional separation methods; the physical and chemical properties of target strains and in vitro antibacterial effects were measured. Moreover, the safety test of chicks was conducted. [Result] Four strains of lactobacillus were isolated from the jejunum of laying hens, including Lactobacillus plantarum, Bacillus acidophilus, L. delbrueckii subsp. Delbrueckii and L. delbrueckii subsp. Lactis, and their inhibition zone diameters were 18.30, 16.07, 11.45, 17.26 mm, respectively. One strain of Lactobacillus, L. brevis, was isolated from the cecum, with the inhibition zone diameter of 10.26 mm. Three strains of bacillus were isolated from the cecum, including Bacillus subtilis, B. cereus and B. licheniformis, and their inhibition zone diameters were 9.25, 8.46 and 8.37 mm, respectively. Daily drinking 2 billion units of viable bacteria was the safe dosage for chicks. [Conclusion] Eight strains of probiotics had certain inhibitory effect on Escherichia coli O_2, and had no toxic side effects to chicks. Lactobacillus had strong antibacterial effect on E. coli O_2, while the antibacterial effect of bacillus was relatively weak.     

Immunomodulation by probiotic lactobacilli in layer- and meat-type chickens

1. The aim of the experiments was to evaluate whether selected probiotic lactobacillus strains have different immunomodulating effects in layer- and meat-type strain chickens. 2. Humoral and cellular specific and non-specific immune responses were studied by experiments on cellular proliferation, entry and survival of Salmonella bacteria in gut and spleen leukocytes, immunoglobulin isotypes and specific immunoglobulin titres. 3. The effects of two different feeding regimes (short and continuous feeding) and doses for administration of lactobacilli were studied. 4. The lactobacillus strains that were evaluated showed modulating effects on the immune system of layer- and meat-type chickens. 5. In meat-type strain chickens the lactobacilli had a stimulating effect when the chickens were young (up to 3 weeks) and the dose was relatively high, whereas in layer-type chickens a lower effective dose and discontinuous administration was also effective. 6. Immunoprobiotic lactobacilli can have a positive effect on humoral and cellular immune responses in layer- and meat-type strain chickens, but the lactobacillus strain to be used, the age of the animals and effective dose of lactobacilli to be administered need to be optimised.     

新疆石河子地区奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析简

本试验旨在调查新疆石河子地区奶牛乳房炎源大肠杆菌的某些生物学特性及其耐药状况,以提高药物疗效,减少牛奶中药物的残留。试验从新疆石河子地区患乳房炎奶牛的乳样中分离纯化并鉴定出21株大肠杆菌,并对大肠杆菌分离株进行抗菌药物敏感性分析。结果表明,21株大肠杆菌对21种抗菌药物中的6种药物耐药率超过50%,其中最多的耐药15种,最少的耐药5种,耐药6及6种以上的菌株共占到76.19%。提示,该地区奶牛乳房炎源大肠杆菌对多种药物已产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况。     

益生芽孢杆菌脂肽类抑菌成分的高效液相色谱-电喷雾串联质谱分析

本文旨在探明一株具有益生潜质的枯草芽孢杆菌N2-10对肠道菌的抗菌作用及其活性成分,为深入评价该菌株的益生功能和益生机理奠定基础。以常见的肠道致病菌和有益菌为指示菌,采用抑菌圈法对该菌株发酵液成分的抑菌活性进行测定,并通过高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)对其中的活性成分进行分析。结果表明:枯草芽孢杆菌N2-10发酵液的氯仿和正丁醇提取液对供试菌无明显的抑制作用;脂肽类对大肠杆菌、痢疾杆菌和沙门氏菌等肠道致病菌表现出明显的抑菌作用,而对肠道有益菌保加利亚乳杆菌抑制作用很弱,对嗜热链球菌则无抑制作用。脂肽粗提物的HPLC-ESI-MS/MS分析结果显示,脂肽粗提物中的脂肽类抗生素为伊枯草素家族中的C14~C17抗霉枯草菌素(Mycosubtilin)的同系物。因此推断,枯草芽孢杆菌N_2-10对肠道致病菌产生抑制作用依赖于其产生的脂肽抗生素Mycosubtilin。     

犬猫皮肤病细菌性病原分离鉴定及天然产物抑菌效果分析

【目的】 分离鉴定武汉市患皮肤病犬猫细菌性病原,并探索其对传统抗菌药物与天然活性产物藤黄酸(GA)和6-溴靛玉红-3’-肟(BIO)的敏感性。【方法】 对患皮肤病犬猫采样并分离病原,通过生长特性观察、革兰氏染色镜检、PCR等方法鉴定并利用SPF小鼠验证致病性;通过药敏纸片验证其对传统药物的耐药性,并测定天然产物对其最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。【结果】 分离得到2株金黄色葡萄球菌、3株伪中间型葡萄球菌、2株猫葡萄球菌、1株犬链球菌及1株奇异变形杆菌。SPF小鼠皮肤创伤感染验证分离菌株均有致病性。犬链球菌及奇异变形杆菌对各自受试药物均敏感;葡萄球菌对复方新诺明、青霉素、红霉素、四环素、左氧氟沙星、苯唑西林、庆大霉素、克林霉素及氯霉素存在不同程度耐药。天然活性产物GA和BIO对上述9株菌均具有良好抑菌效果,且除分离菌株F5外GA对分离菌株的MIC值均小于BIO。【结论】 本研究共分离得到5种、9株犬猫皮肤细菌。犬链球菌、奇异变形杆菌对传统抗菌药物均敏感,部分葡萄球菌存在耐药。GA和BIO对犬猫皮肤病原菌均有明显抑菌活性,显示其可作为防控犬猫细菌性皮肤病的候选药物。     

Antibacterial activity of antisera against homologous and heterologous Escherichia coli of porcine origin.

Fourteen enteropathogenic and five nonenterotoxigenic Escherichia coli strains isolated from pigs were used for producing antisera in rabbits and pigs. These antisera were used in an vitro test system for antibacterial activity against homologous and heterologous porcine E. coli strains. Antibacterial titres were determined against the homologous strains and the percent reduction in CFU/ml caused by a 1/200 dilution of the sera against heterologous strains was determined. The results indicated that following immunization the antibacterial activity of serum against homologous and heterologous strains was significantly increased. This activity did not appear to be influenced by O and K antigen relationships among the organisms or by enterotoxigenicity of the vaccine strains. When antiserum produced against a combination of three enteropathogenic E. coli was tested against 20 strains a wider spectrum of heterologous antibacterial activity was obtained than with antiserum produced against any individual strain. The results indicate the existence in E. coli strains of porcine origin of common antigenic determinants not related to the serological formula and that a selected combination of strains can be expected to induce antibacterial acitivity against a wide variety of serological types of porcine enteropathogenic E. coli.     

中药与抗菌药物联用对猪源大肠杆菌耐药性的抑制作用

为了探讨中药与抗菌药物联用对大肠杆菌耐药性的作用效果，本研究对河南部分地区采集的样品（50份）进行分离鉴定、生化试验及致病性试验，对分离鉴定后的致病性猪大肠杆菌选用12种中药采用K-B法进行耐药性检测，将筛选出来的中药与抗生素进行中西联用对致病性大肠杆菌做体外抑菌试验，并分析中西药联用对大肠杆菌的抑制作用。结果显示，采集的50份样品有23株菌符合大肠杆菌的分离培养特性和生化特性，且23株菌均为致病性大肠杆菌；通过耐药性检测，23株试验菌株对测试的中药均有不同程度的耐药性，其中试验菌株对甘草耐药率最高（82.6%），其次为生地（78.2%），而对黄柏（17.3%）和白头翁（21.7%）耐药性较低，具有一定的敏感性；体外抑菌试验结果发现，中药与抗生素联用均有不同程度的抑菌效果，其中黄柏、白头翁与抗菌药物联用的抑菌效果最明显。以上结果说明中药与抗菌药物联用不仅可以抑制大肠杆菌的耐药性，还可以延缓大肠杆菌耐药性的产生。