狼山鸡-AA肉鸡嵌合体的制作及其转基因鸡研究

试验Ⅰ:以狼山鸡为供体,AA肉鸡为受体,通过赤道开窗法制作了狼山鸡-AA肉鸡的嵌合体.共操作了108枚鸡蛋,孵化成活19只,孵化成活率17.6%.获得表型嵌合体鸡胚22枚,其中15只孵化成活,嵌合体率为13.9%.对2只嵌合体公鸡解剖发现,有1只的睾丸发育异常.PCR扩增禽类W染色体特异性的重复序列发现,2只嵌合体公鸡的性腺都嵌合了供体异性的细胞.结果表明所采用的嵌合体制作方法制备转基因鸡是可行的.试验Ⅱ:利用脂质体介导法,在体外将外源pEGFP质粒转入到鸡X期胚胎细胞中,培养8 h开始有外源基因的表达,体外培养12 h后获得了21.43%的转染效率.将转染后的鸡胚盘细胞移入到受体AA肉鸡的胚下腔,孵化6 d后在8个鸡胚中检测到有外源基因的存在,阳性率为40%(8/20).     

逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究

 【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe中获得重组逆转录表达载体;采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG共转入293 10A1包装细胞中进行病毒包装,得到病毒原液经超速离心浓缩200倍后注入种蛋(第X期)胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA,进行PCR检测和Southern杂交检测。【结果】构建含EGFP完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体pour-pBabe-EGFP,提取孵化5.5 d鸡胚基因组DNA,经PCR、Southern杂交检测,嵌合体阳性率分别为75%和66.7%。【结论】通过用重组逆转录病毒体内感染鸡胚盘细胞的方法可获得嵌合体鸡。     

通过转移早期囊胚期细胞制备嵌合体鸡

通过转移早期囊胚期细胞制备嵌合体鸡杜立新李善刚（山东农业大学动物科技学院关键词：嵌合体;鸡;转基因中图法分类号：Ｓ８３１．２ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮＯＦＣＨＩＭＥＲＡＳＩＮＴＨＥＣＨＩＣＫＥＮＢＹＴＲＡＮＳＦＥＲＯＦＥＡＲＬＹＢＬＡＳＴＯＤＥＲＭＡＬＣ...     

毛白杨嵌合体的研究：Ⅰ.嵌合体的认证及生物学研究

对自河北省宁晋县获得的一个特殊毛白杨无性系的初步研究表明其为一嵌合体。该嵌合体苗木的主要性状与毛白杨相似，但叶片略小，叶尖较尖以为灰绿色，表皮可纵向分为两部分，一部分平滑，另一部分有纵棱；皮孔分布均匀，菱形。     

狼山鸡(南通种群)适龄育肥的效果观测

以31～100日龄南通种群狼山鸡为素材,在能量水平相对固定的情况下,比较粗蛋白含量分别为18%、16.5%、15%饲料的育肥效果.结果表明,3种饲料育肥效果差异不显著.     

鸡胚原始生殖细胞的分离和鸡鸭嵌合体的制备研究

探索了 12～ 17期鸡胚血液中的原始生殖细胞 (PGCs)迁移数量变化规律 ,将其在液氮中冷冻保存。并以Fi coll密度梯度离心、MiniMACS磁气分离、滤膜 3种方法对PGCs进行分离 ,结果发现 ,12～ 17期血液中均有PGCs存在 ,13期达到高峰 (4 7 1± 10 5 )个·μL-1,在血液中比例为 0 0 12 6 %。冷冻保存 3个月后解冻成活率达 80 %以上。3种分离方法所得的分离效果分别为 95 7%、39 2 %、6 3 0 % ;纯度为 2 7 5 %、8 4%、3 1%。将分离的原始生殖细胞以微注射法转移至 14～ 15期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌合体 ,获得 8只雏鸭 (8/ 110 )。以鸡W特异性DNA探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测到鸡原始生殖细胞 ,嵌合率达 84 2 % (16 / 19)。表明鸡原始生殖细胞能够迁移定居到鸭胚性腺中 ,并有可能增殖分化成有功能的配子     

狼山鸡消化道乳酸菌的分离·鉴定以及生物学特性研究

[目的]分离和鉴定狼山鸡消化道乳酸菌,为开发新型禽用微生态制剂提供依据。[方法]利用厌氧菌分离技术,从狼山鸡肠道中分离乳酸菌,通过形态、生理生化特性、16S rRNA基因序列测定以及同源性分析对其进行鉴定,并对菌株进行耐酸性、抗菌活性等筛选。[结果]分离到5株乳酸菌LCr-01、LCr-02、LCe-01、LCe-02、LCe-03,经过生理生化试验、16S rRNA基因序列测定以及同源性分析,初步鉴定植物乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌以及嗜酸乳杆菌。其中,LCr-02具有较强的耐酸性和抗菌活性。[结论]筛选到的5株菌乳杆菌中LCr-02具有较强的耐酸性与抗菌活性。     

转基因动物研究综述

综述了转基因动物的制作方法、转基因家畜类、转基因鱼类、转基因禽类研究成就。     

观赏植物花色嵌合体及其育种学应用

花色嵌合体是一种特殊的植物材料,在观赏园艺应用中具有极高的经济价值与研究意义。在比较说明几种花色嵌合体形态特征的基础上,讨论了植物花色嵌合体的形成原因及细胞学机制,并且探讨了花色嵌合体在观赏植物育种中的应用。     

不同保种方法对狼山鸡保种群近交系数的影响

以狼山鸡为素材,利用“家系等量随机选配法”和“随机交配法”(对照组)2种保种方法进行继代繁殖鸡群,每个保种群每个世代的鸡只均逐只编制往上追溯5代的系谱图,利用回归斜率分析方法计算世代增量。结果表明,试验组保种群的近交系数的世代增量均呈负增长,公鸡、母鸡分别为-0.003 7和-0.004 4;对照组公鸡、母鸡分别为0.001 7,0.002 2。采用家系等量随机选配法保存鸡种,可有效地控制保种群近交系数的增长。     

1例46,xx／47,xxy嵌合体的细胞遗传学分析

本文对１例外阴两性畸形患者进行了临床检查，细胞遗传学检查和剖腹探查结果发现，患者核型 ４６， ＸＸ／４７，ＸＸＹ，且４７，ＸＸＹ细胞系占３８％，但病理报告显著淇 双侧性腺均为卵巢组织，这说明患者不是真两性畸形，而只是一个嵌合体。本文就就判别真两性畸形的标准进行了。     

毛白杨嵌合体扦插生根相关生理学特性研究

为了阐明嵌合体扦插生根和普通毛白杨与过氧化物酶、吲哚乙酸氧化酶、超氧化物歧化酶和可溶性蛋白含量的关系。对在河北省宁晋县获得的毛白杨嵌合体的生根机制进行了动态跟踪分析,测定了过氧化物酶(POD)、吲哚乙酸氧化酶(IAAO)及超氧化物歧化酶(SOD)的活性和可溶性蛋白含量。嵌合体POD活性在第9天升至高峰,第18天降至低谷,第21天又出现高峰,而毛白杨在第12天出现高峰,第24天出现低谷;IAAO活性变化规律在前期与POD相似;嵌合体SOD活性开始呈下降趋势,在第6~9天出现低谷,之后有所升高但无太大变化,而毛白杨开始呈上升趋势,第9天形成高峰,之后有所下降,但规律不明显;可溶性蛋白含量嵌合体总体比毛白杨高,且两者在第15天变化相反。嵌合体易生根与其PODI、AAO及SOD活性和可溶性蛋白含量密切相关,是四者协同作用的结果。     

转基因鸡生产技术研究进展

对转基因鸡的生产方法,如病毒载体法、生殖器官注射法、显微注射法、胚胎干细胞法等进行综述,探索转基因鸡各生产方法的可行性,并对各方法的应用特点以及转基因鸡应用方面的最新研究成果进行了剖析。     

慢病毒法生产转基因鸡的初步研究

[目的]探索利用慢病毒生产转基因鸡的适宜方法。[方法]以增强型绿色荧光蛋白为报告基因构建慢病毒载体,包装病毒后感染鸡早期受精卵,并检测不同注射操作和不同接种滴度对鸡胚存活率的影响,同时对接种病毒鸡胚的GFP表达情况进行检测。[结果]采用105、106和107IU/ml的慢病毒滴度,鸡胚孵化率分别为87%、72%和66.7%。以雏鸡血液基因组为模板PCR鉴定转基因阳性率为45.5%;冰冻切片技术发现GFP基因在鸡体内不同组织的表达强度差异显著,免疫系统内表达最强,生殖系统和肌肉组织中GFP基因无表达。[结论]试验初步筛选出较适宜的慢病毒感染滴度,该结果为研制蛋鸡生物反应器和转基因鸡抗病新品系奠定了基础。     

转基因食品及其安全性

本文主要介绍了转基因食品的概念、发展现状和安全性评价程序;并对转基因食品的安全性进行了探讨.     

亚二倍体嵌合体母猪及其子代染色体组型分析

报告了 1头亚二倍体嵌合体的母猪 (4 0 3号 ) .在所检查的 19个中期相细胞中 ,染色体组型为 36,XX ,- 4D , 2rob(15 ;17)的核型有 4个 (2 1% ) ;37,XX ,- 2D , rob(15 ;17)的核型有 15个(79% ) .对其所产的 10头仔猪进行染色体检查 ,发现其中有 1头雄性仔猪 (4 87号 )为 36,XY ,- 4D , 2rob(15 ;17)的纯合子 ,有 1头雌性仔猪 (5 79号 )为亚二倍体 二倍体嵌合体 ,在其被检的 16个细胞中 ,有 2个为 36,XX ,- 4D , 2rob(15 ;17) (12 .5 % ) ,14个为 38,XX(87.5 % ) .其余 8头仔猪及配种公猪的染色体检查均为正常二倍体 38,XX(XY)核型     

转基因鸡制备技术研究进展

本文综述了转基因鸡的研究及应用,并介绍了3种常用的制备方法,包括外源基因受精卵注射、逆转录病毒介导转基因、利用慢病毒载体实现转基因的介入和导向,以期为转基因技术的应用提供参考。     

动物转基因研究及其应用

回顾了动物转基因研究的发展历程,综述了现有的转基因方法,并简要介绍了该技术给农业、生物医药、环境保护、生物材料、生物反恐等领域带来的新变化,同时,展望了转基因动物的发展前景.     

转基因鸡及输卵管生物反应器

随着生物制药业的迅速发展,转基因鸡输卵管生物反应器正逐渐成为人们关注的焦点,转基因鸡以其卓越的优势必将成为科学研究的热点和生物制药领域的新兴产业之一。目前,转基因鸡最成功的制备方法即逆转录病毒介导法,并已成功制备出表达标记基因的转基因鸡。通过综述鸡作为生物反应器的优势、转基因鸡发展历程、逆转录病毒载体制备转基因鸡的方法过程和转基因鸡的研究进展,同时也讨论了转基因鸡的意义和可能存在问题。