血小板对体外培养的猪PBMC增殖反应和IL－2分泌的影响

本实验通过采取１０头猪的血液，经３０次实验探讨了自体和异体血小板（ＰＬ）对体外培养的猪外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）增殖反应和ＩＬ一２分泌的影响。证明了ＰＬ对猪ＰＢＭＣ的增殖反应和ＩＬ一２分泌均有增强作用。同时也比较了ＰＬ和红细胞（ＲＢＣ）对淋巴细胞的活化作用。并初步探讨了ＰＬ对淋巴细胞激活作用的机制。     

FSH对体外培养猪卵巢颗粒细胞生长及增殖的影响

采集成年健康母猪的卵巢,收集卵泡颗粒细胞,在配制好的培养液中培养。颗粒细胞原代培养体系建立成功后,分别将不同质量浓度的FSH(0.1,0.5,1,5,25 ng/mL)作用于细胞,每隔48 h换1次培养液,加入新的FSH,倒置显微镜下检测细胞的生长及增殖状况。结果表明,FSH质量浓度越大,细胞生长状况越好,差异有统计学意义(P<0.05);在固定质量浓度的FSH作用下,细胞每次换液后生长状况都会变好。FSH能促进猪卵泡颗粒细胞增殖,并与作用时间长短有关。     

猪体外成熟,受精卵的体外培养研究

用自己改良的发育培养基使３．９％￣２０．１％体外成熟体外受精卵在体外发育过了４－细胞阻滞期，到达８￣１６－细胞期，个别发育到桑椹期；培养中还观察到葡萄糖对猪胚胎的体外发育没有抑制作用，说明葡萄糖不是猪胚胎体外培养中出现阻滞的原因，在培养基中添加ｐＦＦ可促进猪胚胎体外发育，使发育至８￣１６－细胞期的胚胎率从３．９％，提高到１０２．２％。     

胰岛素和胚胎培养密度对猪孤雌胚早期体外发育的影响

为了探讨胰岛素和胚胎培养密度对猪孤雌胚早期体外发育的影响,进一步优化猪早期胚胎培养体系,分别进行了胚胎培养液(NCSU-23)中添加不同批号和浓度的胰岛素以及不同胚胎培养密度(培养滴体积)对猪孤雌胚早期胚胎体外发育的影响试验,并于第2、7天分别统计胚胎分裂率和囊胚发育率。结果表明:①在NCSU-23中添加5.0μg/mL批号为I-1882(Sigma公司)的胰岛素,其囊胚发育率最高,为(33.48±12.79)%;②在体外培养25枚猪孤雌胚时,按胚胎数(枚)l培养液体积(μl)为1∶2.0~1∶3.0的比例进行培养,其培养效果较好。     

猪卵母细胞体外成熟培养的研究

本研究对比了不同浓度的猪卵泡液、激素、卵泡直径对猪卵母细胞体外成熟培养的影响.结果表明:①在TCM199+10％ FCS为主的基础培养液中添加浓度为10％的猪卵泡液比添加0、5％、20％能显著(P＜0.05)提高卵母细胞的成熟率;②再添加50 ug/ml的激素FSH对猪卵母细胞的成熟效果最好,显著(P＜0.05)高于LH、PMSG试验组;③来自于卵泡直径为4～7mm的卵母细胞成熟率显著高于(P＜0.05)直径≤3mm和≥8 mm卵泡的卵母细胞的成熟率.     

猪胚胎体外培养体系优化对胚胎干细胞建系的影响

为提高体外胚胎发育质量和体外胚胎建立胚胎干细胞系效率,研究以N2B27为基础的干细胞培养体系对猪孤雌胚胎体外发育和后续建立胚胎干细胞系的影响。设立3个试验组:PZM-3组,孤雌激活的胚胎全程PZM-3培养体系中培养; N2B27组,孤雌激活的胚胎全程N2B27培养体系中培养; PZM-3-N2B27组,孤雌胚胎在PZM-3培养体系中培养至桑葚胚后更换为N2B27培养体系。结果表明,N2B27组无法获得囊胚,但PZM-3-N2B27组胚胎可正常发育至囊胚,囊胚率未显著提高,但囊胚细胞总数显著提高(P<0.05)。PZM-3-N2B27组获得孤雌囊胚用于建立猪胚胎干细胞系,显著提高原代克隆形成率(P<0.05),获得猪胚胎干细胞系呈碱性磷酸酶阳性,表达Oct4、Sox2和Nanog等多能性基因。结果表明,采用PZM-3和N2B27培养体系结合获得的猪孤雌囊胚利于猪胚胎干细胞系建立。研究为进一步优化猪胚胎体外培养体系,获得初始态胚胎干细胞系提供参考。     

不同浓度的FSH对猪腔前卵泡体外培养的影响

为确定不同浓度的FSH对猪腔前卵泡体外培养的影响,探讨最佳培养体系,比较了M199培养液中3种FSH浓度(0.5、1、2IU/mL)对腔前卵泡体外培养的影响。结果表明:FSH浓度为2IU/mL时腔前卵泡的生长率最高,2 IU/mLFSH与0.5IU/mLFSH相比,在卵泡生长率、成腔率和存活率上都存在着显著差异(P<0.05)。3个处理组腔前卵泡前5d生长率与后5d相比差异极显著(P<0.01)。结论:高浓度的FSH能显著地促进腔前卵泡的生长和腔的形成,且能够提高腔前卵泡的成活率。猪腔前卵泡体外培养呈前高后低的生长模式。     

猪腔前卵泡的体外培养

为确定不同基础培养液和培养方法对猪腔前卵泡体外培养的影响,试验采用了M199和NCSU23两种基础培养液及96孔培养板法、凹窝培养法和颗粒细胞铺层培养法对猪腔前卵泡进行体外培养。结果表明:培养在M199的腔前卵泡生长显著快于培养在NCSU23的腔前卵泡,培养在该2组的猪腔前卵泡前5 d的生长速度都极显著地高于后5 d的生长速度,而腔前卵泡的成腔率和存活率没有明显差异;培养在凹窝培养体系的腔前卵泡生长速度显著低于96孔培养板法,但凹窝培养体系可以显著地增加腔前卵泡的存活率。同时证明,颗粒细胞铺层培养法对腔前卵泡生长没有显著影响。     

猪带绦虫六钩蚴的体外培养

采用12种培养体系培养猪带绦虫六钩蚴，结果发现单层细胞且无气相存在的培养体系效果较好，促使大部分六钩蚴进入了六钩蚴后期发育，且虫体可延长存活至16d。     

猪精原干细胞体外培养条件的优化

以出生后1～5 d的长白公猪为主要研究对象,采用两步酶消化法获取睾丸细胞悬液,用Percoll不连续密度梯度法对猪精原干细胞(PSSCs)进行纯化,以碱性磷酸酶(AP)染色鉴定;利用MTT法检测2种细胞因子——胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和白血病抑制因子(LIF)对PSSCs发育的影响.结果表明:用Percoll不连续密度梯度法获得的PSSCs占睾丸总细胞数的(8.19±0.83)%,AP染色的阳性率为(87.47±2.90)%,表明该方法可有效获取PSSCs;MTT法检测表明,20 ng.mL-1 GDNF+1 000 U.mL-1 LIF的组合添加对PSSCs体外增殖的效果最好.     

毛冬青和复方丹参注射液对猪血小板细胞骨架蛋白的影响

本文用Triton沉淀法研究了毛冬青和复方丹参注射液对猪血小板细胞骨架蛋白的影响。结果表明:(1)毛冬青注射液对凝血酶诱导的肌动蛋白聚合和肌球蛋白与肌动蛋白微丝的结合都有强烈的抑制作用,IC_(50)分别为200μg/ml,120μg/ml;(2)复方丹参注射液(100mg/ml,含丹参生药量)可抑制凝血酶诱导的肌动蛋白聚合,抑制率为51.2％;并可完全消除凝血酶刺激的肌球蛋白与微丝的结合。本文从新的角度阐明了毛冬青和复方丹参注射液抗血小板作用的机制。     

光照时间和碳源对试管薯形成的影响

通过不同光照时间和不同碳源诱导试管薯,观察其对试管薯形成的影响。结果表明：全黑暗条件下更利于试管薯的形成;以食用白糖代替蔗糖不会影响诱导微型薯的效果,可以降低生产成本从而提高经济效益。     

不同饲养水平皖花肉猪肥育性能和胴体特性的研究

研究了高能精料和低能粗料两种饲养水平对皖南花及其商品杂交猪肥育性能和胴体特性的影响,结果表明:与低粗水平比较,高精水平明显提高生长肥育猪的增重速度和增重效率(P<0.01),并使日增肌内和脂肪分别提高9～22%和33～38%;由于脂肪的迅速沉积,降低了胴体瘦肉率,提高了肌肉的失水率(P<0.01)。两种饲养水平对肉质和肉的蛋白质与氨基酸含量无明显差异。     

吡喹酮、奥芬达唑对似锥低颈吸虫体外作用的初步研究

本文观察了不同浓度的吡喹酮、奥芬达唑对似锥低颈吸虫的体外作用，结果显示：吡喹酮在０．０１μｇ／ｍｌ时有杀灭作用，在０．０５μｇ／ｍｌ就有较强作用，而奥芬达唑在０．０５μｇ／ｍｌ才有杀灭作用，在０．１μｇ／ｍｌ才有较强作用。     

环境因子对莱氏野村菌cq菌株生长发育的影响

研究环境因子对莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)cq菌株的生长、产孢与孢子萌发的影响。温度对菌株的生长、产孢和孢子萌发有相同的效应,低温23℃是最适温度,32℃以上明显抑制该菌的生长、产孢和孢子萌发;最适宜生长、产孢和孢子萌发的pH范围为6.2~7.0;24 h光照有利于产孢,而24 h黑暗有利于菌落生长;紫外线(40 W,45 cm)照射2 m in,培养96 h该菌株孢子发芽率较对照降低16%,照射8 m in孢子发芽率仅为7%。     

培养过程中温度对猪卵母细胞发育的影响(脂滴部分)

猪成熟的卵母细胞在体外20℃和37℃的条件下,以M—199为培养基,以未培养的卵母细胞做对照,分别培养24和48小时,观察和分析不同温度下猪卵母细胞的发育以及超微结构的变化。结果表明,不同温度对细胞内脂滴的数量没有影响,对脂滴内容物的致密度无显著影响,但对脂滴大小有影响。与对照组比较,实验组的脂滴明显增大。在37℃培养时,脂滴的大小与时间呈正比,20℃时,则先增大后缩小。形态上的差别:20℃培养时一些细胞的部分脂滴出现相变现象,未见脂滴的外排;37℃时脂滴的变化不同。猪卵母细胞不耐低温,可能由于猪卵母细胞含有大量脂类,低温时由液晶态的脂类变成晶态,使细胞失去正常功能,甚至死亡。     

外源激素和眼柄提取物对罗氏沼虾卵母细胞的离体诱导作用

使用四种类固醇激素，两种保幼激素类似物和眼柄提取物进行罗氏沼虾离体卵巢小块培育，于２５℃培育２４ｈ后切片并进行光谱观察。发现１７α－羟孕酮，孕酮和ＪＨＡ－ＺＲ５１５对卵黄发生前期卵黄发生期卵母细胞卵径增大均有极显著刺激作用。高浓度雌二醇对卵黄发生前期卵母细胞卵径增大也有明显刺激作用；高浓度ＪＨＡ－ＺＲ５１２对成熟前卵巢卵母细胞卵径增大有显著作用，蜕皮激素对卵径增大无作用。眼柄提取物对卵黄发生期卵母