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噬菌体抗体是表面表达有单链抗体(Singlechain Fv,ScFv)或抗体Fab段的噬菌体,用基因克隆技术将B细胞全套可变区基因克隆出来,组装到表达载体内并表达到噬菌体表面成为噬菌体抗体的群体,即为噬菌体抗体库.该技术是丝状噬菌体展示(phage display)与抗体组合文库技术相结合而成.其基本路线为用PCR方法扩增抗体全套可变区基因,重组到噬菌体载体中,并通过与丝状噬菌体的外壳蛋白形成融合蛋白,把Fab段或ScFv表达到噬菌体表面.通过"吸附-洗脱-扩增"的富集过程,从中筛选出特异性抗体的可变区基因. 相似文献
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丝状噬菌体展示技术是将外源蛋白通过与丝状噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒的表面。自问世以来,它已被应用于生物科学的许多领域,其中最具吸引力的是抗体工程,利用该技术可构建不同的抗体库,从而获得针对不同抗原的抗体。本文着重介绍了丝状噬菌体的生物学特征... 相似文献
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应用噬菌体展示和重组抗体技术制备抗诺氟沙星(NFLX)单链抗体库,筛选获得抗NFLX高特异性、高亲和力的单链抗体scFv。将NFLX与BSA化学偶联获得的免疫源,免疫Balb/C小鼠,提取脾细胞RNA,反转录获得cDNA。以针对鼠源重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因的特异性引物,扩增获得VH基因和VL基因。通过SOE-PCR法将VH基因和VL基因通过柔性多肽Linker((Gly4Ser)3)拼接成VH-Linker-VL片段,酶切(sfiⅠ+NotⅠ)处理后,插入噬粒载体pCANTAB5E,并转化宿主菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07拯救,构建抗NFLX噬菌体单链抗体库。以包被抗原NFLX-OVA包被96孔板,亲和富集法,经三轮淘筛,间接Elisa初步检测重组scFv的特异性抗原结合活性。成功构建噬菌体单链抗体库,获得鼠源抗NFLX特异性的scFv,噬菌体中scFv插入率为90%,获得库容约为1.3×106的抗NFLX噬菌体单链抗体库,筛选得到5株抗NFLX的scFv。为运用噬菌体展示抗体技术制备特异性抗药物单抗及进一步建立药残检测新技术奠定了基础。 相似文献
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利用噬菌体展示技术构建猪流感病毒噬菌体抗体库,并筛选出猪流感高特异性、高亲和力的单链抗体(scFv)。以猪流感病毒免疫BALB/c小鼠,提取脾细胞总RNA,反转录后以cDNA为模板扩增获得VH基因和VL基因,并采用重叠延伸PCR(SOE-PCR),用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)按VH-Linker-VL方式将VH基因和VL基因拼接成scFv基因片段。将scFv基因和pCANTAB5E载体分别双酶切(SfiⅠ/NotⅠ)后连接,转化宿主菌TG1,经过辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体单链抗体库。以猪流感病毒为抗原包被96孔酶标板,经过3轮的亲和富集筛选,用Phage-ELISA鉴定阳性重组抗体。本研究成功构建出库容约为4×106cfu/mL抗猪流感病毒的单链抗体库,并筛选出4株特异性抗猪流感病毒的scFv抗体,能够与鼠源阳性多抗进行竞争结合猪流感病毒,为抗猪流感病毒转基因猪的研究奠定基础。 相似文献
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随着分子生物学和细胞生物学技术的发展,抗体的研究已进入基因工程抗体时代。20世纪90年代初,抗体库技术特别是噬菌体抗体库技术的问世,成为抗体技术的重大突破,标志着利用噬菌体表面展示技术制备人源化、多功能化、高亲和力特异性抗体成为可能。噬菌体抗体库技术是用PCR扩增出 相似文献
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噬菌体抗体库技术是近年发展起来的将抗体基因与噬菌体外壳蛋白基因在其表面进行融合表达的技术。可用来构建噬菌体抗体库 ,并可从中制备各种基因工程抗体 ,为抗体的进一步开发应用提供了具有良好前景的新方法。 相似文献
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利用在体外构建的三肽囊素抗独特型抗体可变区VH和VL基因,通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VL ScFv,且ScFv DNA与噬菌粒载体pHENI的连接产物转化于大肠杆菌TGl,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素抗独特型抗体全套单链噬菌体抗体库,并将该抗体库展示在噬菌体表面,以利用噬菌体展示技术的强大筛选能力筛选出与三肽囊素同功能单链抗体(Bursin-ScFv)。 相似文献
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《中国兽医学报》2020,(1):54-58
为构建鸡源抗血清4型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-4)单链抗体(scFv)文库并筛选出具有高亲和力的单链抗体。本研究从FAdV-4免疫鸡的外周血淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增出鸡抗体的VH和VL基因,通过Linker接头将VH和VL基因连接成scFv,将scFv基因连接至噬菌粒载体pComb3XSS中,构建单链抗体文库,通过噬菌体展示技术筛选抗FAdV-4单链抗体,并采用Phage ELISA方法检测抗体的亲和力。结果成功构建鸡源抗FAdV-4单链抗体文库,库容量为9.5×10~(10) PFU/mL,通过4轮吸附-洗脱-富集筛选,最终鉴定出1株与FAdV-4具有较高的亲和活性的单链抗体。该研究结果为进一步研究FAdV-4抗体奠定了基础。 相似文献
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Dezorzová-Tomanová K Molinková D Pekarová M Celer V Smola J 《Research in veterinary science》2007,83(1):85-90
Single-chain antibodies (scFv) exhibiting specific binding to Lawsonia intracellularis were isolated from a phagemid library expressing scFvs molecules on the surface of filamentous bacteriophages. For scFv selection whole bacterial cells were used and individual clones were tested in ELISA test. The total of seven unique clones with different fingerprint profiles was isolated. All clones were able to bind specifically in immunofluorescence assay. This is the first report of species specific recombinant antibodies against L. intracellularis. 相似文献
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牛源金黄色葡萄球菌单链抗体治疗小鼠乳腺炎效果评价 总被引:1,自引:0,他引:1
引起奶牛乳腺炎的原因复杂多样,金黄色葡萄球菌是其中重要的病原之一。为探寻治疗奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂,本研究利用建立的小鼠金黄色葡萄球菌感染乳腺炎模型,将针对金黄色葡萄球菌牛源性单链抗体(scFv)的真核表达质粒pcDNA3.1-scFv33和pcDNA3.1-scFv73经第4对乳腺导管注入到处于泌乳期的乳腺炎模型小鼠的乳腺中,以通过scFv在小鼠乳腺内的表达来抑制细菌对乳腺上皮细胞的黏附从而达到防治乳腺炎的目的。结果显示,两个scFv治疗组乳腺内的细菌数量分别为4.52±0.37、4.38±0.32(lgcfu·mg-1),TNF-α的含量分别为29.55和42.29 pg/mg,IL-6的含量分别为48.38和21.74 pg/mg。与阴性对照组相比,scFvs治疗组乳腺内的细菌数量显著减少(P0.05),乳腺组织较完整,减少了炎性细胞的浸润,且TNF-α和IL-6的含量均显著降低(P0.05)。表明pcDNA3.1-scFvs对小鼠乳腺炎可能具有一定程度的保护作用,为进一步研究防治奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂探索了新途径。 相似文献
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Takashi HARUMI Akiko SANO Hiroshi KAGAMI Takahiro TAGAMI Yuko MATSUBARA Mitsuru NAITO 《Animal Science Journal》2004,75(6):503-507
The D‐loop region in mitochondrial DNA (mtDNA) was sequenced and compared among six chickens. Eleven single nucleotide polymorphisms (SNP) were observed. For six of the SNP sites, polymerase chain reaction (PCR) primers that had each base (A, C, G and T) as the penultimate base at the 3′ end (N2 base) and bases specific to both alleles at the 3′ end were produced to type the polymorphisms. Twenty‐one out of 96 primers succeeded in distinguishing the SNP by the presence or absence of PCR product. This method provides an easy way to discriminate SNP in chicken mtDNA. 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(5)
为了构建大容量、天然鼠源核糖体展示(ribosome display,RD)单链抗体(single-chain fragment variant,scFv)文库。通过提取SPF级小鼠脾脏总RNA,反转录为cDNA,利用引物分别扩增鼠抗体的VH、VL和Cκ基因,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,通过Linker((Gly4Ser)3)相互拼接,构建单链抗体scFv基因文库和核糖体展示基因文库;经连接转化,对所构建基因文库进行菌落PCR鉴定和序列测定分析。所构建核糖体展示基因文库库容量约为5.6×1013,基因片段全长大小约为1 100bp,基因文库序列具有较好的完整性和多样性。本试验成功构建了一个大容量、天然鼠源核糖体展示单链抗体文库,为进一步筛选单链抗体奠定基础。 相似文献