α菠菜甾醇对小鼠小肠段药物转运体P-gp和PEPT1表达的影响

以酒石酸泰乐菌素为底药,探讨α 菠菜甾醇对小鼠小肠段药物转运体P gp和PEPT1表达的影响。48只小鼠分为4组：α 菠菜甾醇组,酒石酸泰乐菌素组,α 菠菜甾醇和酒石酸泰乐菌素混合组,生理盐水对照组。每组按0.2 mL·10 g-1体质量的剂量每天灌胃一次,共灌胃5 d,分别在1,3,5 d后处死1批采样。采用免疫组化的方法测定1,3,5 d的小鼠肠道上P gp和PEPT1的表达。试验结果表明,α 菠菜甾醇组和混合组相对于对照组外排性药物转运体P gp表达减少,而摄取性药物转运体PEPT1表达增多;酒石酸泰乐菌素组的外排性药物转运体P gp表达增多,摄取性药物转运体PEPT1表达减少;且都随着用药时间的延长差异增大。表明α 菠菜甾醇具有抑制药物转运体P gp表达和促进药物转运体PEPT1表达的作用。     

桔梗石油醚提取物对酒石酸泰乐菌素在小鼠体内的药代动力学及组织分布的影响

以酒石酸泰乐菌素为靶标药物,探究药物中加入桔梗石油醚提取物对小鼠血浆中的药代动力学特征及组织分布的影响。采用高效液相色谱法测定不同时间点小鼠血浆及心脏、肝、肺、肾中酒石酸泰乐菌素的浓度,运用PKsolver程序及SPSS19.0统计软件处理数据,用非房室模型分析药代动力学参数。结果表明:酒石酸泰乐菌素的血–药时曲线呈现多峰;与对照组(药物未加桔梗石油醚提取物)相比,桔梗石油醚提取物组(桔梗组)消除半衰期和达峰时间均变短,达峰浓度降低;药时曲线下面积减少,而表观分布容积增加;平均滞留时间缩短,而药物清除率增大;组织分布图显示,与对照组相比,桔梗石油醚组小鼠心脏中的药物浓度明显比肺、肝、肾中药物浓度高,说明桔梗石油醚提取物改变了酒石酸泰乐菌素在小鼠体内的组织分布。综合分析,桔梗石油醚提取物对酒石酸泰乐菌素在小鼠体内的药代动力学特征有较大影响,表现为加快了药物的吸收速度,但减轻了吸收程度;使药物在体内分布更广泛,却加快了其在体内的消除速度。     

复方阿莫西林舒巴坦钠纳米乳的研制

【目的】研究复方阿莫西林舒巴坦钠纳米乳的制备方法,对其理化性质进行评价。【方法】以伪三元相图乳区面积大小为评定标准,确定复方阿莫西林舒巴坦钠纳米乳体系中各组分,考察阿莫西林与舒巴坦钠质量比不同时,所制备的复方阿莫西林舒巴坦钠纳米乳对奶牛乳房炎常见致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌)抑菌效果,确定阿莫西林与舒巴坦钠的最佳质量比。最后对最佳配方下制备的复方阿莫西林舒巴坦钠纳米乳理化性质进行了分析。【结果】筛选出复方阿莫西林舒巴坦钠纳米乳配方是:阿莫西林1%,舒巴坦纳0.5%,肉桂醛2.5%,PEG400为6.25%,RH-40为18.75%,蒸馏水为71%(以上均为质量分数)。阿莫西林与舒巴坦钠的最佳质量比为2∶1。制备的复方阿莫西林舒巴坦钠纳米乳为球形,其粒径大小为13.41nm,多分散系数(PDI)为0.188,物理稳定性良好。【结论】成功研制出了复方阿莫西林舒巴坦钠纳米乳。     

复方泰乐菌素颗粒剂的品质控制

对制备出的复方泰乐菌素颗粒剂进行质量控制检测。紫外分光光度法测定复方泰乐菌素颗粒剂中的泰乐菌素和黄芩苷含量。建立复方泰乐菌素颗粒剂的紫外检测方法,泰乐菌素的平均回收率96.90%,日内平均RSD为0.0903%,日间平均RSD为0.1563%,泰乐菌素平均含量为97.0 mg/g;黄芩苷的平均回收率为101.35%,日内平均RSD为0.5553%,日间平均RSD为0.4808%,黄芩苷的平均含量为57.1 mg/g。粒度、干燥后质量损失和溶化性符合要求。经筛选后处方制备的复方泰乐菌素颗粒剂符合品质要求和含量要求,本方法操作简便、结果准确。     

几种药物对肉鸡新城疫免疫效果的影响

本试验旨在研究商品肉鸡在新城疫免疫期间应用其他药物对其免疫效果的影响。试验选用630只20日龄的商品罗斯309肉仔鸡随机分成7个处理组,每组设3个重复,每个重复30只。试验组在进行新城疫疫苗免疫的前1d分别以治疗剂量盐酸环丙沙星、硫酸庆大霉素、酒石酸泰乐菌素、扶正解毒饮、氟本尼考、益生素饮水,连用3d。从接种当天,每隔7d分别在鸡翅静脉采血1次,进行白细细胞计数和β-微量血凝抑制试验检测其免疫指标。结果表明：在免疫期间应用盐酸环丙沙星和硫酸庆大霉素可明显降低白细胞数和血凝抑制抗体的滴度（P〈0.05）;酒石酸泰乐菌素和氟本尼考对白细胞和血凝抑制抗体的影响均不显著（P〉0.05）;而扶正解毒饮和益生素能提高白细胞的数量,但差异不显著（P〉0.05）,并能显著提高其血凝抑制抗体的滴度（P〈0.05）。结论：在新城疫免疫期间可以应用扶正解毒饮、益生素、酒石酸泰乐菌素和氟本尼考;不宜使用硫酸庆大霉素和盐酸环丙杀星。     

肉鸡滑液囊支原体的分离鉴定和药敏试验

通过分离培养张家口某鸡场MS菌株,采用PCR方法扩增MS 16S RNA,并对分离培养菌株进行药敏试验.结果显示,感染MS肉鸡站立困难,跗关节和爪垫肿胀,分离培养的病原体菌落为光滑、圆形,小面积"煎蛋样".PCR产物在207 bp处出现条带.药敏试验发现该菌落对酒石酸泰乐菌素和延胡索酸泰妙菌素敏感,最小抑菌浓度分别为0.122和0.244μg/mL.因此,可确定该鸡场已感染滑液囊支原体,推荐使用酒石酸泰乐菌素或延胡索酸泰妙菌素作为首选抑菌治疗药物.     

武陵地区山羊传染性胸膜肺炎支原体的药敏试验

测定了盐酸环丙沙星、氧氟沙星、甲磺酸单诺沙星、硫氰酸红霉素、罗红霉素、酒石酸泰乐菌素、富马酸泰妙菌素、盐酸四环素等8种药物对山羊胸膜肺炎支原体PG3株、Y-esh i-goat株敏感性及联合药敏作用,为临床用药提供参考。     

鄂西南山区山羊传染性胸膜肺炎霉形体的药物敏感性试验

[目的]为鄂西南山区山羊传染性胸膜肺炎霉形的临床用药提供参考。[方法]分别测定了盐酸环丙沙星、氧氟沙星、甲磺酸单诺沙星、硫氰酸红霉素、罗红霉素、酒石酸泰乐菌素、富马酸泰妙菌素、盐酸四环素等8种药物对PG3株和Y-eshi-goat株的敏感性及联合用药的敏感作用。[结果]PG3株和Y-eshi-goat株一样对8种药物中的红霉素及泰妙菌素最为敏感,其次是罗红霉素和泰乐菌素,四环素及喹诺酮类药物较不敏感。4种药物的联合药敏试验表明,红霉素与氧氟沙星表现为相加作用,而红霉素与泰乐菌素表现为无关作用。[结论]临床上治疗山羊传染性胸膜肺炎时首选红霉素和泰妙菌素等高敏药物,次选泰乐菌素与罗红霉素等中敏药物。     

“泰乐星”牌酒石酸泰乐菌素对鸡支原体抑菌效果及增重试验

选用14日龄AA雏鸡149只，分为6组，除阴性对照外，其余试验组均用鸡支原体强毒人工接种，24h后给药，试验期为20天，综合评价试验结果：以“泰乐星”牌酒石酸泰乐菌素500mg/L组效果最好，其效果与进口产品差异不显著（P〉0．05），成活率达96％，增重率达155．9％。     

乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳的制备及其体外抑菌活性和急性毒性测定

【目的】制备乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳,并对其理化性质、体外药效和安全性进行评价。【方法】利用伪三元相图法,优选配方,制备乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳,用透射电镜、激光粒度分析仪对其形态和粒径分别进行考察;通过高速离心、留样观察试验检验其稳定性;通过抑菌试验考察其体外药效;通过急性毒性试验考察其安全性。【结果】乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳配方中各组分的质量分数为：吐温80 25%、无水乙醇15%、乙酸乙酯4.4%、乙酰异戊酰泰乐菌素1%、蒸馏水54.6%。制备的纳米乳为橘黄色澄清透明液体,流动性良好,在透射电镜下其形态为规则的圆球形,平均粒径为11.1 nm,分散性好;稳定性试验结果显示,其未有分层、絮凝、沉淀等现象发生,稳定性好。体外抑菌试验结果表明,乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳对畜禽常见病原菌致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、无乳链球菌的最小抑菌质量浓度分别为16,2,8,4,8 μg/mL;该纳米乳的半数致死量（LD₅₀）为2 425 mg/kg,属于低毒药物,安全性好。【结论】成功研制了乙酰异戊酰泰乐菌素纳米乳,其稳定性好,体外药效明显增强,且低毒,有望应用于兽医临床。     

上海部分地区猪链球菌2型的流行病学调查及其耐药性

猪链球菌2型是一种重要的人兽共患病病原,由其引起的猪链球菌病给养猪业带来巨大的危害。本研究通过PCR方法扩增谷氨酸脱氢酶(GDH)基因和荚膜多糖(CPS)基因检测猪链球菌2型,对上海部分地区猪链球菌2型的流行病学进行调查,并对分离到的菌株进行生化鉴定及耐药性研究。结果显示,上海部分地区猪链球菌的检出率为41.2%(103/250),猪链球菌2型的检出率为12.4%(31/250),猪链球菌2型占猪链球菌的30.1%。猪链球菌2型菌株对四环素、链霉素和氯霉素的耐药性最为严重,多数菌株呈多重耐药性,其中以4重耐药性为主。这为上海地区猪链球菌病的监管提供了依据,并对临床治疗使用抗生素具有参考价值。     

人工感染猪链球菌对小鼠肝脏药物代谢酶的抑制作用

 【目的】评价猪链球菌感染对小鼠肝脏药物代谢酶活性的影响。【方法】120只雄性ICR小鼠,随机分为对照组和2个感染组,后者分别人工感染猪链球菌2型强毒力株HA9801和弱毒力株SS2-H,于感染不同时间测定小鼠体内肝脏药物代谢酶活性的变化。【结果】感染HA9801菌株的小鼠,细胞色素P450（CytP450）、细胞色素b5（Cytb5）、NADP-细胞色素C还原酶（NCCD）活性从第3日开始极显著（P＜0.01）或显著(P＜0.05)降低,第10日时降至最低（NCCD于第5天时最低）,第15日时活性有所增强,但仍显著低于对照组;红霉素-N-脱甲基酶（ERND）活性从第5日开始极显著地降低（P＜0.01）,变化趋势与CytP450、Cytb5相似;氨基比林-N-脱甲基酶（AND）活性虽有变化,但与对照组比较,差异不显著（P＞0.05）;苯胺-4-羟化酶（AH）活性在第10日时开始极显著地下降（P＜0.01）,第15日时稍有上升。感染SS2-H的小鼠,CytP450、Cytb5的活性从第5日开始显著降低(P＜0.05),第10日降至最低;NCCD、ERND和AH活性第10日时显著降低(P＜0.05),而AND活性在感染期间未发生显著变化（P＞0.05）。HA9801感染组与SS2-H感染组小鼠的谷胱甘肽巯基转移酶（－GSH-S-T）活性从感染后第3日开始即显著(P＜0.05)降低。HA9801感染组与SS2-H感染组比较,CytP450、Cytb5活性在感染前期均有极显著（第3日、第5日）差异（P＜0.01）,而在感染后期,差异不显著（P＞0.05）。微粒体蛋白浓度各组差异不显著（P＞0.05）。【结论】猪链球菌感染可调节小鼠肝脏药物代谢酶CytP450、Cytb5、NCCD、ERND、AH和GSH-S-T活性,故在感染期间选择药物进行治疗时,应制定合理的给药方案,避免药物毒性反应产生,加重病情。     

湖北地区猪链球菌2型的鉴定及生物学特性研究

以湖北荆州地区疑似猪链球菌病的病猪为研究对象,经病料采集、细菌分离培养、纯化、染色、镜检、生化鉴定、血清学试验和PCR检测,确定该病猪为猪链球菌2型病例。经药敏试验筛选出了环丙沙星、阿莫西林和头孢唑肟钠为其敏感药物;经动物攻毒试验复制出同样疾病,表明猪链球菌2型对湖北地区猪具有很强的致病性。     

检测猪链球菌2型毒力相关蛋白的ELISA法的建立

提纯猪链球菌2型分离株HA9801的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF），制备其抗体。用此抗体建立了Dot-ELISA和间接ELISA检测法。分别以菌株ATCC35246和HA9801为阴性和阳性对照，检测17株猪源链球菌和1株猪链球菌2型人分离株。结果显示，两种ELISA的检测结果一致，MRP和EF的阳性率均为61％（11／18）。     

猪链球菌2型福建株的分离鉴定

从临床表现为败血症的濒死病猪肝脏、肺脏、淋巴结中分离到一株链球菌,进行形态学、生化特性、小白鼠感染试验及PCR鉴定和CPS2 J序列测定.结果表明:该分离菌的形态、培养和生化特性基本符合链球菌的特点;人工感染试验显示,小白鼠腹腔接种0.2 mL分离菌培养物不发病,但接种1 mL能在48 h内致小白鼠死亡,并能从脏器中分离到接种菌;分离菌的PCR扩增产物与猪链球菌2型阳性参考菌株JA070109大小一致、长度为675 bp的特异性条带,其PCR产物的核苷酸序列与GeneBank上公布的猪链球菌2型不同菌株的同源性高达98%-100%.可见,该分离菌为猪链球菌2型,并首次证实福建存在猪链球菌2型.     

猪链球菌的分离鉴定及自家灭活苗研制

为确诊猪链球菌病,筛选敏感药物和研制自家灭活苗防治该病,从送检病猪体内分离病原菌,通过对分离菌的形态染色、分离培养、生化试验、血清型鉴定等方法鉴定菌株;并通过药敏试验筛选敏感药物,配制铝胶佐剂,制备自家铝胶灭活苗对其进行防治。实验结果表明,分离鉴定的菌株为2型猪链球菌,分离菌对恩诺沙星、氨苄青霉素、庆大霉素、阿莫西林、头孢拉定高敏,用研制的猪链球菌自家铝胶灭活苗防治该病安全有效。结果提示,猪场链球菌病须经实验室分离鉴定病原才可确诊,临床治疗用药应筛选敏感药物,用自家灭活苗防治有较好效果。     

浦东地区部分猪场猪链球菌2型的分离鉴定及耐药性分析

2014年03月至08月期间,对来自浦东地区患关节炎的150份病猪和死猪内脏器官及关节液进行细菌分离,对分离细菌进行革兰氏染色、PCR鉴定、药敏实验和多重PCR检测链球菌毒力因子分布(荚膜多糖cps、溶菌酶释放蛋白基因mrp、胞外因子ef、溶血素sly、毒力相关基因orf2、谷氨酸脱氢酶基因gdh、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因gapdh),并对链球菌2型cps基因序列进行进化树分析。结果,从分离到的120株细菌中检测到21株链球菌,分离率为17.5%,2型链球菌分离率为11.67%;链球菌的毒力型呈-/+cps2J-/+mrp-ef-sly-gdh-/+gadph-/+orf2;分离株呈多重耐药性,耐药性为:大环内酯类硝基呋喃类、氯霉素类、多肽类、氨基糖苷类、四环素类青霉素类、头孢菌素类、亏诺酮类林可胺类、磺胺类;cps基因与GenBank上已公布的链球菌2型荚膜多糖基因的核苷酸同源性达94%~99%。     

1株猪链球菌的分离·鉴定及其毒力因子研究

[目的]对1株疑似猪链球菌菌株进行鉴定,为进一步研究猪链球菌的毒力提供理论基础。[方法]采用革兰氏染色镜检、形态观察和16S rDNA测序后NCBI数据库Blast比对鉴定菌株;另外选取猪链球菌7种主要毒力因子设计引物,利用PCR方法检测其毒力基因分布情况。[结果]显微镜下该疑似菌株为革兰氏阳性菌,多数呈链状,少见单个排列。16S rDNA测序结果与猪链球菌2型同源性达到99%。毒力因子检测均含有7种毒力因子。[结论]该疑似菌株为猪链球菌2型,其毒力基因型为：gdh＋/ef＋/mrp＋/sly＋/fbps＋/orf2＋/cps2J＋/。     

Identification of Antigens Common to Streptococcus suis Serotypes 2 and 9 by ImmunoproteomicAnalysis

Streptococcus suis is a Gram-positive pathogen that causes serious diseases in pigs. In addition to S. suis serotype 2 (SS2), S. suis serotype 9 (SS9) is another prevalent serotype, which is frequently isolated from the organs of diseased pigs in China. An immunoproteomic-based approach was developed to identify antigens common to SS2 and SS9 for vaccine development. Cell wall proteins extracted from SS2 strain HA9801 were screened by two-dimensional Western blot using anti-SS2 sera, anti-SS9 sera, or pre-immune sera pooled from specific pathogen free (SPF) mice. Protein spots on preparative gels were excised and identified by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, which led to the identification of four shared immunogenic proteins (arginine deiminase, translation elongation factor-Ts, o-acetylserine lyase, and 1-phosphofructokinase). The genes encoding these four proteins from SS9 strain GZ0565 were cloned and their proteins were overexpressed in Escherichia coli BL21. Western blot analysis of these recombinant proteins using the convalescent serum of an SPF mini-pig inoculated with the SS2 strain, anti-SS2 sera, and anti-SS9 sera pooled from SPF mice further confirmed the immunogenicity of these proteins. These immunogenic proteins, which are encoded by genes that are reasonably conserved among SS2 and SS9 strains, could be developed as vaccine candidates.     

猪链球菌分子生物学检测研究进展

猪链球菌是一种重要的人畜共患病病原.目前,PCR是检测猪链球菌最常用的方法.可以通过扩增猪链球菌特有的基因片段(cps、gdh)等鉴定出猪种链球菌,然而很多新分离的菌株还无法用PCR方法进行鉴定.新的分子生物学检测方法在基因的水平上.对猪链球菌新分离菌株进行定型和阐述猪链球菌毒力株与无毒力株之间的差别的运用发展越来越快.