促性腺激素促进雄性小鼠体内卵巢移植体卵泡卵母细胞生长发育的研究

 【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21 d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21 d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组（90.7%）差异不显著（P＞0.05）。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为（41.4±25.8）枚,2-细胞胚胎发育率为17.5%,未能发育至囊胚;处理组移植体有黄体形成,有的卵泡中有扩展的卵丘卵母细胞复合体,平均回收卵母细胞数为（33.4±20.1）枚,其中MⅡ期卵母细胞为（8.5±7.1）枚,GV期、MⅡ期卵母细胞受精后2-细胞胚胎的发育率分别为33.9％和44.3%,囊胚发育率分别为0.48%和6.3%;试验组间回收卵母细胞数差异不显著（P＞0.05）,2-细胞胚胎发育率、囊胚发育率差异极显著（P＜0.01）。试验组卵母细胞2-细胞胚胎发育率显著低于对照组（P＜0.01）,处理组MⅡ期卵母细胞囊胚发育率与对照组差异不显著（P＞0.05）。【结论】外源促性腺激素对雄性小鼠卵巢移植体具有促进卵泡发育、卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,但不增加卵母细胞产量。     

移植时间对小鼠卵巢卵母细胞在雄性体内生长发育的影响

将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,分别于移植后21,28和35 d回收移植卵巢,对移植体的大小形态、回收率、回收卵母细胞数及其大小进行评价.结果表明:三时间段回收的移植体均生长增大,有腔卵泡明显,回收率达87.5%～92.9%,差异不显著;35 d移植体平均直径达(2 574.7±785.9) μm,显著大于21 d(2 075.3±329.8) μm和28 d(2 088.9±297.7) μm 移植体(P＜0.01);回收移植体均能分离到卵母细胞,随着移植时间的延长回收卵母细胞数下降,其中21 d移植体回收卵母细胞最多,为(40.5±29.8)个,与35 d移植体回收卵母细胞数(11.1±7.6)个相比差异极显著(P＜0.01),28 d移植体回收卵母细胞数(28.4±21.1)个,与前二者差异均不显著;回收卵母细胞形态正常,达到GV期,平均直径达(74.2±2.1)～(75.0±5.9) μm,组间差异不显著;28 d移植体中回收到MⅡ期卵母细胞.随着移植时间的延长,移植体增大,回收卵母细胞数减少.说明在卵巢异位移植中要获得丰富而又充分生长的卵母细胞应根据卵巢卵泡发育规律选择合理的移植时间.     

不同剂量PMSG对未性成熟小鼠卵巢发育的影响

探讨了不同剂量PMSG对20～21日龄未性成熟小鼠卵巢发育的影响,结果表明,PMSG处理后小鼠卵巢出现增大现象,其中20 IU、15 IU、10 IU、6 IU组处理的小鼠卵巢增重最明显,且组间差异不显著;卵巢内生长卵泡数量差异不显著,随激素作用量的上升,有腔卵泡数和有腔卵泡所占比例而增大.     

卵巢因子对小鼠卵母细胞发育的影响

卵巢因子对卵母细胞发育的影响已成为发育生物学研究的主要内容,卵巢产生的大量生长因子通过自分泌/旁分泌方式对生发泡破裂(Germinal Vesicle Breakdown,GVBD)、第一极体释放、胚胎发生及早期胚胎发育发挥调控作用.对卵巢因子调控作用的深入研究有助于进一步了解卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的细胞通讯系统网,寻找治疗不孕不育的新途径和新方法,为体外成熟、体外受精及胚胎干细胞分化制定更加优化的培养环境.概述了目前卵巢因子在小鼠卵母细胞发育调控中的研究进展.     

染料木素对性成熟前小鼠卵巢卵泡发生动力学的影响

【目的】旨在探究染料木素对性成熟前小鼠卵巢卵泡发生动力学的影响,为畜牧生产尤其是种猪饲养过程豆粕型日粮的合理饲喂以及黄酮类替抗产品的科学应用提供参考。【方法】将40只21日龄昆明小鼠随机分为4组,其中对照组处以0.1 mL的溶剂（含5%DMSO的玉米油）,试验组分别处以等体积不同浓度的染料木素（25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg）,连续腹腔注射7 d。处理结束后,对部分小鼠进行PMSG-HCG促排并记录输卵管壶腹部的卵子数量,评估卵巢排卵潜能;剩余小鼠采集卵巢制成组织切片进行HE染色,统计分析卵巢内各级卵泡生长和闭锁状态。【结果】输卵管壶腹部成熟卵子数统计显示,染料木素处理组的卵子数量较对照组均显著增加（P<0.05）,其中50 mg/kg染料木素组卵子排出数量最多,且显著高于25 mg/kg和100 mg/kg剂量组（P<0.05）,而25 mg/kg和100 mg/kg剂量组之间差异不显著（P>0.05）。卵泡计数结果显示,染料木素处理组生长卵泡总数较对照组均无显著差异,但健康生长卵泡显著高于对照组（P<0.05）,闭锁生长卵泡则反之（P...     

哺乳动物卵巢移植研究进展

随着器官移植及冷冻保存技术的发展,卵巢移植近年来成为生殖生物学、生殖医学的研究热点.研究表明,新鲜或冻存卵巢移植后其功能可恢复,并能保持较长时间的功能.文章就卵巢移植的历史、依据、技术及存在的问题和发展前景进行了综述.     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的采集和体外成熟

酶消化配合机械分离，采集１０日龄小鼠腔前卵泡中的卵母细胞－颗粒细胞复合体（ＯＧＣｓ），以自制的胶原膜为底物，在ＭＥＭ培养液中培养１０ｄ，卵母细胞－颗粒细胞复合体由１１０．５±１８．６μｍ增长到１８４．４±６０．６μｍ，卵母细胞由５６．２５±２．０μｍ增长到８２．０±１０．５μｍ．３６．７％的ＯＧＣｓ具有５层以上颗粒细胞，其中９．１％放出第一极体。     

小鼠卵泡卵母细胞的一步冷冻研究

通过对冷冻液和平衡时间的筛选,研究了裸露小鼠卵泡卵母细胞的一步冷冻。结果表明:当冷冻液含25％的1,2—丙二醇和0.25mol/L的蔗糖,平衡时间为10min时,冷冻效果最为有效,解冻后存活率和形态正常率分别达66.2％和58.1％.解冻后形态正常的卵泡卵母细胞可以发育成熟,成熟率为22.7％。     

小鼠卵泡颗粒细胞分化不影响卵母细胞印迹基因DNA甲基化进程

雌性生殖细胞印迹的获得发生于小鼠的卵子发生过程中,本研究以颗粒细胞分化前后的卵泡卵母细胞为研究对象,利用重亚硫酸盐测序法,对卵泡腔形成前后的卵母细胞中Igf2r和Peg3两个印迹基因的甲基化状况进行了分析。颗粒细胞分化前,卵母细胞Igf2r和Peg3两个印迹基因DMR区CpG位点的甲基化比率分别为80.67%和82.78%;颗粒细胞分化后的早期有腔卵泡卵母细胞中,卵母细胞Igf2r和Peg3两个印迹基因DMR区CpG位点的甲基化比率分别为82%和83.89%。可见,卵泡腔的形成对于直径相同的卵泡卵母细胞印迹基因甲基化的建立没有影响。     

基于高通量测序的山羊卵巢基质、卵泡转录组分析

【目的】比较山羊Capra hircus卵巢基质、大卵泡和小卵泡间的m RNA表达图谱,为探究卵泡发育机制提供一定的研究基础。【方法】采用高通量测序技术对发情期川中黑山羊的卵巢基质、大卵泡和小卵泡进行转录组测序,利用生物信息学方法检测mRNA表达谱,筛选差异基因,对其进行GO和KEGG通路分析,最后随机抽取5个差异基因进行荧光定量PCR验证。【结果】卵巢基质vs大卵泡、卵巢基质vs小卵泡和小卵泡vs大卵泡的差异表达基因分别为524、180和403个。筛选出INHA、TNFRSF19等15个与卵泡发育相关的基因,其主要富集在内质网蛋白质加工、类固醇生物合成、卵母细胞减数分裂等信号通路。通过q RT-PCR验证,定量结果与测序结果基本一致。【结论】川中黑山羊卵巢基质、大卵泡和小卵泡的基因表达模式不同,小卵泡与卵巢基质的基因表达模式更相近。     

小鼠卵母细胞和早期胚胎端粒酶活性的测定

为了解小鼠早期发育过程中端粒酶的活性变化,本研究利用端粒重复序列扩增法(TRAP)进行了小鼠卵母细胞和附植前胚胎端粒酶活性的测定。结果表明,小鼠卵母细胞、桑椹胚和囊胚为端粒酶阳性,而2-细胞和8-细胞为阴性。依据电泳条带在成像系统下的光密度,计算相对总产品产量(TPG)的定量比较发现,囊胚端粒酶活性最高,为269.331;桑椹胚次之,为96.231;卵母细胞最低,为85.782。小鼠桑椹胚和囊胚胚胎记数及单细胞端粒酶活性比较结果显示,囊胚单细胞TPG最低,为3.45;桑椹胚单细胞略高于囊胚,为4.00;而卵母细胞最高,为85.782,大约是囊胚细胞的25倍。     

3种磷酸二酯酶对小鼠卵母细胞自发成熟的影响

为探讨和比较磷酸二酯酶(PDE)3、4和5对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响,将小鼠卵丘卵母细胞复合体(COCs)和裸卵(DOs)分别培养在含有或不含有PDE 3、4和5特异性抑制剂的M-199培养液中。结果表明:PDE3的特异性抑制剂cilostamide和PDE5的特异性抑制剂zaprinast均能显著抑制小鼠COCs和DOs的自发成熟,且其抑制效应不随培养时间的延长而减弱,但却是可逆的;而PDE4的特异性抑制剂rolipram对小鼠COCs和DOs没有影响。上述结果提示,不同亚型的PDE在小鼠卵母细胞减数分裂过程中具有不同的调节作用。     

Activin A促进未成年小鼠腔前卵泡发育的研究

Activin A(Act A)是一种由卵泡液中提取出来的蛋白,主要以旁分泌和自分泌途径调节卵泡颗粒细胞功能,但其对卵泡发育的影响却不十分清楚。本试验的主要目的就是探讨Act A对小鼠腔前卵泡发育的影响。本研究以60μg/kg剂量的Act A注射10日龄的母鼠,连续注射4d。收集卵巢后,进行HE染色;通过WST-1细胞增殖试剂盒,检测颗粒细胞的增殖情况。试验结果表明:Act A注射4d后,小鼠有腔卵泡比例为30.7±1.8%,对照组为12.9±7.2%(p<0.01),实验组有腔卵泡细胞直径增加到169.33±4.2μm,对照组的为158.05±2.8μm(p<0.01)。颗粒细胞的增殖情况差异不显著,注射Act A组的吸光度为0.47±0.07,对照组的为0.51±0.11,p>0.05。本研究认为,Act A促进未成年小鼠卵巢卵泡中颗粒细胞分化,从而促进有腔卵泡的形成。     

父系遗传背景对小鼠超排效果及孤雌胚胎体外发育的影响

【目的】研究父系遗传背景对小鼠超排效果及其孤雌胚胎体外发育的影响。【方法】以3种近交系雄鼠(129/Sv、C3H和C57BL/6J)与昆明系(KM)雌鼠的杂交一代(F1)及KM自交系小鼠为研究对象,对其进行超排处理,比较3种不同遗传背景的杂交小鼠与对照KM自交系小鼠的超排效果,分析其孤雌胚胎体外激活率和囊胚率的差异。【结果】3种F1代杂交小鼠与对照KM的超排效果和孤雌胚胎的激活率没有显著差异(P>0.05);129/Sv×KM、C3H×KM孤雌胚胎的囊胚率显著高于其他各组(P<0.05);C57BL/6J×KM与KM×KM之间孤雌胚胎囊胚发育率的差异不显著(P>0.05)。【结论】129/Sv、C3H和C57BL/6J父系遗传背景对杂交F1代小鼠的超数排卵数量和激活率没有影响,但引入129/Sv和C3H父系遗传背景可促进杂交F1代小鼠孤雌胚胎的体外发育,提高囊胚发育率。     

N-乙酰半胱氨酸对玻璃化冻存小鼠GV期卵母细胞成熟和后续胚胎发育能力影响

冷冻保存后的GV期卵母细胞内大量积累ROS,影响胚胎发育。NAC作为一种抗氧化剂,可缓解氧应激造成的损伤。但NAC对冷冻GV期卵母细胞是否存在维持作用尚待研究。为探究NAC在冷冻、解冻后小鼠GV期卵母细胞发育中作用,检测冷冻保存后小鼠GV期卵母细胞在添加不同浓度NAC成熟培养液后成熟情况,观察其卵裂率与囊胚率、线粒体分布、ROS水平和受精后胚胎发育等。结果表明,添加1.5 mmol·L~(-1)NAC,冷冻保存后,小鼠GV期卵母细胞,线粒体排布均匀,卵母细胞比例显著提高,ROS水平降低。NAC可改善小鼠GV期卵母细胞经冷冻保存后复苏和体外成熟水平,提高其发育能力。     

小鼠卵母细胞的孤雌激活及体外发育

分别用不同条件的电脉冲、酒精浓度刺激不同卵龄的小鼠卵母细胞，进行体外培养并观察卵母细胞的活化和体外发育情况。结果表明，①以场强５５Ｖ／ｍｍ，脉宽１６０μｓ的电脉冲刺激卵龄为１７ｈ的卵母细胞，活化卵形成二原核率为９０％；以场强５５Ｖ／ｍｍ，脉宽６４０μｓ的电脉冲刺激卵龄为１５ｈ的卵母细胞，激活卵的桑椹胚最高发育率为６９％．②用７％酒精刺激卵龄为１５ｈ的卵母细胞２ｍｉｎ，活化率最高为７２％，激活卵的桑椹胚发育率为２２．２％．