离体培养贯叶连翘对庆大霉素的敏感性

选择培养贯叶连翘的茎、叶及愈伤组织的最佳培养基配方,设置0、25、50、75、100mg／L等5个浓度梯度庆大霉素,离体培养结果显示：贯叶连翘对庆大霉素极为敏感,用庆大霉素抗性基因作为标记基因,筛选转基因贯叶连翘植株有较好效果。庆大霉素对贯叶连翘茎、叶的致死浓度为100mg/L,对愈伤组织的致死浓度为75mg/L。     

贯叶连翘愈伤组织诱导及其金丝桃素检测

采用不同培养基及激素诱导贯叶连翘愈伤组织,研究了不同蔗糖浓度对愈伤组织生长的影响,同时采用HPLC对不同生长状态的愈伤组织中金丝桃素含量进行检测。结果表明:MS + 2 ,4 -D 0 .2mg/L +KT 0 .0 2mg/L的培养基中愈伤组织的诱导率最高;提高蔗糖浓度可以促进愈伤组织生长,但合成金丝桃素的最佳蔗糖浓度为30g/L ;褐化的愈伤组织中金丝桃素含量明显高于生长状态好的愈伤组织,增加量可达7.5～9倍。     

贯叶连翘愈伤组织和不定根培养的研究

为探索贯叶连翘愈伤组织和不定根反应器大量扩繁的最佳条件,以贯叶连翘种子为材料,对愈伤组织的诱导和增殖条件进行优化,并对不同培养条件下愈伤组织和不定根增殖生长情况进行调查。结果表明,愈伤组织在附加吲哚丁酸(IBA)4mg/L,激动素(KT)0.02mg/L和蔗糖30g/L的MS培养基中增殖效果佳。无论是愈伤组织还是不定根的增殖,反应器培养效果好于固体培养和振荡培养。在生物反应器内培养不定根的过程中,研究了培养基中pH值对不定根增殖生长和不定根中金丝桃素含量的影响,结果pH值为4.8～7.8时不定根生长不受pH值的影响,但金丝桃素的含量在pH值为4.8和5.8处理中显著高于pH值为6.8和7.8的处理,金丝桃素生产量也在pH值为4.8和5.8处理中较高(7.09和6.77mg/L)。说明利用反应器进行愈伤组织和不定根培养是短期内获得有效物质的有效方法之一。     

秋水仙碱离体诱导薄皮甜瓜四倍体的研究初报

以甜瓜组培苗茎尖为材料,研究了秋水仙碱诱导染色体倍性变异的最佳浓度、最适处理时间以及离体茎尖的最佳苗龄。结果表明：以8d苗龄的茎尖,在含有0．1mg／L秋水仙碱和较低浓度细胞分裂素的液体培养基中处理24-48h的诱导方法最有利于四倍体的产生,诱导染色体加倍的频率达30％～40％。变异株在田间表现出生长缓慢、叶片变宽加厚、茎增粗、节间变短、果皮变厚、种子变大增重的现象,显微镜观察变异后代根尖的染色体数目为2n=4x=48条。     

正交试验法优选贯叶连翘组织培养条件

采用正交试验法对贯叶连翘组织培养过程中生长素、细胞分裂素、外植体3因素进行优选研究.结果表明,贯叶连翘易于形成愈伤组织,愈伤组织、叶片易于分化形成不定芽,不定芽易于形成根.影响贯叶连翘愈伤组织诱导形成的主要因素是生长索、细胞分裂索、外植体,贯叶连翘愈伤组织诱导的最佳组合是贯叶连翘叶片,生长素0.5mg/L 2,4-D,细胞分裂素0.5 mg/L 6-BA.影响贯叶连翘愈伤组织诱导形成不定芽的主要因素是生长素,最优选择是0.01 mg/L2,4-D和0.01 mg/L IAA;细胞分裂索采用0.01 mg/L 6-BA、ZET、KT、2-ip以及愈伤组织来源采用根、茎、叶、芽,差异不明显.贯叶连翘叶片诱导形成不定芽过程中生长素最优选择是0.01 mg/LIBA,细胞分裂素采用6一BA、ZET、KT、2-ip差异不明显.1.0 mg/L生长素与0.1 mg/L细胞分裂素均能诱导贯叶连翘根的形成.     

贯叶连翘无菌苗茎尖诱导变异体研究

以研究贯叶连翘离体诱变及筛选变异体为目的,用贯叶连翘无菌苗茎尖为供试材料,研究了平阳霉素处理浓度、时间、外源添加物对供试茎尖存活率以及激素配比对茎尖不定芽诱导率的影响。结果表明:平阳霉素80mg/L的20min处理可作为适宜诱变处理,添加椰汁有利于茎尖存活;6-BA0.5mg/L、NAA0.01mg/L的激素组合有利于诱导正常型不定芽和获得较高的诱导率。通过研究,建立了贯叶连翘变异体诱导技术程序,获得了金丝桃素含量提高的变异体材料。     

用于遗传转化的贯叶连翘组织培养系统的研究

贯叶连翘恢复生长的能力较强,用0.2%HgCl2消毒幼茎3 min建立无菌苗具有较好效果;利用MS与1/2MS作为贯叶连翘的基本培养基均有较好效果;贯叶连翘的茎和叶均易于形成愈伤组织,1.0 mg/L 6-BA 1.0 mg/L NAA不仅能较好地诱导贯叶连翘形成愈伤组织,而且能较好地诱导愈伤组织形成不定芽;6-BA对贯叶连翘不定芽的形成是必要的,但高浓度的6-BA易于导致苗玻璃化,0.1 mg/L 6-BA 0.01 mg/L NAA诱导不定芽形成具有较好效果;生长素与细胞分裂素的比例为1∶10时有利于贯叶连翘形成不定芽,但不定芽生长速度慢;生长素与细胞分裂素的比例为1∶5时不定芽形成数量少,但不定芽生长速度快;以50 mg/ml的Gent.(庆大霉素)作选择压力筛选Gent.标记的阳性转基因植株效果最好;200 mg/L的Cef.(头孢霉素)对土壤农杆菌的生长抑制效果较好。     

贯叶连翘栽培技术

总结贯叶连翘栽培技术,包括选地整地、繁殖技术、田间管理、病虫害防治、采收加工等方面内容,旨在为广大药农提供技术指导。     

贯叶连翘茎段和叶片的离体培养及植株再生研究

以贯叶连翘的叶片和茎段作为外植体,培养在含有不同种类及浓度激素的MS基本培养基上,进行愈伤组织、丛生芽、根的诱导实验,并进行试管苗的移栽。结果表明,2,4-D有利于贯叶连翘愈伤组织的形成;加有6-BA0.5mg/L的MS培养基最适合丛生芽的形成;诱导生根较好的培养基是MS IBA0.5mg/L NAA0.5mg/L和MS IBA1.0mg/L。     

HPLC法测定贯叶金丝桃中金丝桃素的含量

[目的]用HPLC法测定贯叶金丝桃（Hypericum perforalurnL.）提取液中金丝桃素含量,以期为贯叶金丝桃的开发利用提供理论依据。[方法]HPLC条件为：岛津VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm,0.5μm）色谱柱;流动相为甲醇-乙酸乙酯-磷酸盐缓冲溶液（V∶V=60∶20∶20,pH=2.0）;流速为1.0 ml/min;柱温25℃;检测波长590 nm;进样量10μl。[结果]贯叶金丝桃提取液在金丝桃素含量为2.56～19.20μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,测得金丝桃素的含量为0.79 mg/g,提取率0.079%。[结论]该方法精密度良好,重现性好,稳定性好,适合贯叶金丝桃中金丝桃素含量的测定。     

矮壮素对贯叶连翘生长和金丝桃素含量的影响

[目的]研究矮壮素对贯叶连翘生长和金丝桃素含量的影响。[方法]对贯叶连翘喷施不同浓度的矮壮素,测定其生长形态、叶绿素荧光特性和金丝桃素含量金丝桃素含量的动态变化。[结果]尽管矮壮素对贯叶连翘的生长发育具有抑制效应,但是其对提高金丝桃素含量有较为明显的促进作用。适度的矮壮素处理对贯叶连翘光合荧光生理有明显的调控作用。[结论]在贯叶连翘的规模化生产和栽培中,恰当浓度的植物激素处理能提高贯叶连翘的产量和药用成分含量。该研究首次通过叶绿素荧光这一生长指标来研究不同生长激素对贯叶连翘生长生理的调控,也为中草药的安全生产与调控提供一种的新的思路。     

贯叶金丝桃离体培养及植株再生体系的建立

[目的]研究贯叶金丝桃的组培快繁技术,以提高其繁殖率和生根率,并建立一套高效的离体培养再生体系。[方法]以贯叶金丝桃幼芽为外植体,对适宜的丛生芽繁殖和生根培养基进行了筛选。[结果]适宜的繁殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L;适宜的生根培养基为1/2 MS+IAA 0.5 mg/L+ABT 0.2 mg/L。[结论]研究结果为贯叶金丝桃的种质保存和良种选育工作奠定了基础。     

贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的建立与条件优化

[目的]建立贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系,并对其条件进行优化.[方法]以贯叶连翘基因组DNA为模板,用L16(45)正交试验设计系统分析引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2浓度、dNTP浓度和模板DNA浓度5种因素对贯叶连翘ISSR-PCR反应扩增结果的影响.[结果]正交试验设计的方法可以用于贯叶连翘1SSR-PCR反应体系的建立,经过优化得到贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的最佳条件为:20μISSR-PCR反应体系中含10×PCR buffer,Mg2+浓度1.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度50 U/ml,DNA浓度20 ng/μl,dNTP浓度250 μmol/L,引物浓度0.75 μmol/L.[结论]试验建立的贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系重复性好、分辨率高,结果稳定可靠.     

贯叶连翘的化学成分及药理作用研究

贯叶连翘是具有很高药用价值的植物。它作为镇静剂、抗炎药、抗抑郁、抗肿瘤药物具有广阔的应用前景,因而越来越受到人们的重视。介绍了贯叶连翘提取物的化学成分,并总结其药理作用,以期为进一步研究和开发利用贯叶连翘提供理论基础。     

湖北小连翘与贯叶连翘中金丝桃素的含量比较

[目的]比较测定贯叶连翘和湖北小连翘中金丝桃素的含量,以期为湖北小连翘这一新金丝桃素植物资源的开发利用奠定基础。[方法]采用HPLC法测定金丝桃素含量,色谱条件为：Supelcosi lODS色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-水-0.3%磷酸,（V∶V=45∶50∶4.5∶0.5,用三乙胺调pH值至6.0）,流速为1ml/min,检测波长为590nm。[结果]相同生长环境下的湖北小连翘中金丝桃素含量约为贯叶连翘中的3倍;湖北小连翘中金丝桃素的含量随着海拔高度的升高呈逐渐下降趋势;金丝桃素在湖北小连翘各部位中以花和幼果中含量最高,可达0.617%～0.877%,在叶和成熟果实中的含量约为0.35%,根和茎中含量极低。[结论]该试验为湖北小连翘的人工种植和科学采收研究提供了理论指导,为湖北小连翘这一新金丝桃素植物资源的开发利用奠定基础。