乳铁蛋白抑制常见口腔及肠道致病菌的体外活性研究

试验旨在研究乳铁蛋白对常见口腔/肠道致病菌的抑制和细菌生物膜清除作用。选择重组人乳铁蛋白(rhLF)、牛乳铁蛋白(bLF)和蛋清溶菌酶(阳性对照组),对金黄色葡萄球菌等7种菌进行抑菌、细菌生物膜形成和清除等试验。结果表明:(1)最低抑菌浓度试验表明,rhLF、bLF对金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、沙门氏菌、牙龈卟啉单胞菌等具有较强的抑制作用;(2)抑菌圈试验表明,rhLF对金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌的抑制效果优于bLF,而对沙门氏菌、牙龈卟啉单胞菌的抑制效果差于bLF(P0.05);(3)生物膜形成抑制试验表明,不同浓度的rhLF对金黄色葡萄球菌的抑制作用均显著高于bLF(P0.05),浓度为5 mg/mL的rhLF抑制效果达到99%;(4)生物膜清除试验表明,不同浓度的rhLF对金黄色葡萄球菌的生物膜清除效果均显著高于bLF(P0.05),浓度为5 mg/mL的rhLF抑制效果达到56%。研究结果表明,乳铁蛋白对常见口腔/肠道致病菌,尤其对金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、沙门氏菌、牙龈卟啉单胞菌等,具有一定的抑制作用;同时对细菌生物膜形成具有抑制和清除作用。     

不同表型的空肠弯曲杆菌对雏鸡侵袭力和毒力具有差异

阿肯色州立大学的科研人员采用不同的弯曲杆菌表型（生物膜型和浮游型）对雏鸡进行了攻毒试验,对其侵袭力进行了评价。他们分别以琼脂糖和肉汤培养生物膜型和浮游型空肠弯曲杆菌用于试验。分别对1日龄肉鸡和2种真核细胞（INT407和DF1）采取10^5cfu／mL的细菌计量浓度进行攻毒。结果显示,持续存活在宿主中的生物膜型弯曲杆菌可能参与了最初的鸡群感染。研究结果表明,     

空肠弯曲杆菌临床株生物膜模型的建立及影响因素的研究

本研究选取空肠弯曲杆菌(C.jejuni)临床分离株作为研究对象,建立其生物膜体外模型,通过PCR、扫描电镜以及正交试验等方法,研究其相关特性及影响因素,为临床防治该病原菌并研究其耐药性的消除方面提供一定的理论依据.     

粪肠球菌生物膜的形成及影响因素

本试验研究了不同的培养时间、培养温度、生物膜引导材料和葡萄糖浓度对生物膜形成的影响,发现培养时间为36h,培养温度为37℃,生物膜引导材料为乳胶时生物膜内活菌数最多。在不影响细菌活力的条件下,糖浓度越高,生物膜内活菌数越多;刚果红-阿利新兰对不同培养时间的生物膜染色后,用高倍镜对其形成过程进行动态观察,发现8h时出现少量的细菌黏附;24h时开始形成一些微菌落;36h时开始大量黏附形成明显的微菌落;72h时膜细胞脱落,微菌落开始减少;通过光密度测定法测定生物膜形成过程中胞外多糖的含量,证实其分泌量与生物膜内细菌增长周期时间一致。研究探讨了细菌粘附和细菌生物膜的形成机理,为阻断细菌生物膜形成提供实验依据。     

一株土壤源地衣芽孢杆菌的鉴定及生物学特性研究

试验旨在筛选优质土壤源益生菌菌种资源，为畜牧生产中微生态制剂研发提供候选菌株。试验以北京市郊区农田土壤为材料，经紫外诱变、革兰氏染色和接触酶试验分离并筛选出1株对金黄色葡萄球菌具有明显抑制能力的菌株。通过16S rRNA基因进化分析和种属鉴定，判定该菌为一株地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。进一步通过耐热、耐酸、耐胆盐和抗生素敏感性检测，发现该地衣芽孢杆菌在85℃处理10 min后存活率高达93.33%,pH为3.0及2.5时对其活性均影响较小，并且在0.3%、1.0%和2.0%的胆盐浓度下培养3 h仍可继续生长，表现出优良的抗逆性。通过与病原菌混合培养以及对多种致病菌的抑菌试验检测，发现该菌株对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有抑制作用。     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分折

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性;平板抑茵试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用;与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养,确定其对致病菌的颉颃作用.结果表明:嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性;pH值为3.0时,其有广谱的抗菌活性,对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病茵均有明显的抑制作用,但对肠道内益生茵无抑制作用;在与致病菌混合培养40 h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌,18 h内可以完全消灭大肠杆菌.体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用.     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分析

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性;平板抑菌试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用;与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养,确定其对致病菌的颉颃作用.结果表明:嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性;pH值为3.0时,其有广谱的抗菌活性,对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病菌均有明显的抑制作用,但对肠道内益生菌无抑制作用;在与致病菌混合培养40 h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌,48 h内可以完全消灭大肠杆菌.体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用.     

甘草提取物对1株致犊牛腹泻大肠杆菌生物膜抑制作用的试验

大肠杆菌生物膜的形成与其致病性、抗药性有密切关系,而中药在抗生物膜方面具有独特的优势。本试验对来自新疆阿克苏地区某奶牛场6份犊牛腹泻粪便进行了细菌分离鉴定,获得24株大肠杆菌,5株沙门菌。经96孔微量板法对已分离的24株大肠杆菌进行生物膜阳性菌筛选试验,获得生物膜阳性菌3株,其中1株为强阳性(XN-3-6株)。采用不同浓度甘草提取物对XN-3-6分离株生物膜形成抑制试验,结果表明:甘草提取物抑制大肠杆菌生物膜形成的最小浓度为5%。该试验结果为临床上防治大肠杆菌引起犊牛腹泻病提供了理论依据。     

日粮中添加乳杆菌属培养物对肉鸡生长性能、小肠消化酶以及肠道与粪便中细菌酶活性的影响

试验旨在了解嗜酸乳杆菌培养物和12株乳杆菌菌株混合培养物对肉仔鸡生长性能、小肠内容物中淀粉水解酶、蛋白水解酶、脂肪酶活性以及对在粪便和肠内容物中的β-葡萄糖醛酸苷酶和β-葡萄糖苷酶活性的影响。试验选择180只1日龄健康肉仔鸡,随机分为3组,即基础日粮组(对照组)、基础日粮+1%嗜酸乳杆菌培养物组、基础日粮+1%12株乳杆菌菌株混合培养物组,试验期为40 d。结果表明,与对照组比较,嗜酸乳杆菌培养物组或乳杆菌混合菌株培养物组均能显著提高肉鸡末重(P0.05),降低料肉比(P0.05),提高淀粉酶活性(P0.05),降低肠道β-葡萄糖醛酸苷酶活性和粪便β-葡萄糖苷酶活性(P0.05);嗜酸乳杆菌培养物物组对小肠内蛋白质水解酶和脂肪水解酶的活性没有影响(P0.05)。     

宠物食品中肉毒杆菌LAMP检测方法的研究

为研究宠物食品中肉毒杆菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法,本试验根据肉毒杆菌特异性基因片段(Ntn H)设计1组引物,应用LMAP技术,通过扩增肉毒杆菌和14种非肉毒杆菌基因片段,对建立的LAMP反应体系进行最佳温度及反应时间筛选试验、采用浊度法和染色法进行特异性试验以及与PCR对比的敏感性试验。结果表明:建立的LAMP反应体系只扩增肉毒杆菌基因,特异性良好;体系最佳反应温度为64℃,最佳反应时间为60 min;最低检测浓度为0.0001 pg/μL,比PCR高出10倍。本试验所建立的方法特异性好、灵敏度高,反应时间短,适用于宠物食品中肉毒杆菌的检测。     

抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选

本研究以从断奶仔猪肠道分离的益生菌为试验菌株,将大肠杆菌K88和益生菌接种到体外培养的猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cell-1,IPEC-1)中,测定培养2.5h上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,同时将益生菌和大肠杆菌K88体外混合培养2.5h,进行平板计数,统计大肠杆菌K88菌数的变化,筛选出可以抑制大肠杆菌K88的益生菌。试验结果显示,干酪乳杆菌和凝结芽孢杆菌能显著降低IPEC-1培养上清液中的LDH活性(P<0.05),降低大肠杆菌K88对细胞的损伤;凝结芽孢杆菌能降低DMEM培养基中大肠杆菌K88的生长速度,结合模拟制粒过程及胃肠道环境的耐高温、耐酸及耐胆盐研究进行综合分析,该凝结芽胞杆菌对大肠杆菌K88有较好的抑制作用且具有良好的耐高温、耐酸及耐胆盐性能,具有作为微生态制剂菌株的应用潜力。本试验建立了能够抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选技术模型。     

布拉酵母菌与凝结芽孢杆菌混合固体发酵的培养基优化研究

文章对布拉酵母菌与凝结芽孢杆菌进行混合固体发酵,并通过正交试验研究,根据其表观现象观察和发酵产物的测定,确定了培养基的最佳配方和最适生长条件。通过正交试验得出,以固体培养基(包括麸皮、豆饼粉、玉米粉)为底料,加入4%葡萄糖、无蛋白胨、0.005%硫酸镁、0.1%磷酸二氢钾,5%接种量接入布拉酵母菌与凝结芽孢杆菌混合菌液,30℃培养48 h,布拉酵母菌与凝结芽孢杆菌混合固体发酵培养基能得到较高产量的布拉酵母菌和凝结芽孢杆菌。结果显示,在该条件下,布拉酵母菌与凝结芽孢杆菌能够以最佳的生长状态生长。     

贵州某野生动物园长臂猿流感病毒、支原体及巴氏杆菌混合感染的诊治

为弄清贵州某野生动物园长臂猿死亡的原因,本试验采用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检诊断和RT-PCR检测确诊等方法,对该野生动物园发病长臂猿进行了诊断。试验结果显示,流行病学调查、剖检病理初步诊断该野生动物园长臂猿疑似流感病毒、支原体和细菌混合感染,RT-PCR/PCR检测确诊发病长臂猿为流感病毒、支原体混合感染,细菌分离培养、生化特性鉴定和动物致病性试验确诊为多杀性巴氏杆菌感染。结果表明造成该野生动物园长臂猿发病死亡的原因为流感病毒、支原体和多杀性巴氏杆菌混合感染。根据诊断及药敏试验结果,制定出了免疫预防及治疗措施。     

分支杆菌Rv0024诱导生物膜的形成和抗细胞壁作用研究进展

多药耐药结核菌和广泛耐药结核菌的出现,使得结核病成为全球第二大传染病。而生物膜的形成在几个人类病原体发病机制作用是公认的。然而,在结核分支杆菌感染情况下生物膜的作用和生物膜形成的遗传因素仍然存在很大程度上的未知。论文通过查阅大量外文文献阐述了细胞壁在结核分支杆菌中的耐药机制,并且发现生物膜中Rv0024为新的NlpC/p60蛋白质家族的一员,通过结核分支杆菌Rv0024异位表达,编码一个假定的肽酶,并且随着抗结核药物异烟肼和吡嗪酰胺耐药性的出现,生物膜形成的Rv0024也显著增加。Rv0024可能在初次感染过程中发挥了关键作用,参与宿主细胞的耐药性产生。因此,Rv0024可作为治疗肺结核的一个潜在的药物靶标进行深入研究。     

胸膜肺炎放线杆菌在不同培养基中生长、生物膜形成及Apx毒素分泌能力的差异研究

为比较胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型～12型菌株在不同培养基中的生长、生物膜形成以及Apx毒素分泌能力的差异,选用5种细菌培养基BHI、LB、MHB、PPLO和TSB,首先测定APP不同血清型菌株在5种培养基中的生长曲线,进而测定不同血清型菌株在5种培养基中的生物膜形成能力,同时测定这些菌株对20种抗菌药物的耐药性...     

抑制表皮葡萄球菌生物膜形成的放线菌筛选及其活性研究

为筛选对表皮葡萄球菌(S.epidermidis)生物膜形成具有抑制作用的放线菌,本研究采用微量板半定量法检测了185株源自新疆南疆地区土壤中的放线菌对表皮葡萄球菌生物膜形成能力的影响。结果表明3株放线菌(TRM46200、41337和46814)的发酵液在不影响表皮葡萄球菌生长的条件下抑制其生物膜形成,并且主要在表皮葡萄球菌生物膜形成的初始黏附阶段发挥作用。本研究为开发利用新疆放线菌资源,以及寻找以抑制生物膜形成为靶点的新型抗生素提供实验依据。     

河北省奶牛乳房炎主要致病菌多重PCR检测方法的建立

为同时检测奶牛源金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和绿脓杆菌,本试验根据GenBank中3种病原菌的nuc、ef-tu和eta基因保守序列分别合成了3对特异性引物,通过对反应条件、反应体系优化,建立了多重PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法与大肠杆菌、克雷伯杆菌、表皮葡萄球菌、巴氏杆菌无交叉反应,敏感性试验结果表明,多重PCR检测方法对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和绿脓杆菌的检出限为10~(-3) mg/L。应用该方法对150份临床样品进行检测,结果金黄色葡萄球菌与无乳链球菌混合感染检出率为28.7%(43/150),金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌混合感染检出率为14%(21/150),无乳链球菌与绿脓杆菌混合感染检出率为11.3%(17/150),3种菌混合感染检出率为6%(9/150)。应用多重PCR检测结果与分离培养诊断方法结果进行比较,均能检测出样品中的病原菌,2种检测方法的总符合率分别为金黄色葡萄球菌92.6%,无乳链球菌91.3%,绿脓杆菌94.6%。该检测方法对奶牛乳房炎的防控、临床监测及疾病诊治具有重要意义。     

益生菌对半干青贮在瘤胃内干物质降解率的影响

试验以3头装有永久性瘤胃瘘管的内蒙古半细毛羯羊为试验动物,在日采食量0.8 kg、精粗比30:70的基础上,采用尼龙袋法测定了益生菌处理的半干青贮干物质在绵羊瘤胃内12 h内的降解率.结果表明:与对照组相比,添加干酪乳杆菌可显著提高玉米半干青贮的干物质降解率(P<0.05).添加干酪乳杆菌、玉米乳杆菌、泡菜乳杆菌以及詹氏乳杆菌的混合菌液使苜蓿半干青贮的干物质降解率显著提高(P<0.05);添加干酪乳杆菌和玉米乳杆菌的混合菌液使玉米与苜蓿混合半干青贮干物质降解率极显著提高(P<0.01).结果说明通过益生菌处理半干青贮料可以显著提高其在绵羊瘤胃内的干物质降解率.     

三种同型发酵乳酸菌混合培养的发酵特性及对黄曲霉抑菌作用的研究

为探讨植物乳杆菌(L)、乳酸片球菌(P)、凝结芽孢杆菌(B)及三种菌混合培养液对黄曲霉的抑菌作用,试验采用琼脂扩散法对三种菌及其混合培养的上清浓缩液进行了体外抑菌实验。结果表明:三种菌及其混合培养的上清浓缩液均对黄曲霉的生长有抑制作用,乳酸片球菌、植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌及其三者混合培养的上清浓缩液的抑菌直径分别为(15.860±0.050)、(15.737±0.155)、(14.287±0.096) mm和(15.173±0.032) mm,其中植物乳杆菌和乳酸片球菌的抑菌直径最大(P<0.05)。     

鸡源大肠杆菌分离鉴定、耐药分析及与乳杆菌体外竞争研究

为了解临床常用抗生素对鸡源大肠杆菌的耐药性及乳杆菌对致病性大肠杆菌的抑制性,试验采用SS培养基培养、显微镜检测、PCR扩增和生化试验对菌株进行分离鉴定,采用纸片扩散法测定鸡源大肠杆菌对8种抗生素的敏感性。随机选取12株鸡源大肠杆菌和1株乳杆菌采用体外液体培养的方法分成5组,即乳杆菌和大肠杆菌同时混合培养组、先定植大肠杆菌组、先定植乳杆菌组、大肠杆菌对照组、乳杆菌对照组,进行乳杆菌和大肠杆菌的竞争抑制试验。结果表明:初步筛选得到34株与大肠杆菌菌株特征相似的菌株;PCR扩增得到的目的条带为293 bp,与预期大小相符;分离得到的菌株能分解麦芽糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露醇、山梨醇,硝酸盐还原试验呈阳性,枸橼酸盐和V-P试验呈阴性,符合大肠杆菌的生化特征;分离菌对头孢氨苄、泰乐霉素的耐药率达到65%以上,对恩诺沙星、多西环素的耐药率达到50%,对安普霉素、替米考星、新霉素、黏杆菌素较为敏感,总耐药率在15%以下;24小时时乳杆菌和大肠杆菌同时混合培养抑制大肠杆菌的效果要优于先定植乳杆菌情况,36小时时先定植乳杆菌抑制大肠杆菌的效果要优于乳杆菌和大肠杆菌同时混合培养情况,48小时时先定植乳杆菌抑制大肠杆菌的效果最佳。说明分离的大肠杆菌菌株对8种常用抗生素普遍存在耐药性,乳杆菌在体外能抑制鸡源大肠杆菌的生长,且先定植乳杆菌抑制大肠杆菌的效果最佳。