藏药佐太和甲基汞对神经细胞Neuro-2a毒性的差异比较

[目的]探索藏药佐太和甲基汞对神经细胞Neuro-2 a凋亡情况的影响差异.[方法]用磺基罗丹明B法测定细胞存活率,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因表达量的变化.[结果]与空白组相比,随着孵育时间的增加(6、12、24 h),佐太组(1.83 mg/L,含汞1 mg...     

朊蛋白多肽PrP 106-126对小鼠成神经瘤细胞N2a的毒性研究

采用Annexin V-FITC/PI双重染色的流式细胞检测和细胞凋亡的形态学观察,探讨了朊蛋白多肽PrP106-126对小鼠成神经瘤细胞系N2a细胞的毒性作用.结果表明:15、25和50μmol/L浓度的PrP 106-126作用于N2a细胞24 h均引起了细胞明显的形态学变化,提高了细胞凋亡率(P＜0.05),且浓度越大,凋亡效果越明显;在浓度为25μmol/L时,PrP 106-126作用N2a细胞48 h引起的毒性作用明显大于24 h,而100μmol/L PrP 106-126作用N2a细胞12 h并未引起细胞凋亡(P＞0.05).试验还表明PrP 106-126对神经细胞产生的毒性是淀粉样纤维物质作用细胞逐渐造成的结果.     

印楝素A诱导Sf9细胞凋亡的显微和超微形态变化

利用倒置显微镜和透射电子显微镜技术观察印楝素A诱导草地贪夜蛾Spodoptera frugperda蛹卵巢Sf9细胞凋亡的显微和超微形态变化.结果表明:1.5μg.mL-1印楝素A对Sf9细胞具有显著的凋亡诱导作用,从凋亡小体和贴壁细胞数量变化判断,印楝素A处理12 h,细胞开始出现少量凋亡小体,12~24 h凋亡小体逐渐增多,但贴壁细胞未见明显减少,因此24 h之前(0~24 h)属于凋亡早期阶段;24~36 h凋亡小体大量出现,贴壁细胞逐渐减少,属于凋亡中期;处理36 h以上,凋亡小体和贴壁细胞急剧减少,细胞凋亡进入晚期.观察诱导24 h的细胞超微结构发现,胞内的主要细胞器在数量或形态上发生了显著变化,包括溶酶体数量显著增加,线粒体内部嵴变模糊,内质网从囊泡状变成线管状,细胞核出现分页、皱缩以及区域性膨大等.     

苦参素对人肝正常细胞L02影响的实验研究

目的 探讨不同浓度苦参素(OM)作用不同时间对人肝正常细胞L02的损伤作用或不良反应.方法 体外培养人肝正常细胞L02;采用MTT法观察不同浓度的OM作用不同时间后观察肝正常细胞L02细胞形态变化及增殖的情况.结果 倒置显微镜下观察:与阴性对照组相比较,OM作用时间在24h、浓度为0～2.0mg/ml时L02细胞的形态及数量无明显变化,当作用时间超过24h后,随着时间延长、浓度增加,OM实验组L02细胞收缩变小、与周围细胞分离、细胞核周围较多空泡样结构均越明显,细胞数量逐渐减少.MTT检测结果显示:①当作用时间在24h时,与阴性对照组相比较,OM浓度为0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml时对正常肝细胞L02的增殖无明显抑制作用(P＞0.05),浓度为3.0mg/ml、4.0mg/ml、8.0mg/ml时对人肝正常细胞增殖有不同程度的抑制作用(P＜0.05),其抑制率分别为8.48％、15.43％、51.72％;②OM 1.0mg/ml、2.0mg/ml、3.0mg/ml、4.0mg/ml、8.0mg/ml各浓度组作用于L02细胞48h和72h的抑制率分别为18.79％、26.06％、27.58％、31.52％、76.36％和33.20％、38.53％、41.82％、55.61％、89.95％.与24h相比较,作用48h、72h对正常肝细胞的增殖有不同程度的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01).结论 OM在低浓度短时间内对人正常肝细胞L02无明显损伤或不良反应,但随着浓度增加、作用时间延长对人正常肝细胞L02的增殖有不同程度的损伤或不良反应,且呈时间-剂量依赖性.     

醋酸铅对蚕豆根尖细胞微核率的影响

为研究铅对蚕豆根尖细胞遗传物质的损伤所用,以青皮蚕豆vicia faba L.为试验材料,通过蚕豆根尖细胞微核试验分析0.5~30mg·L~(-1)的醋酸铅对蚕豆根尖细胞微核率的影响,并计算污染指数。结果表明,蚕豆根尖细胞的微核率随染毒质量浓度的增加均呈上升的趋势,经30.0mg·L~(-1)醋酸铅染毒6h的细胞微核率显著高于对照组(P0.05),污染指数大于3.5,属于重度污染;经1.0~30.0mg·L~(-1)醋酸铅溶液染毒12h的细胞微核率均极显著高于对照组(P0.01),污染指数均大于3.5,属于重度污染;相同质量浓度醋酸铅溶液染毒处理6h后的细胞微核率均明显低于染毒处理12h组,但仅在质量浓度为1mg·L~(-1)时2组之间达到显著差异水平(P0.05)。研究显示,Pb2+可以通过蚕豆根尖的吸收而毒害细胞,引起细胞DNA损伤,且损伤程度随剂量的增加和时间的延长而加重。     

纳米银对原代培养海马神经细胞凋亡的研究

[目的]探讨纳米银对原代培养海马神经细胞的影响。[方法]用吖啶橙染色观察细胞形态及染色质的变化,用Fluo3荧光染料检测细胞内游离Ca2+浓度变化,并利用ELLSA试剂盒检测Caspase-3凋亡酶活性。[结果]与正常对照组相比,经50μg/ml纳米银处理36h后,海马神经细胞的凋亡率达到最高((48.3±0.33)%),凋亡酶活性增强,并且细胞内游离的Ca2+荧光强度达到41.70±18.78。结论50μg/ml纳米银作用36 h可导致海马神经元凋亡。     

乙醇等有机溶剂对肿瘤细胞PC12的毒性剂量分析

分析一定浓度的甲醇、乙醇、丙酮和甘油作用下肿瘤细胞 PC12形态和生存率的变化,确定上述有机溶剂对细胞的毒性剂量。研究发现,PC12细胞对上述溶剂表现出不同的耐受性,其中乙醇的毒性剂量最低,20 ml/L浓度作用24 h细胞生存率就下降近40%;该浓度的丙酮和甲醇干预 PC12细胞24 h对应的细胞生存率则分别下降约20%和15%;甘油的作用相对缓和,但随着干预浓度逐渐增大时,也表现明显的细胞毒性。该研究可为后续药理研究提供参考资料。     

乙醇等有机溶剂对肿瘤细胞PC12的毒性剂量分析（英文）

分析一定浓度的甲醇、乙醇、丙酮和甘油作用下肿瘤细胞PC12形态和生存率的变化,确定上述有机溶剂对细胞的毒性剂量。研究发现,PC12细胞对上述溶剂表现出不同的耐受性,其中乙醇的毒性剂量最低,20 ml/L浓度作用24 h细胞生存率就下降近40%;该浓度的丙酮和甲醇干预PC12细胞24 h对应的细胞生存率则分别下降约20%和15%;甘油的作用相对缓和,但随着干预浓度逐渐增大时,也表现明显的细胞毒性。该研究可为后续药理研究提供参考资料。     

蜂王浆对阿尔兹海默症SH-SY5Y细胞模型抗氧化功能的影响

采用3个指标SOD、MDA和ROS评估蜂王浆对冈田酸(okadaic acid, OA)诱导的阿尔兹海默症(Alzheimer′s disease, AD)人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞模型的抗氧化作用.用OA损伤SH-SY5Y细胞后加入不同含量的蜂王浆培养24、48、72 h,观察OA损伤前后的细胞形态变化,用CCK法检测细胞活度,并检测SOD、MDA和ROS的含量.结果表明,一定的OA剂量和处理时间会使细胞形态发生明显变化,细胞活度明显下降,对3个抗氧化指标的检测结果表明,蜂王浆能显著提高阿尔兹海默症SH-SY5Y细胞模型的抗氧化水平,推测其对受损神经细胞具有保护作用,并可能对AD有一定积极效果.     

秋水仙素对肇东苜蓿根尖细胞染色体的影响

为了探究秋水仙素对肇东苜蓿根尖细胞染色体的影响,利用不同浓度的秋水仙素(0.01%、0.05%、0.10%、0.15%和0.20%)以及处理时间(12、24、36和48h)分别对肇东苜蓿根尖细胞进行诱导,观察肇东苜蓿根尖细胞染色体、细胞中期分裂指数和细胞加倍指数的变化。结果表明:秋水仙素诱导了肇东苜蓿根尖细胞染色体的变异,细胞内染色体加倍,数目不等(32、64及128条);在时间与浓度互作方面,秋水仙素溶液浓度为0.15%时处理肇东苜蓿根尖12h,使细胞中期分裂指数达到最大值18.51%;利用浓度为0.10%的秋水仙素处理24h,细胞加倍指数达到最高值11.57%。     

Migration and differentiation of cerebral cortical neurons after transplantation into the brains of ferrets

Cells from the cerebral proliferative zones of newborn ferrets were labeled with tritiated thymidine and a fluorescent dye and were transplanted as a single-cell suspension into the occipital region of newborn ferrets. The transplanted cells became thoroughly integrated into the host environment: many cells migrated through the intermediate zone and into the cortical plate, where they developed as pyramidal neurons. Other transplanted cells came to resemble glial cells. After 1 to 2 months most transplanted neurons had taken up residence in layer 2 + 3, the normal destination of neurons generated on postnatal days 1 and 2. Thus the sequence of morphological differentiation and the eventual laminar position of the isochronically transplanted neurons closely paralleled that of their normal host counterparts.     

母鼠妊娠期铅镉联合暴露对新生鼠大脑bcl-2,Bax和c-fos mRNA表达的影响及NAC保护效应

 【目的】研究母鼠妊娠期铅镉联合暴露对新生鼠大脑bcl-2、Bax、c-fos mRNA表达的影响及N-乙酰半胱氨酸（N-Acetylcysteine, NAC）的保护作用。【方法】35只怀孕SD母鼠被随机分为7组,即A组为对照组（饮用蒸馏水）、B组为铅组（300 mg?L-1）、C组为铅+NAC组（300 mg?L-1 +20 mmol?L-1）、D组为镉组（10 mg?L-1）、E组为镉+NAC组（10 mg?L-1+20 mmol?L-1）、F组为铅+镉组（300 mg?L-1+10 mg?L-1）、G组为铅+镉+NAC组（300 mg+10 mg?L-1+20 mmol?L-1）。采用饮水染毒,染毒时间为21d,分娩后应用实时荧光定量PCR检测新生鼠大脑bcl-2、Bax、c-fos mRNA的相对表达。【结果】与对照组比较,各染毒组bcl-2 mRNA表达降低,除B组外,D组、F组均差异显著（P＜0.05）,Bax、c-fos mRNA表达显著升高（P＜0.05）,其中以F组作用最为明显;NAC拮抗组与相应染毒组比较,除C组bcl-2 mRNA表达与B组无显著性差异外（P﹥0.05）,其余各组差异显著（P＜0.05）;Bax、c-fos mRNA表达均显著降低（P＜0.05）。【结论】铅镉联合表现协同毒性效应,NAC对铅、镉致新生鼠大脑凋亡基因表达异常引起的脑细胞凋亡具有明显的保护作用。     

维生素C对新生大鼠海马神经细胞生长的影响

取新生大鼠海马组织进行原代体外分散培养,用MTT比色法检测不同浓度维生素C对神经细胞生长的影响,并观察其形态学变化和分化程度。结果表明,2和20nmol/L维生素C组对神经细胞生长的影响与对照组无显著差别(P>0.05);200nmol/L维生素C组能促进神经细胞的存活,与对照组相比差异显著(P<0.01),进一步观察发现,该处理的细胞突起数目、长度、胞体面积均显著高于对照组(P<0.01);2000nmol/L维生素C组可显著减少细胞的存活数,能引起细胞凋亡。提示200nmol/L维生素C对神经细胞生长发育有一定的促进作用。     

2 种原代培养方法对新生大鼠大脑皮质神经元生物学特性的影响

为明确不同培养方法对新生大鼠大脑皮质神经元成熟时间、形态特征、纯度及活力等生物学特性的影响,采用DMEM培养基加Neurobasal无血清培养基法或Neurobasal无血清培养基法原代培养新生24h内SD大鼠大脑皮质神经元,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,免疫荧光细胞化学染色法检测神经元纯度及活性.结果显示,2种方法培养的神经元形态差异无统计学意义;但与DMEM培养基加Neurobasal无血清培养基法相比,Neurobasal无血清培养基法培养的神经元成熟更早,数目更多,纯度更高,活力更强(p0.05).结果提示,原代培养的大脑皮质神经元部分生物学特性受培养方法直接影响;Neurobasal无血清培养基法所得神经元纯度与活性较高,这为实验目的导向的神经元原代培养方法选择提供了借鉴.     

反复脑缺血再灌注对小鼠学习记忆和脑内氧化损伤的影响

目的建立血管性痴呆（VD）动物模型,并探讨反复脑缺血再灌注对小鼠认知障碍和脑组织氧化损伤的影响．方法健康的昆明小鼠30只,随机分为3组,即正常组、假手术组、模型组．采用清醒小鼠反复脑缺血再灌注手术方法,应用跳台法、避暗法、Morris水迷宫研究脑缺血再灌注对小鼠行为学的影响;通过HE、尼氏染色观察病理形态学变化;用生化分析方法检测脑组织中SOD活性、MDA的含量．结果与正常组比较,反复脑缺血再灌注能导致小鼠出现明显的学习记忆功能障碍,模型VD小鼠SOD的活性降低（P〈0．01）,MDA的含量增加（P〈0．01）．结论反复脑缺血再灌注能引起小鼠学习记忆功能障碍,这可能与脂质过氧化反应、自由基代谢紊乱有关．     

醋酸铅对黄独带芽茎段生长发育的影响

采用添加不同浓度醋酸铅的培养基（MS＋KT2mg／L＋NAA0．1mg／L）培养黄独带芽茎段,并定期观察各培养基中黄独试管苗的各种形态指标。结果表明：醋酸铅对黄独的生根具有抑制作用,当醋酸铅浓度达到1g／L时,黄独试管苗无生根现象;醋酸铅对丛生芽及新叶的再生也具有抑制作用,醋酸铅浓度越大,丛生芽及新叶数也显著下降,当醋酸铅浓度达到1g／L时,黄独试管苗均无新芽和新叶的再生现象。     

Reduced numbers of somatostatin receptors in the cerebral cortex in Alzheimer's disease

Somatostatin receptor concentrations were measured in patients with Alzheimer's disease and controls. In the frontal cortex (Brodmann areas 6, 9, and 10) and temporal cortex (Brodmann area 21), the concentrations of somatostatin in receptors in the patients were reduced to approximately 50 percent of control values. A 40 percent reduction was seen in the hippocampus, while no significant changes were found in the cingulate cortex, postcentral gyrus, temporal pole, and superior temporal gyrus. Scatchard analysis showed a reduction in receptor number rather than a change in affinity. Somatostatin-like immunoreactivity was significantly reduced in both the frontal and temporal cortex. Somatostatin-like immunoreactivity was linearly related to somatostatin-receptor binding in the cortices of Alzheimer's patients. These findings may reflect degeneration of postsynaptic neurons or cortical afferents in the patients' cerebral cortices. Alternatively, decreased somatostatin-like immunoreactivity in Alzheimer's disease might indicate increased release of somatostatin and down regulation of postsynaptic receptors.     

大鼠全脑缺血前注射灯盏花素对再灌后海马神经元内钙离子浓度的影响

目的观察灯盏花素对大鼠脑缺血再灌后海马CA1区神经元内游离钙离子浓度的影响。方法采用钙离子成像系统检测海马CA1区神经元内钙离子浓度。实验分为(1)正常组:大鼠不做任何处理,直接断头取脑分离出神经元,观察神经元内钙离子浓度;(2)再灌注组:制作大鼠的全脑缺血模型,并以再灌后分1.5、3.0、4.5、6.0 h 4个时间点进行观察;(3)灯盏花素组:在制作全脑缺血模型前15 min腹腔注射灯盏花素50 mg/kg,并以再灌后分1.5、3.0、4.5、6.0 h 4个时间点进行观察。每组(时间点)均检测11个神经元。结果再灌注组再灌后1.5、3.0、4.5 h时间点与正常组比较,Ca2 浓度升高(P<0.05或P<0.01);再灌后6.0 h神经元内游离Ca2 浓度与正常组比较,差异无统计学意义。灯盏花素组再灌后1.5、4.5 h时间点Ca2 浓度比再灌组相同时间点低(P<0.01);而再灌后3.0、6.0 h Ca2 浓度与再灌组相应时间点比较,差异无统计学意义。结论全脑缺血前给予灯盏花素可降低全脑缺血再灌后大鼠海马CA1区神经元内游离Ca2 浓度。     

大鼠大脑皮质神经元的分离及培养

为了给更好地研究神经元病理变化提供物质材料,对新生大鼠大脑皮质神经元进行体外分离和培养。无菌操作取新生大鼠的大脑皮质,采用机械法和胰蛋白酶消化法相结合的方法分离细胞,制备单层细胞悬液接种培养板;5-氟脱氧尿嘧啶处理等方法纯化神经元,甲苯胺蓝染色法及抗NSE单克隆抗体对纯化后的神经元进行鉴定。结果表明,培养的神经元生长良好,形态正常,纯度高达90%以上。采用本方法培养的神经元可作为深入研究中枢系统疾病的细胞模型材料。