RFLP在农作物遗传和改良中的应用

最近十多年,由于分子生物学的发展,发现了一个DNA水平上的标记,即限制片段长度多态性(RFLP)。两个基因型迥异的个体,其基因组DNA经一种限制性内切酶消化,电泳,印迹在一种膜上,再用放射性标记的去克隆DNA探针与之杂交,由于个体间DNA顺序的差异,杂交图谱表现出多态性。 随机分布的RFLP作为一种新的遗传标记首先是在人类遗传研究中采用的。由于     

水稻RFLP遗传作图群体重建的初步研究

用已定位的94个RFLP标记为探针,测定了12种限制性内切酶酶切后的F_2群体中58个单株及其双亲的RFLP表现。根据各标记F_2群体中的连锁分析资料,初步重建了水稻RFLP遗传作图群体。结果表明:51个标记被定位在10条染色体上,它们的连锁群和定位位置相同于原遗传图;18个标记揭示了双亲间的多态性,但是,没有发现与其它标记的连锁关系;12个标记至少在1种酶切条件下揭示出RFLP,然而,它们现属的连锁群有别于原遗传图;其余13个标记无法揭示RFLP存在。这一遗传群体可供新的DNA标记的定位。     

RFLP在植物类菌原体研究中的应用

一、RFLP分析的原理 限制性片段长度多态性分析(RFLP analysis)的原理是:限制性内切酶识别双链DNA分子的特定序列,并在特定位点将DNA切开,形成长度不等的限制片段。两个个体间DNA的核苷酸顺序变化就意味着各自DNA的特异性切点分布不同,从而经限制牲内切酶酶解后产生不同的限制片段。当这些大小不等的片段通过凝胶电泳时就形成不     

PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究

 Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。     

限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）及其在植物育种中的应用

 本文是一篇有关遗传标记的综述论文，探讨了限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）及其在植物育种中的作用。首先简述了RFLP技术的理论基础，它可作为遗传标记加以利用，在理论上可运用RFLP进行遗传作图，而在植物育种中潜在的应用价值有：1.鉴别品种及品种专利；2.遗传资源多样性的识别；3.在数量性状研究中的应用；4.外源染色体的鉴别。最后还比较了RFLP、同工酶及RAPD等遗传标记的异同和优、缺点。     

遗传标记及其在园艺植物研究中的应用

评述了形态学标记(morphologicalmarkers)、细胞学标记(cytologicalmarkers)、生化标记(bio鄄chemicalmarkers)、DNA分子标记(DNAmolecularmarkers)等技术的发展现状,着重介绍了近年来DNA指纹图谱技术,即限制性片段长度多态性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism,RFLP)、随机扩增片段长度多态性(RandomAmplifiedPolymophismicDNA,RAPD)、简单重复序列(simplesequencere鄄peats,SSR)、扩增片段长度多态性(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism,AFLP)、单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)等标记技术的特点及其在园艺植物品种的分类鉴定、纯度的分析检测及品种间亲缘关系等研究中的应用。     

三个抗锈基因Lr37、Sr38和Yr17分子标记的筛选与改良

含有偏凸山羊草2NS染色体的普通小麦易位系带有三个紧密连锁的抗锈基因Lr37、Sr38和Yr17.以内切酶EcoRI和分子探针Xmwg682为基础,发现来自偏凸山羊草2NS的易拉片断在1.8kb处有一条独特的RFLP标记.通过DNA克隆和测序,这条RFLP被成功地转换成为引物UI和LN1为基础的PCR标记.回交后代的鉴定结果表明,该PCR标记的灵敏度和专化性与RFLP标记基本相同.     

家蚕卵线粒体DNA限制性内切酶长度多态性研究

利用29种限制性内切酶对34个不同品种家蚕卵mt DNA进行酶切分析,发现一化、二化品种与多化品种的HaeⅢ酶切图谱有差异,但不同的地理品种间没有出现酶切多态性现象。另外,一些家蚕品种的受精卵和非受精卵mt DNA在Bgl I和Pst I酶切焉,呈现不同的酶切带型。同时,绘制了较精确的家蚕mt DNA限制性内切酶酶切图谱。     

衣藻肌动蛋白基因的克隆及核苷酸序列分析

提取衣藻总 DNA,以此为模板并参照肌动蛋白基因编码区端的序列合成寡聚核苷酸引物,进行聚合酶链式反应,扩增到一个1.2 kb 的 DNA 片段.将此片段进行克隆并经分子探针杂交,证明此片段为衣藻肌动蛋白基因.经限制性核酸内切酶处理,构建了衣藻肌动蛋白基因的物理图谱.根据物理图谱进行亚克隆以后,测得了编码区5′端的618个核苷酸的顺序.衣藻肌动蛋白基因的编码序列与高等植物之间的同源性大于90%,高于与高等动物、原生动物及真菌的同源性.但在基因的结构上,衣藻肌动蛋白基因又明显地不同于高等植物,在已经测定的基因片段上,没有发现内含子的存在.经限制性内切酶片段多态性分析,衣藻中含有一个肌动蛋白基因拷贝.     

家禽基因育种工程研究新进展

基因研究历史回顾 1 1953年Watson和Crick研究清楚了DNA的结构。随后几年专家们搞清楚了细胞内遗传信息（DNA）的储藏、复制以及世代传递等问题。现在重点集中在对遗传标记进行研究，即对限制内切酶片段（RFLP）的研究。1985年Jenreys等发现的DNA指纹图（Genetic fingerprint）作为RFLP技术的另一方法引起大家的高度重视。     

PCR标记对水稻温敏雄性核不育株的鉴别

用3个与水稻温敏雄性核不育(TGMS)基因紧密连锁的PCR标记C365-1、S2-40和InDel37,对云南低海拔(260 m)早季种植的2个籼稻TGMS株系配制的杂交组合的F2 和F3代分离群体中筛选出的146个单株(126个TGMS单株和20个可育株)及经多代自交获得的15个TGMS株系的基因型进行鉴别,结果表明:只有标记C365-1在来自两个群体的不育株和可育株DNA池间显示出多态性。不育株DNA池产生两个PCR片段,分别为418 bp(定名为C365-418 bp)和344 bp(定名为C365-344 bp),而可育株DNA池只产生C365-418 bp片段。经克隆测序比对,显示多态性的C365-344 bp片段与水稻第2染色体上的OJ1001_D05克隆的DNA序列相似性为84%,与TGMS基因ptgms2-1和tms5的距离约为19.1 kb;与水稻第6染色体上的OJ1001_B06.3 和OJ1001_B06.4两个克隆间隔区的DNA序列的相似性为98%,与TGMS基因TMS相距约1 cM。在146个单株中,标记C365-1的基因型值与单株育性表型值间的相关系数为0.944,达极显著水平。来自15个TGMS株系的每一个株系都显示出与不育株DNA池相同的带型。以上结果说明,PCR标记C365-1可较为有效地鉴别水稻TGMS株携带的TGMS基因,该标记可作为水稻TGMS株基因型分子标记辅助选择的有效标记。     

Salivary proline-rich protein genes on chromosome 8 of mouse

Endonuclease restriction (Hind III) fragments of DNA from Chinese hamster X mouse somatic cell hybrids hybridized with proline-rich protein complementary DNA clones only when the DNA was isolated from cells containing mouse chromosome 8, or a fragment of chromosome 8. The evidence suggests that proline-rich protein genes are located at the proximal portion of chromosome 8 toward the centromere.     

水稻雄性不育性及其分子标记辅助选择

综述了水稻质核互作雄性不育性及光温敏雄性不育性的遗传规律及分子标记辅助选择。质核互作雄育性由细胞质不育（Ｓ）和两对隐性细胞核基因控制,为孢子体不育的典败类型。光温敏核不育系,长日高温雄性不育,短日低温雄性可育,其不育性受两对隐怀基因控制,与细胞质无关,为孢子体不育的典败类型。ｐｍ１位于第７染色体,上与分子标记ＲＧ４７７的遗传距离３．５ｃＭ,下与ＲＧ５１１和ＲＺ２７２相距１５．０ｃＭ;ｐｍ２display     

Construction of Agropyrum intermedium 2Ai-2 Chromosome DNA Library and Cloning of Species-Specific DNA Sequences

The univalent from the meiosis-metaphase spreads of F1 (Z2× wheat variety Wan7107) was identified to be Agropyrum intermedium 2Ai-2 chromosome by GISH. The 2Ai-2 chromosomes were microisolated and collected. After two rounds of PCR amplification, the PCR products were ranged from 150 - 3 000 bp,with predominant fragments at about 200 - 2 000 bp. Using Ag.intermediumgenomic DNA as a probe, Southern blotting analysis confirmed the products originated from Ag. intermediumgenome. The products were purified, ligated to pUC18 and then transformed into competence E.coli DH5α to produce a 2Ai-2 chromosome DNA library. The microcloning experiments produced approximately 5×105 clones, the size range of the cloned inserts was 200- 1 500 bp, with an average of 580bp. Using Ag. intermediumgenomic DNA as a probe, dot blotting results showed that 56% clones are unique/low copy sequences, 44% are repetitive sequences in the library. Four Ag. intermedium clones were screened from the library by RFLP, and three clones(Mag065, Mag088, Mag139)belong to low/single sequences, one clone(Mag104)was repetitive sequence, and GISH results indicated that Mag104 was Ag.intermedium species-specific repetitive DNA sequence.     

油松雌性不育系(28号无性系)的RAPD分析

辽宁兴城油松种子园中的 2 8号无性系是雌性不育变异体 .为了探索不育原因 ,揭示与育性相关的分子机制 ,该实验运用RAPD技术对 2 8号雌性不育系及部分可育系进行分析 ,目的在于寻找与 2 8号不育系遗传背景最相近的可育系 ,为进一步研究提供选材依据 .实验结果表明 ,5 9个 10碱基的随机引物共扩增出 2 36个条带 ,其中具有多态性的条带有 4 2个 ,占 17 8% ,证明供试油松无性系间遗传变异性较小 .用NTSYS2 0软件包进行结果分析 ,发现可育系中15号无性系与 2 8号不育系遗传距离较近 ,此组材料可用作研究油松雌性不育分子机制的对比材料 .用S37号引物从2 8号雌性不育系基因组扩增出一条分子量为 75 0bp的特异DNA片段 .     

油松雌性不育系(28号无性系)的RAPD分析

辽宁兴城油松种子园中的28号无性系是雌性不育变异体.为了探索不育原因,揭示与育性相关的分子机制,该实验运用RAPD技术对28号雌性不育系及部分可育系进行分析,目的在于寻找与28号不育系遗传背景最相近的可育系,为进一步研究提供选材依据.实验结果表明,59个10碱基的随机引物共扩增出236个条带,其中具有多态性的条带有42个,占17.8 %,证明供试油松无性系间遗传变异性较小.用NTSYS2.0软件包进行结果分析,发现可育系中15号无性系与28号不育系遗传距离较近,此组材料可用作研究油松雌性不育分子机制的对比材料.用S37号引物从28号雌性不育系基因组扩增出一条分子量为750 bp的特异DNA片段.     

葡萄金黄化植原体16SrDNA检测与RFLP分析

[目的]对多种植原体16SrDNA基因序列进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析比较,以期区分葡萄金黄化植原体不同亚种,从而为葡萄金黄化植原体的鉴定提供新依据.[方法]用植原体通用引物R16mF2/R16mR1扩增7种不同植原体16SrDNA基因序列,得到约1.5 kb的DNA片段,将此片段克隆到PGM-T载体,并通过酶切鉴定,对重组阳性克隆进行核酸序列测定及同源性分析,利用限制性内切酶XmnⅠ、XspⅠ、TaqⅠ和Rsa Ⅰ对目的片段进行酶切电泳分析.[结果]所扩增2个不同亚种的葡萄金黄化植原体D型和C型序列同源性最高,达99.72;,但利用限制性内切酶可以将上述2个亚种从植原体榆树黄化组中区分.[结论]利用限制性内切酶分析通用引物R16mF2/R16mR1所扩增的基因片段,可以将葡萄金黄化植原体区分.     

新疆主要棉区棉花黄萎病菌致病力分化及其遗传多样性分析

测定了源于新疆棉区的22个棉花黄萎病菌单孢菌株和3个落叶型棉黄萎病菌菌株T9、VD8和V151对4个棉花品种上的致病力.采用随机引物聚合酶链反应(RAPD)技术分析了这些菌株的遗传多样性.结果表明:供试的25个棉花黄萎病菌之间的致病力存在显著差异(P<0.05).在各棉花品种上,22个新疆菌株中都有与T9、VD8或V151的致病力差异不显著的菌株,说明新疆存在较强致病力的棉花黄萎病菌菌系.RAPD分析表明,供试的8个随机引物中6个可以从25个菌株的基因组DNA中稳定地扩增出多态性DNA片段.对扩增片段统计结果表明,供试菌株间遗传相似系数变化幅度为0.57～1.00.聚类分析表明,在阈值0.625处可将25个菌株分为4个RAPD群(命名为RG1、RG2、RG3和RG4),RG1包括2个菌株,即B、BL-19菌株; RG2 包括5个菌株,即BL-17、BL-13、N-5、H、N-16;RG3为最大一个亚群,包括T9、SL等16个菌株;RG4包括2个菌株,即VD8和V151.综合分析表明新疆棉花黄萎病菌的致病力强弱和菌株的采集地等遗传背景存在一定的差异,这可能与各主产棉区的频繁引种有着直接的联系.     

刺槐无性系遗传多样性的AFLP分析

采用AFLP分子标记技术对53个刺槐无性系进行遗传多样性和亲缘关系分析。结果显示：8对引物共检测出1230条谱带,其中有1218条为多态带,占总谱带的9902%;特异性条带有203条,其中缺失带为11条,通过特异性条带可鉴别83%的刺槐无性系;聚类分析将刺槐种质分成5组,来源相同的无性系并未严格聚在一起,未形成明显的地理变异模式。