动物乳汁中瘦素的研究进展

为了更好的理解乳汁中瘦素的来源和功能，作者综述了在人等哺乳类动物的妊娠、泌乳阶段乳腺中leptin及其受体的基因表达，血液和乳中的瘦素含量。乳腺的多种组织能够表达leptin，其作为一种分泌因子,影响乳腺上皮细胞的生长分化；上皮细胞能够将leptin从血液中转运出来，这是leptin在乳中存在的主要原因。乳中的leptin蛋白可能对新生儿有生理作用。     

漏芦乙醇提取物对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路的影响

为了探讨漏芦乙醇提取物对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路的影响,试验以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,先利用CASY细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(质量浓度分别为25,50,100,200,400μg/mL)作用于奶牛乳腺上皮细胞后乳腺上皮细胞的活力和增殖能力,选择添加对细胞生长增殖不受抑制即对细胞无毒性的漏芦乙醇提取物浓度来研究其对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路信号分子表达的影响。采用确定浓度的漏芦乙醇提取物处理细胞,然后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路关键信号分子信号转导与转录激活因子5(STAT5)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因的mRNA表达水平,以及采用Western-blot技术检测奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路关键信号分子的蛋白质表达水平。结果表明:较高剂量(200,400μg/mL)的漏芦乙醇提取物显著抑制了奶牛乳腺上皮细胞活力及增殖能力(P0.05),因此选择25,50,100μg/mL的漏芦乙醇提取物来研究其对乳腺上皮细胞泌乳信号通路信号分子表达的影响;25,50,100μg/mL的漏芦乙醇提取物可显著提高细胞泌乳信号通路信号分子STAT5、mTOR、SREBP1、AKT1、GLUT1基因的mRNA表达水平(P0.05)及p-STAT5、p-mTOR、SREBP1、p-AKT1、GLUT1蛋白质表达水平(P0.05),但对PPARγ基因的mRNA表达及蛋白质的表达无显著影响(P0.05)。说明漏芦乙醇提取物能通过调节泌乳信号通路关键信号分子的表达,进而促进奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖的合成。     

乙酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯含量及瘦素和过氧化物酶增殖物激活受体γ基因表达量的影响

本试验旨在研究乙酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯(TAG)含量及瘦素(leptin)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达量的影响。将传至第3代的奶牛乳腺上皮细胞以适宜的密度培养48 h后,随机分为6个处理,各处理分别采用乙酸浓度为0(对照组)、4、6、8、10和12 mmol/L的培养液。置于37℃5%CO2培养箱继续培养48 h。收集细胞,观测脂滴形成状况,测定TAG含量及leptin和PPARγ基因表达量。结果表明:随乙酸浓度的增加,培养的奶牛脂肪前体细胞脂滴形成增多;随乙酸浓度的增加,TAG含量和PPARγ基因表达量均呈显著的线性或二次曲线增加(P<0.05),且以乙酸浓度为10和12 mmol/L时效果较好;一定浓度的乙酸可上调leptin基因表达量,尤以浓度为8、10 mmol/L时上调作用较好。结果提示,乙酸对奶牛乳腺上皮细胞内脂滴的形成、TAG的积累、leptin和PPARγ基因的表达有显著的促进作用。本试验条件下,乙酸浓度为10～12 mmol/L时能较好地促进PPARγ基因的表达,浓度为8～10 mmol/L时能较好地促进leptin基因的表达。     

瘦素受体表达量在苏钟猪脂肪沉积调控中的作用

瘦素受体（leptin receptor,LEPR）在机体的体质量平衡、造血、生殖、血管生成和免疫过程中发挥着重要作用。为进一步了解LEPR基因在苏钟猪脂肪沉积调控中的作用机制,本研究利用Real-time PCR方法和Western-blot方法分析该基因在12头苏钟猪中5个脂肪易沉积组织（心脏、肝脏、肾脏、背膘和眼肌）RNA和蛋白水平的表达谱信息。结果表明：LEPR的mRNA在这5种组织中均有表达,其在各组织中的mRNA表达丰度表现为：背膘〉眼肌〉心脏〉肝脏〉肾脏,其中在背膘的表达量极显著高于其他几种组织（P〈0.01）;LEPR蛋白在这5种组织中也均有表达,其中在心脏中的表达量最高,显著高于其他组织（P〈0.01）,且在公猪组织的表达量显著高于母猪组织（P〈0.05）;另外,LEPR第18外显子在苏钟猪群中检测到3个高突变率的SNPs。LEPR对苏钟猪的背膘、肌肉、心脏、肾脏、肝脏等组织的脂肪沉积有重要影响,是苏钟猪肉质改良育种中潜在的重要候选基因。     

催乳素通过酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5信号通路促进奶牛乳腺上皮细胞乳铁蛋白合成和分泌

本试验旨在研究催乳素（PRL）对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）中酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5(JAK2/STAT5)信号通路介导的乳铁蛋白（LF）合成和分泌的影响。添加不同浓度的PRL[0（对照）、10、100、1 000 ng/mL]处理BMECs 24 h,分析PRL对LF含量和LF、催乳素受体（PRLR）以及JAK2/STAT5信号通路基因表达量和相关蛋白表达的影响。为了验证STAT5在PRL促进BMECs LF合成和分泌的关键作用,添加STAT5抑制剂匹莫齐特（Pimozide）[未添加Pimozide（对照）、10μmol/L Pimozide、100 ng/mL PRL、10μmol/L Pimozide+100 ng/mL PRL]处理BMECs 24 h,测定PRL和Pimozide对LF含量和LF、JAK2/STAT5信号通路基因表达量和相关蛋白表达以及相对荧光强度的影响。结果表明：1）与对照组相比,10、100、1 000 ng/mL PRL能够显著或极显著提高BMECs上清液中的LF含量（P<0.05或P<0.01）;Pimozide组能够极...     

DNA甲基化参与LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞TNF-α表达

为明确DNA甲基化是否参与LPS诱导的奶牛乳腺炎,本试验研究了DNA甲基化抑制剂对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症因子表达的影响。首先用浓度为0μg/mL、1μg/mL、10μg/mL和100μg/mL的LPS分别处理奶牛乳腺上皮细胞6 h、12 h、24 h,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测白介素-6(IL-6)、牛防御素(BNBD-5)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达水平,ELISA法测TNF-α的浓度,随后用浓度为1.0μmol/L、2.5 umol/L和5.0 umol/L的DNA甲基化转移酶抑制剂(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-AZA)分别处理奶牛乳腺上皮细胞24 h、48 h、72 h,qRT-PCR检测TNF-α的mRNA表达水平。结果显示LPS处理后,IL-6、BNBD-5、TNF-α的mRNA表达水平和TNF-α的蛋白水平显著上升;5-AZA处理后的TNF-α的表达量相对于LPS处理组显著上升。表明DNA甲基化参与LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞TNF-α的表达上调。     

LEPR及LEP基因表达量对FecB不同基因型小尾寒羊产羔数的影响

旨在探索瘦素受体(Leptin receptor,LEPR)和瘦素(Leptin,LEP)基因与绵羊产羔数之间的关系。选择2~3岁健康母羊21只,对FecB野生纯合型(++)(9只)及突变纯合型(BB)(12只)小尾寒羊同期发情,通过腹腔镜记录排卵数。使用实时荧光定量PCR技术检测LEPR和LEP基因在卵泡期小尾寒羊11种组织(心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、输卵管、子宫体、垂体、下丘脑、卵巢)中的表达以及在卵泡期和黄体期、BB型和++型小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢性腺轴的表达。结果表明,BB型的排卵数(P=0.003 5)和产羔数(P=0.004 0)极显著高于++型。LEPR和LEP在卵泡期各个组织均有表达;其中LEPR基因在卵巢、子宫体、肾上腺组织高表达,LEP基因在下丘脑、垂体、卵巢和肾组织高表达。在卵巢中,卵泡期++型LEPR基因表达量高于黄体期++型,但差异不显著(P0.05);卵泡期BB型LEPR基因表达量极显著高于卵泡期++型(P=0.007)、黄体期BB型(P=0.003)和黄体期++型(P=0.003)。综上表明,卵泡期LEPR基因高表达与小尾寒羊产羔数增加存在一定程度的正相关,这为小尾寒羊产羔性状选育提高提供了新的线索。     

催乳激素对山羊脂肪酸合酶基因转录活性的影响

为探讨催乳激素对体外培养的山羊乳腺上皮细胞脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)基因转录活性的调控作用,试验分别用不同浓度的胰岛素(insulin,INS)、雌激素(estradiol,E_2)、催乳素(prolactin,PRL)及不同激素组合(INS+PRL、E_2+INS+PRL)处理山羊乳腺上皮细胞24h,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测催乳激素对FASN基因mRNA表达水平的影响。细胞转染山羊FASN基因启动子报告基因载体,同样用不同浓度的胰岛素、雌激素、催乳素及激素组合处理24h,利用双荧光素酶报告基因系统检测催乳激素对FASN基因启动子活性的影响。结果发现,用雌激素、催乳素处理山羊乳腺上皮细胞后,FASN基因启动子活性及mRNA水平极显著或显著上调(P0.01;P0.05),雌激素浓度为10、100μmol/L和催乳素浓度为0.1和1μg/mL时效果最为明显,而胰岛素对FASN基因的启动子活性及mRNA水平没有显著影响(P0.05)。用不同激素组合(INS+PRL、E_2+INS+PRL)处理细胞均能显著上调FASN基因启动子活性及mRNA表达水平(P0.05)。结果表明,雌激素和催乳素能够调控FASN基因的转录活性,为进一步研究泌乳过程中FASN基因的分子调控机制提供理论依据。     

瘦素基因的研究进展

瘦素(leptin,LEP)是白色脂肪分泌的一种蛋白质激素,在哺乳动物中,LEP是一种16-ku的肽类激素,在能量平衡的神经内分泌和外周调节中发挥重要作用,是反应体脂含量和调节体重、摄食的重要信号因子。在人类疾病方面,LEP基因的表达对很多疾病的发生起着重要的调控作用,尤其是LEP基因的突变可能导致肥胖、糖尿病和乳腺癌等疾病;在畜牧生产上,LEP基因的表达对牛、羊和猪的采食和生长性状影响显著。为了加深对LEP基因的认识,作者对LEP基因的结构及LEP的分布、结构和功能进行了总结,并对近几年LEP基因在疾病和畜牧生产方面的研究进展进行了综述。     

Leptin对奶牛乳腺上皮细胞主要乳蛋白基因表达的影响

本试验旨在研究不同处理浓度Leptin对奶牛乳腺上皮细胞中主要乳蛋白基因表达的影响。分别在有催乳素(PRL)(1μg/mL,+)和无PRL(0μg/mL,-)条件下进行,均以无Leptin组为对照组,10、100、1 000 ng/mLLeptin组为处理组。采用荧光定量PCR技术测定奶牛乳腺细胞中α-酪蛋白(α-CN)、β-酪蛋白(β-CN)和β-乳球蛋白(β-LGB)的基因表达。结果表明:无PRL条件下,Leptin未促进、甚至抑制奶牛乳腺上皮细胞中α-CN和β-CN基因的表达;有PRL条件下,Leptin极显著促进二者表达(P<0.001),以100 ng/mL处理组效果最显著;无论有、无PRL,Leptin均促进β-LGB基因的表达,但有PRL条件下,1 000 ng/mL处理组显著抑制β-LGB基因表达(P<0.001)。结果显示,有PRL条件下,Leptin促进奶牛乳腺上皮细胞主要乳蛋白基因的表达。     

Differential gene expression of Eph‐ephrin A1 and LEPR‐LEP with high or low number of embryos in pigs during implantation

The objective of this study was to ascertain whether mRNA and protein expressions of implantation‐related genes (erythropoietin‐producing hepatocellular receptor–ligand A1, Eph‐ephrin A1 and leptin receptor–leptin, LEPR‐LEP) differed between pigs with high and low number of embryos, and whether these differences in gene expression might affect embryo implantation. Experimental pig groups (n = 24) for high and low number of embryos were prepared by altering the number of eggs ovulated in pre‐pubertal gilts treated with 1.5 × (High) or 1.0 × (Low) PG600 ([400 IU PMSG + 200 IU hCG]/dose, AKZO‐NOBEL). Gilts expressing oestrus were artificially inseminated twice and maintained in breeding and gestation until the reproductive tract was collected on day 22 of pregnancy. At slaughter, the reproductive tracts from each pregnant gilt from each treatment were immediately processed to collect samples for RNA and protein analysis. Within each gilt, three conceptus points were sampled, one from each horn and then a random conceptus within the tract. At each conceptus point, endometrial attachment site, chorion–allantois and embryo were collected and immediately frozen in liquid nitrogen. Number of corpus luteum (CL) (35.4 vs. 12.6) and total embryo number (18.8 vs. 10.2) were greater in the high‐embryo compared to the low‐embryo group, respectively (p < .05). Real‐time qPCR results showed that Eph‐ephrin A1 mRNA expression was less in the high‐embryo (p < .05) compared to the low‐embryo group. In addition, Western blotting analysis indicated that Eph‐ephrin A1 and LEP protein expression at endometrial attachment site in high‐embryo was less (p < .05) compared to low‐embryo group. It was also noted that mRNA expression of Eph‐ephrin A1 and LEPR‐LEP was greater in pregnant than non‐pregnant gilts (p < .05). Moreover, mRNA expression of Eph‐ephrin A1 (p < .05) and LEPR‐LEP was greatest at endometrial attachment site among all three tissues. There was a positive correlation between expressions of Eph‐ephrin A1, LEPR‐LEP and embryo length with the correlation coefficient 0.31–0.59. For Eph‐ephrin A1, the highest correlation coefficient appeared between Eph A1 expression and normal embryo number, between ephrin A1 expression and embryo length. For LEPR‐LEP, the highest correlation coefficient appeared between LEPR‐LEP expression and ovary weight (0.79 for both, p < .05), followed by embryo length and weight. The results of this study suggest that low expression of Eph‐ephrin A1 and LEPR‐LEP is somehow related to increased embryo number during implantation and that endometrial attachment site might be the main target tissue of these gene products. Yet, the increased expression of Eph‐ephrin A1 and LEPR‐LEP appeared associated with increased embryo growth (length and weight) and ovary weight, Eph‐ephrin A1 and LEPR‐LEP might play roles in the regulation of embryo implantation in pigs.     

猪CRTC3基因表达的品种差异及forskolin对其表达的影响

本试验旨在探究糖脂代谢通路关键基因CRTC3在不同品种猪肌肉和脂肪组织中的表达情况,并通过forskolin处理猪皮下脂肪前体细胞,研究forskolin对脂肪前体细胞分化聚酯和CRTC3基因表达的影响,阐明猪CRTC3基因表达与脂肪沉积的关系。试验选取杜长大猪和莱芜猪各5头,检测肌肉、脂肪组织中CRTC3的mRNA和蛋白表达水平以及脂肪代谢相关基因的mRNA表达水平;选取2头3日龄的杜长大仔猪,分离猪皮下脂肪前体细胞,待完全融合后用MDI诱导培养基诱导4 d,然后用分化培养基继续诱导4 d,完成诱导分化。Forskolin组在诱导分化的第1天即加入forskolin,使其终浓度为10μmol/L,对照组则加入同浓度的二甲基亚砜(DMSO)进行诱导分化。结果表明:在莱芜猪的背最长肌和腰大肌中,CRTC3的蛋白表达水平高于杜长大猪;在莱芜猪的皮下和内脏脂肪组织中,CRTC3及脂肪沉积相关基因过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、围脂滴蛋白(PLIN)和瘦素(LEP)的mRNA表达水平显著或极显著高于杜长大猪(P<0.05或P<0.01),而脂肪棕色化相关基因NF-E2相关因子1(NRF1)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC⁃1α)、PRDM16、解偶联蛋白2(UCP2)、解偶联蛋白3(UCP3)的mRNA表达水平则显著或极显著低于杜长大猪(P<0.05或P<0.01)。进一步的研究发现,猪皮下脂肪前体细胞分化后CRTC3和脂肪沉积相关基因的mRNA表达水平极显著提高(P<0.01),脂肪棕色化相关基因的mRNA表达水平也均极显著升高(P<0.01)。10μmol/L forsko⁃lin处理能抑制猪皮下脂肪前体细胞分化,极显著升高环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)和脂肪棕色化相关基因的mRNA表达水平(P<0.01),促进CRTC3的进核,极显著降低CRTC3和脂肪沉积相关基因的mRNA表达水平(P<0.01)。上述研究结果表明,CRTC3基因与猪脂肪沉积密切相关,forskolin处理可以调控猪CRTC3及脂质代谢相关基因表达,调控猪皮下脂肪前体细胞分化聚酯。     

精氨酸水平对奶牛乳腺上皮细胞体外生长及κ－酪蛋白基因表达的影响

本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的精氨酸（Ａｒｇ）对乳腺上皮细胞体外增殖及κ－酪蛋白（ＣＳＮ３）基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养，以无Ａｒｇ的培养基（０．００ｍｇ／Ｌ）为对照（０组），试验培养基分别添加 ６９．５０（０．２５组）、１３９．００（０．５０组）、２７８．００（１．００组）、５５６．００（２．００组）、１１１２．００（４．００组）和 ２２２４．００ｍｇ／Ｌ（８．００组）的精氨酸。结果表明：Ａｒｇ能促进乳腺上皮细胞的增殖，２４ｈ时，０．２５～４．００组与 ０组相比均差异显著（Ｐ＜０．０５），８．００组与 ０组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５）；４８和 ７２ｈ时，各试验组与 ０组相比均差异显著（Ｐ＜０．０５）。Ａｒｇ能促进 ＣＳＮ３基因的表达，各试验组与 ０组相比均差异显著（Ｐ＜０．０５），当 Ａｒｇ浓度为 ５５６．００ｍｇ／Ｌ时，ＣＳＮ３基因表达量最高。结果提示，Ａｒｇ对乳腺上皮细胞增殖及 ＣＳＮ３基因表达均具有明显的促进作用，且在 Ａｒｇ浓度为 ６９．５０～１１１２．００ｍｇ／Ｌ时促细胞增殖效果较佳，在 Ａｒｇ浓度为 ５５６．００ｍｇ／Ｌ时促 ＣＳＮ３基因表达作用最强。     

苜蓿素对脂多糖诱导下奶牛乳腺上皮细胞炎症和乳蛋白合成相关基因表达的影响

为分析苜蓿素对脂多糖诱导下体外培养奶牛乳腺上皮细胞抗炎和乳蛋白合成相关基因表达的影响,本研究将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成4组,即基础培养基(对照)和基础培养基中分别加入1μg·m L-1LPS(L)、1μg·m L-1LPS+10μg·m L-1苜蓿素(L+T)和10μg·m L-1苜蓿素(T)。结果显示,1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞的活性显著下降(P0.05),而T组则显著升高(P0.01)。2)L+T组细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于L组(P0.01),而一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量则显著低于L组(P0.01)。3)LPS能够显著升高细胞的白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Toll样受体2(TLR2)、TLR4和髓样分化因子88(My D88)表达水平(P0.01),而添加苜蓿素能够显著降低IL-1β、TNF-α、TLR2和TLR4的表达水平(P0.01)。4)与对照组相比,T组细胞的酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子5(STAT5)、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、真核细胞始动因子4E结合蛋白1(4EBP1)和核糖体S6蛋白激酶1(S6K1)表达量显著升高(P0.01),而碱性氨基酸转运载体1(CAT1)表达量显著降低(P0.01)。LPS能够显著降低细胞的CAT1、L型氨基酸转运载体1(LAT1)、STAT5、m TOR和4EBP1表达水平(P0.01或P0.05),而添加苜蓿素能够显著升高STAT5表达水平(P0.01)。结果表明,乳腺细胞在LPS刺激下,导致细胞内炎症因子基因表达升高和抑制乳蛋白合成相关基因的表达,而添加苜蓿素能够抑制乳腺细胞内炎症因子基因表达,但对乳蛋白合成的相关基因表达作用不明显;无LPS刺激下,添加苜蓿素能够提高乳腺细胞活性和促进乳蛋白合成相关基因的表达。     

Effects of leptin and leptin peptide amide on the release of luteinizing hormone, growth hormone and prolactin from cultured porcine anterior pituitary cells

The present study was carried out to determine whether leptin or leptin (116–130) peptide amide (lep (116–130)), an active fragment of the native protein in rats, is able to stimulate the release of luteinizing hormone (LH), growth hormone (GH) or prolactin (PRL) from cultured porcine anterior pituitary (AP) cells in vitro. The AP cells were obtained from 6 month‐old pigs and were incubated for 3 h with 10^?11?10^?7 mol/L leptin or lep (116–130) after being cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium for 3–4 days. Leptin significantly increased the concentration of LH and GH in the culture medium at concentrations of 10^?8 and 10^?7 mol/L, respectively, compared with the controls (P < 0.05). Leptin did not increase the concentration of PRL in the culture medium. In contrast to these results, no effects of lep (116–130) on the release of LH, GH or PRL were seen in the cultured cells. These results suggest that leptin stimulates the release of LH and GH by acting directly on porcine AP cells, and that a fragment of leptin protein comprising amino acids 116–130 is not associated with the secretion of hormones in pigs.     

脂肪酸对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂合成相关基因表达量的影响

本试验旨在探寻促进奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳蛋白和乳脂合成的短链脂肪酸(乙酸、β-羟丁酸)和长链脂肪酸(油酸、亚油酸、亚麻酸)的组合添加模式,为调控乳成分合成提供理论依据。BMECs经分离、纯化后,选取第2代细胞,分为5组,对照组不添加脂肪酸,Ⅰ组和Ⅱ组添加的乙酸、β-羟丁酸浓度比例均为2.0(9.60 mmol/L)∶1.0(4.80 mmol/L),油酸、亚油酸、亚麻酸的浓度比例分别为2.0(17.30μmol/L)∶13.3(115.05μmol/L)∶1.0(8.65μmol/L)和9.6(75.20μmol/L)∶7.4(58.00μmol/L)∶1.0(7.80μmol/L);Ⅲ组和Ⅳ组添加的乙酸、β-羟丁酸的浓度比例均为1.0(7.20 mmol/L)∶1.0(7.20 mmol/L),油酸、亚油酸、亚麻酸的浓度比例分别为2.0∶13.3∶1.0和9.6∶7.4∶1.0,各组添加的短链脂肪酸(SCFA)和长链脂肪酸(LCFA)总浓度为14.541 mmol/L,每组3个重复。培养24 h后,检测细胞相对增殖率(RGR)、甘油三酯(TAG)的合成量以及乳蛋白和乳脂合成相关基因的表达量。结果表明:1)试验组BMECs RGR及TAG的合成量均显著高于对照组(P0.05);Ⅰ组RGR最高,TAG合成量最多。2)与对照组相比,Ⅱ组显著提高了核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)、κ-酪蛋白(CSN3)基因的表达量(P0.05);Ⅳ组显著提高了CSN3、蛋白激酶B(AKT)、S6K1、真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)基因的表达量(P0.05);试验组信号转导和转录激活因子5(STAT5)基因的表达量显著降低(P0.05)。3)与对照组相比,试验组二酰甘油酰基转移酶2(DG AT2)基因的表达量显著提高(P0.05),脂肪酸合成酶(FASN)基因的表达量显著降低(P0.05)。综上所述,在培养液中添加7.20 mmol/L乙酸、7.20 mmol/Lβ-羟丁酸、75.20μmol/L油酸、58.00μmol/L亚油酸、7.80μmol/L亚麻酸对BM ECs乳蛋白和乳脂合成相关基因的表达量有较好的促进作用。     

In ovo leptin administration accelerates post‐hatch muscle growth and changes myofibre characteristics,gene expression and enzymes activity in broiler chickens

To evaluate the effect of maternal leptin on muscle growth, we injected 0 μg (control, CON), 0.5 μg (low leptin dose, LL) or 5.0 μg (high leptin dose, HL) of recombinant murine leptin dissolved in 100 μl of PBS into the albumen of broiler eggs prior to incubation. The newly hatched chicks were all raised under the same conditions until 21 days of age (D21), when body weight was measured and samples of gastrocnemius muscle were collected and weighed. Myosin ATPase staining was applied to identify myofibre types and measure the cross‐sectional area (CSA) of myofibres. Real‐time PCR was performed to quantify leptin receptor (LEPR), insulin‐like growth factor 1 (IGF‐1), IGF‐1 receptor (IGF‐1R), growth hormone receptor (GHR) and myostatin (MSTN) mRNA expression in the gastrocnemius muscle. The activity of calpains (CAPNs) in the gastrocnemius muscle was measured using a quantitative fluorescence detection kit. Male chickens treated with both high and low doses of leptin had significantly higher (p < 0.05) body weight on D21. The high leptin significantly increased the CSA (p < 0.05) of gastrocnemius muscle in male chickens, which coincided with a 93% increase (p < 0.05) in IGF‐1 mRNA expression. Likewise, the LL dose increased the weight of gastrocnemius muscle in male chickens (p < 0.05), which was accompanied by a 41% down‐regulation (p < 0.05) of MSTN mRNA expression and a decreased activity of CAPNs. However, all these changes were not observed in female chickens. The proportion of myofibre types did not altered. No significant change was detected for LEPR and GHR mRNA expression. These results indicate that in ovo leptin treatment affects skeletal muscle growth in chickens in a dose‐dependent and sex‐specific manner. The altered expression of IGF‐1, MSTN mRNA and activity of CAPNs in skeletal muscle may be responsible for such effects.     

山豆根多糖对猪圆环病毒Ⅱ型感染猪肺泡巨噬细胞炎性因子水平的影响

试验旨在研究山豆根多糖（SSP）对猪肺泡巨噬细胞3D4/2感染猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine circovirus virus Ⅱ type,PCV2）后炎性因子水平的影响。本试验设空白对照组、PCV2感染组、脂多糖（LPS）对照组和3种浓度（100、200和400 μg/mL）的山豆根多糖组,采用PCV2体外感染猪肺泡巨噬细胞,在培养液中分别加入100、200和400 μg/mL山豆根多糖培养24 h后收集样品,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-8（IL-8）水平和胞内环氧合酶-1（COX-1）、环氧合酶-2（COX-2）的酶活性,实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、COX-2基因及其蛋白表达。结果显示,PCV2感染猪肺泡巨噬细胞后极显著提高了MCP-1、IL-8分泌水平和细胞内COX-1、COX-2酶活性（P<0.01）,iNOS、COX-2 mRNA和蛋白表达水平均极显著提升（P<0.01）;100、200、400 μg/mL山豆根多糖处理后,3D4/2细胞MCP-1、IL-8分泌水平和细胞内COX-1、COX-2酶活性均显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,其中400 μg/mL山豆根多糖处理后效果最显著,细胞内iNOS、COX-2基因mRNA表达水平同样显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）;100、200、400 μg/mL山豆根多糖处理后,显著或极显著抑制了由PCV2诱导的iNOS蛋白表达量的增加（P<0.05;P<0.01）,经200、400 μg/mL山豆根多糖处理后显著抑制COX-2蛋白表达量的增加,400 μg/mL山豆根多糖处理效果最佳。综上所述,山豆根多糖可在一定程度上抑制PCV2感染所引起的促炎症因子mRNA表达的升高及其蛋白的表达,起到一定的缓解炎症的作用。