基因枪轰击法在植物遗传转化研究中的应用(综述)

介绍了目前所用的几种基因枪作用的原理、使用特点及在植物遗传转化研究中应用的现状。分析了影响基因枪转化效率的一些因素。     

基于壳聚糖纳米颗粒的基因枪法转化洋葱细胞研究

以交联法制备壳聚糖纳米颗粒,用透射电子显微镜和Zeta电位仪对壳聚糖纳米颗粒进行表征,发现颗粒呈球形,粒径约为50rim,微球表面光滑、球形团整、颗粒比较均匀、分散性好,电位约为11．1mv;琼脂糖凝胶电泳结果显示,壳聚糖纳米颗粒能有效地结合质粒DNA,并能保护所结合的DNA防止DNaseⅠ的酶切;将含GFP基因的壳聚糖纳米颗粒复合物使用基因枪转化洋葱表皮细胞,在倒置荧光显微镜下观察,发现细胞表达了绿色荧光蛋白,表达效率为8％．     

PLGA纳米微球的制备条件优化

聚乳酸羟基乙酸共聚物（PLGA）是近年来较为热门的高分子材料，因其具有较强的成膜成囊性能及良好的生物相容性，在药物载体领域受到人们的广泛研究。为了获得理想的微球载体，对PLGA纳米微球制备的条件进行了优化。微球制备采用双溶剂乳化法，通过改变纳米微球制备过程中使用的乳化剂浓度、超声功率和超声时间等变量，对制备的纳米微球的平均粒径、多分散性指数（PDI）和zeta电位进行表征，从而确定了纳米微球制备的优化条件。结果表明，使用2%的乳化剂浓度，以60 W的超声功率进行4 min的超声，可以获得大小均一且形态良好的纳米微球，为纳米微球作为药物载体治疗各疾病的后续应用提供了重要的参考价值。     

农杆菌及基因枪在禾谷类作物遗传转化中的应用

目前，外源基因导入植物细胞的方法有多种，常用的有农杆菌法和基因枪法。本文对农杆菌转化禾谷类作物的基本原理及最新动态作了简明扼要的概述，同时对基因枪类型、原理及使用方面也作了简要的介绍。     

棉花茎尖分生组织在微粒轰击法基因转化中的应用

利用棉花芭发生组织易于再生成完整植株的特点,结合使用基因枪轰击法将ＣＰＴＩ基因导入棉花尖分生组织。筛选的起始时间,培养基的转换时间及卡那霉素的浓度梯度等地筛选效果有明显影响。     

基因枪技术在遗传转化上的研究进展

用于植物、动物和微生物遗传转化的技术已有许多,如农杆菌法、PEG 法、显微注射法、电击法等。基因枪技术是近5年刚发展起来的转化手段。本文简明描述了基因枪技术的特点,着重阐述了基因枪技术在遗传转化上的重要进展,并指出了该技术有待解决的问题和应用前景。     

基因枪技术与水稻遗传转化

基因枪技术与水稻遗传转化浙江农业大学农学系赵彬薛庆中１９９１年，Ｐ．Ｃｈｒｉｓｔｏｕ等首次应用基因枪技术获得了转基因水稻植株。基因枪转化技术不受植物种类的限制，不需要以原生质体作为转化的受体，可以将外源基因直接导入细胞、组织或器官，因而克服了根瘤农杆...     

影响大豆基因枪转化的几个参数

利用基因枪转化大豆愈伤组织,研究了基因枪不同参数对转化效率的影响。试验表明,ＣａＣｌ２浓度、拟气压力、受体状态对转化频率有重要影响。在基因枪轰击前２４ｈ,用５Ｇｙ辐照处理愈伤组织转化效率提高明显。获得了大量经ＧＵＳ染色为蓝色的抗生愈伤组织。     

转基因玉米减少无性变异、提高成活率的研究

通过基因枪转化法将外源抗虫基因导入 1个玉米 (ZeamaysL .)优良自交系。对受体愈伤的制备 ,抗性愈伤的筛选分化和转基因植株的移栽等方面的研究 ,采用一系列的措施 ,有效地降低了转化植株的畸形率 ,提高了转化植株的成活率     

水稻基因枪转化过程中抗性愈伤的生长规律

从籼稻基因枪转化过程中选择压的确定、愈伤组织的生长规律以及不同分化培养基对抗性愈伤出苗率的影响上 ,探讨了可能提高籼稻基因枪转化频率的参数     

普通小麦基因枪转化高效受体系统的建立

以小麦幼胚愈伤组织为转化受体,以植物表达载体质粒pROK2为外源DNA,以蔗糖和甘露醇为渗透剂,研究了愈伤组织生长状态、渗透剂种类及其处理时间和浓度对基因枪转化效率的影响。结果表明,在采用基因枪轰击法对小麦幼胚愈伤组织进行转化的体系中,受体愈伤的最佳发育阶段为胚性启动前期;高渗处理可以使基因枪转化频率得到明显提高,但处理时间过长对愈伤组织的增殖和分化又有明显的抑制作用,用蔗糖进行高渗处理对愈伤组织生长及再生的抑制作用较用甘露醇弱;用0.6 mol/L蔗糖和0.5 mol/L甘露醇分别在轰击前6 h和轰击后18 h进行高渗处理转化效果均最佳。文章建立了高效蔗糖高渗基因枪转化受体系统。     

微弹轰击小麦幼胚愈伤组织的影响因素研究

【目的】优化小麦基因枪转化技术体系,为提高小麦基因枪转化效率提供参考。【方法】以小偃22为材料,采用基因枪法分析小麦幼胚愈伤组织诱导时间、微弹轰击金粉用量及筛选分化培养基类型对基因枪遗传转化频率的影响,并对转化植株进行了检测。【结果】在相同条件下,小麦幼胚经过9d的愈伤组织诱导时再生植株率最高,达到4.24%;同一条件下,金粉用量为60μg/枪的再生植株率最高,达到3.90%;使用1/2MS培养基添加NAA1.0mg/L和KT 1.0mg/L进行转化细胞筛选与分化的效果最好,再生植株率为3.72%;对转化抗性再生植株的特异PCR检测表明,目的基因已整合到小麦染色体组中。【结论】小麦幼胚通过9d的愈伤组织诱导,基因枪轰击金粉用量为60μg/枪,使用筛选分化培养基1/2MS+KT 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L+双丙氨膦2.0mg/L+蔗糖30g/L+Ag 5.0g/L进行转化细胞的筛选与分化,可获得较高的抗性再生植株率。     

玻璃刀制备木材超薄切片的研究

在透射电子显微镜下，观察超微结构及分析微区成分，遇到的难题是超薄切片制备。本产轩介绍了玻璃刀制备木材超薄切片技术。采用沸水软化。延长脱水时间、强化包埋剂渗透、精心修块、慎重切片等一系列措施，使用玻璃刀地切出了针、阔叶树木材的超薄切片。质量达到实验要求。     

利用PIG基因枪进行水稻基因转化的研究

我们利用自行安装的ＰＩＧ基因枪瞬时转化水稻悬浮细胞，对其操作参数及转化条件的优化进行了研究。ＰＩＧ基因枪结构简单，操作方便，价格及维持费很低。研究结果表明，在设计参数为轰击持续时间５０ｍｓ及样品室真空度为２９～３０ｉｎ．Ｈｇ时，其它操作参数的优化值为氦气压力６０ＰＳｌ，轰击高度为１７ｃｍ，缓冲网板高度为ｇｃｍ。水稻悬浮细胞在轰击前后分别进行高渗处理（含有０．５Ｍ甘露醇的ＬＳ０．５培养基）４ｈ和１０～１６ｈ可提高转化率４倍以上，在ＤＮＡ吸附过程中，用乙醇进行后处理比用水处理可提高转化率３．８倍。另外，用金粉为ＤＮＡ载体比钨粉效果好，转化量可提高一倍以上。这些结果证实ＰＩＧ基因枪的可靠性及稳定性。这对促进ＰＩＧ基因枪在植物基因工程中的应用有着重要意义。     

黑骨藤追风活络微丸处方及制备工艺的研究

本研究旨在获得黑骨藤追风活络微丸的最优处方及制备工艺。以吸湿率、成型率和微丸圆整度为指标,采用软件Design Expert 8.06中的混料设计实验对微丸处方进行优化,确定最优处方:复方黑骨藤药粉40%、微晶纤维素45%、乳糖15%。采用挤出滚圆法制备黑骨藤追风活络微丸,通过正交实验确定最优条件为:挤出频率为35 Hz,滚圆频率为45 Hz,滚圆时间为10 min。采用最优处方及最佳工艺制备了3批黑骨藤追风活络微丸,得到的微丸外观圆整、光滑,粒度均匀且收率高,能完全满足后续生产工艺过程中对微丸流动性、硬度、崩解时限等的要求。     

酶预处理结合研磨法对桉树纸浆纤维微/纳纤丝微观形貌的影响

【目的】探究酶用量、酶解时间及研磨时间对制备的桉树纸浆纤维微/纳纤丝微观形貌及性能的影响。【方法】以桉树纸浆为原料,经不同的酶用量(20,40,60和80ECU/g)和酶解时间(2,4,6和8h)预处理后,用研磨法制备纤维素微/纳纤丝,利用扫描电镜、X射线衍射仪对制备的微/纳纤丝进行表征。【结果】在酶解时间为6h的条件下,当酶用量由20ECU/g增加至80ECU/g时,研磨制备的微/纳纤丝直径由143.89nm减小至52.21nm;在酶用量为60ECU/g的条件下,当酶解时间由2h增加至8h时,研磨制备的微/纳纤丝直径由131.23nm减小至43.73nm。酶处理后的纤维及研磨处理后的纤维均保持了天然纤维的Ⅰ型结构,结晶度分别比纸浆纤维(59.21%)提高11.68%和8.31%,所制备的微/纳纤丝的结晶度为67.52%。【结论】酶预处理可以有效降低微/纳纤丝的制备时间,减少能耗;随着酶用量及酶解时间的增加,微/纳纤丝直径逐渐减小;纤维素酶可降解纤维素部分非结晶区并使纤维润胀。     

玉米转基因方法研究进展

玉米转基因方法有多种,最主要的是基因枪转化法和农杆菌介导转化法。本文综述了玉米转基因方法的研究进展,对影响转化频率的因素进行了总结,并分析了标记基因的使用现状。     

一种微生物制剂在控制和消除奶牛乳腺炎中的应用研究

将蛭弧菌BDS01、BDS02游泳体以1∶1的比例制备成控制和消除奶牛乳腺炎的微生物制剂,并将其作用于奶牛乳腺及喷洒于奶牛的养殖环境中.结果表明,使用微生物制剂后4～6 h即出现良好的除菌效果,并可以长时间(24 h以上)有效地对致病菌的数量进行控制.该种微生物制剂对奶牛乳腺炎致病菌的消除率高达72％～77％.     

基因枪介导小麦基因转化体系的建立

以豫麦18幼胚为受体，建立高效基因枪介导转化体系，经除草剂抗性和对目的基因的PCR、PCR—Southern检测，获得了20株转基因植株，转化率高达3．7％，为基因枪高效介导提供了成功的证据。     

兽用微生态制剂的应用及使用注意事项

微生态制剂又称为微生态调节剂,是根据微生态原理制备的制剂。利用于调整或维持动物肠道内微生态平衡,起到调整微生态失调,保持生态平衡,提高动物体的健康免疫水平,以达到防病、治病效果。本文作者归纳了微生态制剂的主要功效,总结提出使用兽用微生态制剂的注意事项,目的是更好的发挥兽用微生态制剂无残留的作用,更好地为畜牧业服务。