蜜蜂KBV和APV病毒RT-PCR检测技术研究

根据蜜蜂克什米尔病毒(Kashmir bee virus．KBV)和急性麻痹病毒(Acute paralysis virus，APV)的RNA聚合酶基因序列，参照Don Stoltz报道的引物KBV1、KBV2，美国农业部提供的引物DC62F、DC682R，对美国农业部惠赠的标准KBV和APV的RNA聚合酶基因片段，以及2001—2002年收集到的中国21个省市的180份疑似KBV和APV病蜂RNA聚合酶基因片段进行RT—PCR。对以KBV1、KBV2和DC62F、DC682R为引物扩增出的RNA聚合酶基因片段进行克隆、转化，并对克隆结果测序，证明其可靠性。建立了用分子生物学方法检测蜜蜂KBV和APV病毒的技术，有一定的应用前景。检测结果表明：到目前为止，我国蜜蜂群中未发现KBV和APV病毒病。     

Symptomatic Black Queen Cell Virus infection of drone brood in Hessian apiaries

The Black Queen Cell Virus (BQCV) can affect brood of the honey bee (Apis mellifera). In general queen cells are endangered showing dark coloured cell walls as typical symptoms. Worker- and dronebrood can be infected by BQCV but normally without clinical symptoms. This paper describes for the first time a symptomatic BQCV-infection of diseased drone brood found on two bee yards in Hessen/Germany in 2001. The drone larvae were seriously damaged and some of them were dead. Samples of the affected brood were tested for BQCV by the PCR detection method. A BQCV specific nucleic acid fragment was found. The PCR product were sequenced and aligned with the relevant GenBank entry. At the nucleic acid level as well as at the deduced protein level the isolate showed a high similarity with the south african isolate noted in GenBank.     

四川省东方蜜蜂病毒病感染状况调查

为了解四川省东方蜜蜂主要病毒病:蜜蜂黑王台病毒(BQCV)、畸翅病毒(DWV)、囊状幼虫病毒(SBV)、克什米尔蜜蜂病毒(KBV)、急性蜜蜂麻痹病毒(ABPV)和慢性蜜蜂麻痹病毒(CBPV)的感染状况。采用RT-PCR方法对来自四川省9个地区共270份东方蜜蜂样品进行快速病原学检测。调查结果显示:四川省东方蜜蜂群中有5种病毒的感染;其中,BQCV总阳性率为17.8%,KBV总阳性率为3.0%,SBV总阳性率为1.1%,ABPV总阳性率为1.9%,CBPV总阳性率为2.2%。在被调查的9个地区中,有7个地区蜂群存在至少1种以上病毒病感染的现状,表明四川省东方蜜蜂群疾病感染状况较为严重,其对养蜂业可持续发展的潜在危险需要给予充分关注。     

在工蜂产卵超过23天的中蜂群中介绍蜂王

在中蜂的饲养管理中,蜂群失王且工蜂产卵后,一般处理方法都是并入它群;实验是在不得已的情况下,将3群失王且工蜂产卵超过23 d的中蜂群合并的同时,介绍蜂王获得成功.     

蜜蜂秋季管理要点

科学合理的蜜蜂秋季管理,不仅可以使蜜蜂安全越冬,还能促使蜜蜂来年早春的春繁顺利进行。为了向广大蜂业工作者提供一个全面的蜜蜂秋季管理参考资料,从蜂箱、蜂群、饲喂及病害防治4个方面入手,对蜜蜂的秋季管理要点进行整合。     

中蜂工蜂巢房大小对其体重影响

为了探究蜜蜂在相同遗传背景下,不同大小的巢房对蜜蜂体重的影响。本试验在中蜂蜂群内加入西方蜜蜂巢础,让蜂群自行建造,当改造好的蜂脾有大量封盖子脾时,放置于人工气候箱内孵化,出房后开始大量标记蜜蜂,按照相应的日龄采集蜜蜂称重,每群15只。结果表明:与自然建造中蜂蜂群相比,中蜂使用意蜂巢础后,不同日龄工蜂体重差异显著增加。这为进一步研究不同巢房大小对蜜蜂形态特征影响及产蜜量的影响提供理论基础。     

南宁市双色中华蜜蜂探析

近几年来,南宁的许多中华蜜蜂(以下简称中蜂)养殖场经常出现麻色蜜蜂和黄色蜜蜂混同一起的种群(简称双色群),引起中蜂养殖者的高度关注。笔者在南宁市吴圩镇(广西国有七坡林场)定地养殖中蜂十余年,每年都有少量双色蜂种群出现,为此对双色中华蜜蜂进行了详细观察、记录、验证,认为双色蜂不是一个独立品种,是外来黄色蜂种与本地麻色蜂种杂交的结果。     

云南云贵高原中蜂与滇南中蜂形态学初探

为了研究云贵高原中蜂与滇南中蜂在形态学上的差异,对云南省各地的中蜂样本进行了形态测定分析。38个形态特征的测定结果表明滇南中蜂比云贵高原中蜂颜色较浅,体型相对较小;聚类分析得出：北回归线以南地区主要是滇南中蜂的分布区,北回归线以北地区主要是云贵高原中蜂的分布区。由此可知,北回归线对滇南中蜂和云贵高原中蜂划分具有重要的地理分隔意义,为深入系统的研究两个地方品种提供了重要的参考价值。     

The growing prevalence of Nosema ceranae in honey bees in Spain, an emerging problem for the last decade

Microsporidiosis caused by infection with Nosema apis or Nosema ceranae has become one of the most widespread diseases of honey bees and can cause important economic losses for beekeepers. Honey can be contaminated by spores of both species and it has been reported as a suitable matrix to study the field prevalence of other honey bee sporulated pathogens. Historical honey sample collections from the CAR laboratory (Centro Apícola Regional) were analyzed by PCR to identify the earliest instance of emergence, and to determine whether the presence of Nosema spp. in honey was linked to the spread of these microsporidia in honey bee apiaries. A total of 240 frozen honey samples were analyzed by PCR and the results compared with rates of Nosema spp. infection in worker bee samples from different years and geographical areas. The presence of Nosema spp. in hive-stored honey from naturally infected honey bee colonies (from an experimental apiary) was also monitored, and although collected honey bees resulted in a more suitable sample to study the presence of microsporidian parasites in the colonies, a high probability of finding Nosema spp. in their hive-stored honey was observed. The first honey sample in which N. ceranae was detected dates back to the year 2000. In subsequent years, the number of samples containing N. ceranae tended to increase, as did the detection of Nosema spp. in adult worker bees. The presence of N. ceranae as early as 2000, long before generalized bee depopulation and colony losses in 2004 may be consistent with a long incubation period for nosemosis type C or related with other unknown factors. The current prevalence of nosemosis, primarily due to N. ceranae, has reached epidemic levels in Spain as confirmed by the analysis of worker honey bees and commercial honey.     

贵州中蜂蜂房哈夫尼菌的分离鉴定及药敏试验

为准确诊断贵州某蜂场发生的细菌性中蜂疾病,并提供防制方案,本试验进行了细菌分离纯化、形态学观察、生化试验,应用细菌16S rRNA基因通用引物进行基因扩增测序,测序结果在NCBI上进行比对分析,选取同源性较高的5个属的30株细菌的16S rRNA序列进行同源性分析并构建系统进化树,并对该分离菌进行动物回归试验和药敏试验。结果显示,分离菌为革兰氏阴性短杆菌,生化试验初步鉴定为蜂房哈夫尼菌;16S rRNA序列与哈夫尼杆菌属同源性最高,在97.0%~99.6%之间;遗传进化树表明,分离菌在哈夫尼菌菌属这一分支;动物回归试验显示,分离菌对中蜂有一定致病性,表明该蜂场受到蜂房哈夫尼菌感染,造成了蜜蜂的副伤寒;药敏试验结果表明,分离菌对青霉素、红霉素、克林霉素等耐药,对阿米卡星、复方新诺明、氧氟沙星等敏感。本试验结果为中蜂感染蜂房哈夫尼菌病的研究提供了一定参考,并能对蜂场提供合理用药意见。     

Occurrence of acute paralysis virus of the honey bee (Apis mellifera) in a Hungarian apiary infested with the parasitic mite Varroa jacobsoni.

Viruses of the honey bee have been known for a long time; however, recently the attention of scientists and apiculturalists has turned towards the relationship between these viruses and the parasitic mite Varroa jacobsoni. Although clinical symptoms indicated the presence of some of the viruses of bees in Hungary, none have previously been isolated or identified. During July unusual adult bee and brood mortality was observed in some colonies of an apiary in Budapest known to be infested with Varroa jacobsoni. Large amounts of acute paralysis virus (APV) were detected serologically in healthy honey bee pupae killed by the injection of a bacteria-free extract of diseased adult bees. Crystalline arrays of 30 nm particles were seen in ultrathin sections of the tissues of injected pupae and naturally infected adult bees. In spite of the application of acaricide treatments the bee population in several colonies had collapsed by the end of summer and the apiary suffered severe wintering losses.     

山东省果树蜜蜂授粉管理与效益分析

蜜蜂授粉期间蜂群管理的好坏直接影响到授粉的效果,也影响到蜂群的群势与蜂产品的产量。利用蜜蜂为苹果授粉可比自然授粉提高坐果率14%,幼果平均重增加118.9%,产量增产36.26%,经蜜蜂授粉的苹果果实果形及着色均优于自然授粉和棚内自然授粉;大棚樱桃通过蜜蜂授粉产量可达1000¹500 kg/亩,收入在6500元左右,是蜂农授粉收入近百倍,是自然状态下收入的十几倍。     

野生无刺蜂诱桶引诱分群方法及应用

无刺蜂(Stingless bees)是分布在热带、亚热带地区的一类重要授粉昆虫。野生无刺蜂蜂群通常在树洞、墙洞、崖壁石缝等区域内筑巢,获取野生蜂群通常会破坏其筑巢环境、甚至会破坏蜂群。在我国,无刺蜂仅分布在云南、海南等少数热带及亚热带区域。为了维持野生无刺蜂的种群数量,保证无刺蜂产业的健康、可持续发展,介绍了主动诱导法和被动诱导法2种野生无刺蜂群诱桶使用方法,并讨论了诱桶方法使用中的注意事项和优劣。以期推广该方法来保护野生无刺蜂蜂群、栖息地及环境。     

苜蓿切叶蜂一年异地两次为苜蓿授粉的研究

苜蓿切叶蜂是为苜蓿授粉最有效的昆虫。利用我国幅员辽阔，南北气候差异大、苜蓿开花期不同的特点，每年5月中下旬至6月下旬在北京苜蓿开花期间放第一次蜂，回收后立即运往吉林白城地区于6月下旬至7月初放第二次蜂，为当地苜蓿授粉，8月中下旬收回。经过三年共六次的释放试验表明，这种一年异地两次放蜂的方法是可行的，取得了蜂产量增长2～3倍，苜蓿种子增产2～4倍的良好结果。评价了蜂茧的产量、质量及苜蓿种子增产的效益。还对该蜂的羽化、筑巢的动态以及一些生态要求等进行观察与分析。为在我国开发和利用苜蓿切叶蜂提供了理论依据。     

以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术筛选意大利蜜蜂重要农艺性状遗传标记

为了获得意大利蜜蜂重要农艺性状的分子遗传标记 ,本研究以 30种RAPD随机引物对平湖浆蜂、美意、澳意、苏意等 4个在产浆、采蜜和抗病性上存在较大差异的意蜂品系的基因组DNA进行RAPD_PCR扩增筛选。试验结果显示 ,随机引物W 1 8(5′_CGGACGGCGG_3′)和W2 3(5′_GTACCGCCCG_3′)的扩增图谱呈多态性。其中 ,在引物W 1 8所扩增出的 9条片断中 ,2 35 2bp和 36 4bp条带为美意所特有 ,表明可将之用于鉴别美意 ;2 0 92bp条带仅出现于蜂蜜高产的美意和澳意中 ,意味着该条带为一个蜂蜜高产性状的遗传标记 ;而 6 32bp条带在王浆高产品系平湖浆蜂中出现的频率 (0 91 )显著高于 (P <0 0 1 )美意(0 0 4 )、澳意 (0 0 2 )和苏意 (0 0 0 ) ,说明 6 32bp条带可能为王浆高产性状的一个遗传标记。在W2 3引物扩增条带中 ,6 5 1bp条带为澳意所特有 ,可用于澳意鉴别     

优良浆意蜂DNA分子特异标记(W316bp)的鉴定研究

第一部分分离提取三品系意蜂 (浙农大、萧山、平湖 )的DNA ,使用紫外分光光度计 ,波长 2 6 0nm鉴定DNA纯度 ;第二部分以W (5′ -CGGCCCCGGT - 3′)为随机引物进行PCR ,扩增 ,电泳 ,获得DNA多态性图谱 ;第三部分比较三品系意蜂工蜂与雄蜂的DNA多态性图谱。结果凡是三品系意蜂的工蜂均出现一高产浆特异标记W316pb条带 ,但三品系意蜂的雄蜂均无W316bp条带。则进一步鉴定了W316bp是高产浆意工蜂DNA分子的特异标记     

水貂肠炎细小病毒的分离鉴定及其VP2基因的序列分析

本试验从疑似细小病毒感染的病死水貂中分离到1株病毒。经PCR鉴定、细胞培养、蛋白质电泳鉴定最终确定为水貂肠炎细小病毒(MEV),命名为MEV-WFD。对该分离病毒的衣壳蛋白VP2基因进行克隆测序分析,结果表明此病毒VP2基因3处碱基发生点突变,其中一处的突变导致第328处氨基酸残基由疏水性丙氨酸(Ala)变为亲水性苏氨酸(Thr)。将此株病毒VP2基因与GenBank上公布的所有MEV的VP2基因碱基序列进行同源性比较及进化树分析,结果表明该病毒与ZYL-1、MEV/LN/-10和Manzhouli的VP2基因同源率最高,为99.8%;进化树构建结果表明,该病毒与6株已公布的病毒属于同一进化分支。     

1株林麝源绿脓杆菌的分离鉴定及全基因组序列分析

旨在确定甘肃省天水市某林麝养殖场致死林麝的病原菌,并开展其致病性和耐药性研究及全基因组序列分析。采集病死林麝肺,通过细菌的分离纯化、生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,对分离菌进行鉴定;随后对其致病性和药物敏感性进行分析,并在分离菌全基因组测序的基础上,对分离菌全基因组序列进行组装和注释,对毒力基因toxA和exoT进行遗传进化分析。结果表明,从病死林麝肺中分离到一株绿脓杆菌,命名为TS2019。致病性试验测得分离菌对小鼠的LD₅₀为2.82×10⁷CFU·mL^-1;药敏试验结果表明,TS2019具有多重耐药性,但对环丙沙星、洛美沙星等药物敏感。基因组测序表明,TS2019基因组全长为6 308 327 bp,编码5 929个基因,其中有1 035个编码产物参与新陈代谢途径;全基因组中有毒力因子编码基因875个,产物有黏附蛋白、调控因子、毒性蛋白等;有四环素类、氨基糖苷类等抗生素耐药相关基因5 288个。遗传进化分析表明,TS2019毒力基因toxA、exoT与GenBank中绿脓杆菌众多菌株相应基因序列相似性均高于99%,其中eoxT基因与中国杭州人源分离株P33的遗传关系最近,但处于独立分支。本研究从病死林麝肺分离鉴定到一株绿脓杆菌,并证实该菌有较强致病性和多重耐药性,其毒力基因toxA和exoT与GenBank中绿脓杆菌相应基因序列具有高度相似性。研究结果为林麝绿脓杆菌感染相关疾病的防治提供了理论支持,也为绿脓杆菌致病机制和耐药机制的深入研究奠定了基础。     

长白山区西部中囊病消长规律及时间隔离等防治方法的研究

对近几年传入长白山区西部的中蜂囊状幼虫病消长规律进行了研究,不仅对抗病中蜂和营养杂交中蜂进行了试验观察,而且在试验和调查过程中发现中囊病在长白山区西部传播的链条上有一个可以切断的薄弱环节:在中囊病区内,病蜂病虫断绝,病毒消亡1a左右的地方试养中蜂,不发生中囊病。在此基础上进一步提出了在当地条件下利用时间隔离法防治中囊病。     

维生素A对意大利蜜蜂群势、封盖子量及抗氧化性的影响

本试验旨在研究饲粮中添加维生素A对意大利蜜蜂群势、封盖子量和幼虫虫体抗氧化性的影响.试验选用本地意大利蜜蜂10群,随机分为2组(对照组和试验组),每组设5个重复.对照组蜜蜂饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中添加7 500 IU/kg维生素A的饲粮.结果表明,试验组蜜蜂取食量、封盖子量、成年工蜂蜂体粗蛋白质含量、幼虫虫...