拟除虫菊酯类农药多残留酶免疫分析方法的建立

 以间苯氧基苯甲酸(PBA)为半抗原，与牛血清蛋白偶联后免疫新西兰大白兔，获得对多种菊酯类农药有特异性的广谱性抗体。以6-氨基己酸法合成PBA与OVA之间含有六碳骨架的桥的偶联物作包被原，建立并优化了间接竞争ELISA检测方法，对PBA最低检出限达0.193 ?g·ml-1，抑制中浓度为3.707 ?g·ml-1，且对氯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯均有特异性识别，对氰戊菊酯识别弱，抑制中浓度分别为4.066、4.232、4.286、4.874、8.979、77.360 ?g·ml-1。结果表明，该抗体可用于多种菊酯类农药残留筛选检测。     

拟除虫菊酯类农药残留分析研究进展

本文综合叙述了近几十年国内外有关拟除虫菊酯类农药残留的分析方法,包括样品前处理和检测技术。     

拟除虫菊酯类农药的酶水解研究进展

近年来的研究发现,拟除虫菊酯类农药对人体会产生“三致”作用.而酶催化农药水解作为去除此类农药污染的有效手段,逐渐成为环境科学研究热点.文章结合分析拟除虫菊酯类农药的水解机制,综述近年来国内外拟除虫菊酯类农药的酶水解研究进展,并对其发展趋势作以展望     

拟除虫菊酯类农药残留分析方法研究进展

综述了拟除虫菊酯类农药残留的分析技术及其研究进展。介绍了样品前处理方法如固相萃取、超临界流体萃取、基质固相分散苹取、加速溶剂萃取等在拟除虫菊酯类农药残留分析中的应用;阐述了气相色谱、液相色谱及其联用技术用于样品中拟除虫菊酯农药残留的检测;并展望了该领域的发展趋势。     

免疫分析方法在拟除虫菊酯类农药残留检测中的应用进展

综述拟除虫菊酯类农药免疫分析方法的建立及近年来免疫分析方法在拟除虫菊酯类农药残留检测中的应用,并对今后拟除虫菊酯类农药免疫分析研究的方向进行了展望。     

免疫分析方法在拟除虫菊酯类农药残留检测中的应用进展

综述拟除虫菊酯类农药免疫分析方法的建立及近年来免疫分析方法在拟除虫菊酯类农药残留检测中的应用,并对今后拟除虫菊酯类农药免疫分析研究的方向进行了展望。     

环境激素拟除虫菊酯类农药的内分泌干扰效应

近年来,随着拟除虫菊酯类农药的广泛使用,拟除虫菊酯类农药是否对内分泌功能具有干扰作用,成了环境内分泌学研究领域的热点之一。主要介绍了拟除虫菊酯类农药在内分泌功能扰乱方面的研究进展。     

微生物降解拟除虫菊酯类农药研究进展

随着拟除虫菊酯类农药的大量使用,其残留问题及危害越来越严重,已成为人们亟待解决的问题。综述了拟除虫菊酯类农药生物降解、降解菌、降解机制及其降解途径,并简述了微生物降解的影响因素及展望,旨在对菊酯类杀虫剂残留的生物修复研究和应用提供理论依据。     

拟除虫菊酯类农药的开发

拟除虫菊酯类农药的开发中国农业科学院植保所郑永权邵向东姚建仁拟除虫菊酯类农药是具有划时代意义的农药,人们把农药发展史划分为天然药物时代和有机合成农药时代。后者又可分为有机合成农药前期和当代有机农药时期,两者的分界线是高效的光稳定型农用拟除虫菊酯的成功...     

氰基类拟除虫菊酯类农药检测研究进展

主要综述了近年来国内外关于检测氰基类拟除虫菊酯类农药残留的现状和检测方法的研究进展,并对其优缺点进行了讨论和分析。     

有机磷杀虫剂通用结构半抗原的设计及广谱特异性抗体的制备

 【目的】制备针对有机磷农药的广谱特异性抗体,用于有机磷农药的免疫快速筛选检测。【方法】设计采用二乙基膦酸乙酸作为通用结构半抗原,用NHS-DCC法和EDC法合成两种人工抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清。【结果】NHS-DCC法所制得抗血清的最高滴度为25 600, EDC法合成的抗原制得的抗血清滴度最高为6 400,均获得免疫应答。以二乙基膦酸乙酸为对象建立的间接竞争ELISA检测方法对二乙基膦酸乙酸最低检测浓度0.0035 μg•ml-1,抑制中浓度I50为0.182 μg•ml-1。经对12种常见磷酸酯类有机磷农药特异性检测反应试验,结果发现：所得抗体对毒死蜱、氧乐果、二嗪农、乙基对硫磷、丙溴磷、辛硫磷等农药有特异性反应,I50分别为0.12、0.21、0.24、0.78、0.97、3.8 μg•ml-1。【结论】该检测技术可用于毒死蜱、氧乐果、二嗪农、乙基对硫磷、丙溴磷等药剂的快速定性或半定量检测。     

Development of Anti-Isoproturon Polyclonal Antibody

A competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) suitable for the determination of the urea herbicide isoproturon,3-(4-isopropylphenyl)-1,1-dimethylurea, in food and environmental samples was developed. Two haptens named 1-(3-carboxypropyl)-3-(4-isopropylphenyl)-1-methylurca (hapten 4C) and 1-(5-carboxypentyl)-3-(4-isopropylphenyl)-1-methylurea (hapten 6C) were synthesized. The haptens were coupled to bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin(OVA), respectively, using the N-hydroxysuccinimide reaction. The hapten 6C-BSA conjugate was used as the immunogen,with which a high-titer anti-isoproturon polyclonal antibody (pAb) was successfully obtained by immunization of New Zealand white rabbits. The hapten 4C-OVA conjugate was used as coating antigen and a method of the indirect competitive ELISA for isoproturon was established. The haptens were confirmed with TLC, IR, and 1H NMR. The conjugation molar ratios of hapten 4C to OVA and hapten 6C to BSA were 36:1 and 46:1, respectively, as calculated by a UV spectrophotometry.The highest titer of the anti-isoproturon sera determined by a non-competitive indirect ELISA procedure was 1.6×105. The optimal concentrations of the coating antigen and the dilution of the anti-isoproturon sera used in the ELISA were 0.1 mg L-1 and 1.0 × 105, respectively. The concentration of isoproturon that inhibits 50% of antibody-antigen binding (IC50) was 0.07 mg mL-1.The cross-reactivities of six urea herbicides including chlorbromuron, fluometuron, monolinuron were lower than 0.1%. Isoproturon is a small molecule without immune activity and active functional group for attaching to carrier protein. To produce an antibody against isoproturon with high titer and high specificity is the most important step in the development of an immunochemical method for the determination of isoproturon in food and environmental samples. The two haptens synthesized in this study have carboxyl groups and accommodate different lengths of spacer arms, and the phenyl and isopropyl groups are fully exposed. An anti-isoproturon polyclonal antibody with high titer and high specificity was successfully obtained by immunization of rabbits with the conjugate of the hapten attached to the protein carrier.     

Application of Current Hapten in the Production of Broad Specificity Antibodies Against Organophosphorus Pesticides

Diethylphosphono acetic acid （DPA） was used as a current hapten to generate broad specificity polycolonal antibodies against a group of organophosphorus pesticides. Six New Zealand white rabbits were immunized with immunogens synthesized by the active ester method （AEM） or 1-ethyl-3-（3-dimethylaminopropyl）-carbodimide method （EDC）. The titers of antisera reached 25 600 by AEM and 6 400 by EDC, respectively. Polyclonal antibodies raised against DPA were screened and selected for the competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay （CI-ELISA）. A CI-ELISA for DPA was developed with a detection limit of 3.536 ng mL^-1and an I50 value of 0.182 μg mL^-1. The assay specificity was evaluated by obtaining competitive curves for several structurally related compounds as competitors. The antiserum showed high affinities to chlorpyrifos, diazinon, omethoate, parathion-ethyl and profenofos with I50 of 0.12, 0.15, 0.21, 0.88, 0.97 and 2.5 μg mL^-1, respectively. The results indicate that the assay could be a screening tool for quantitation and semiquantitation determination of the above former five organophosphorus pesticides.     

间接竞争酶联免疫吸附分析法测定土壤和面粉中的异丙隆

采用自制的抗异丙隆多克隆抗体建立了测定异丙隆残留的间接竞争酶联免疫分析方法,优化的包被抗原和抗体的浓度分别为0.1和0.016mg·L^-1。结果表明,6种常用的与异丙隆结构相似的脲类除草剂的交叉反应都小于0.6%,标准曲线的线性范围为3.42～121.33ng·mL^-1,线性相关系数r^2=0.9410,方法的检测限为3.42ng·mL^-1。利用建立的间接竞争ELISA方法检测土壤和面粉样品中的异丙隆,测得土壤中异丙隆的加标回收率为100%～108%,变异系数为3%～6%;面粉中异丙隆的加标回收率为81%～84%,变异系数为5%～7%。     

莫能菌素人工抗原合成及其多克隆抗体的制备

通过莫能菌素羟基与琥珀酸酐反应,合成半抗原莫能菌素-琥珀酰半酯,采用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA偶联制备人工抗原,以此人工抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体.试验结果表明,莫能菌素结合抗原免疫家兔制备的抗体对莫能菌素具有很高的特异性、亲合性和选择性.用此抗体建立的莫能菌素间接竞争酶联免疫吸附检测方法的标准工作曲线I50值为37.9 ng/ml,最低检测限(I10)为2.09 ng/ml.     

氯霉素人工多克隆抗体的制备、纯化与特性分析

通过合成氯霉素完全抗原,制备氯霉素的多克隆人工抗体,建立氯霉素(CAP)的免疫学检测方法。采用重氮法合成氯霉素完全抗原,以氯霉素牛血清白蛋白(CAP-BSA)免疫大耳白家兔,用ELISA方法进行鉴定和特性分析。结果显示,该抗血清与链霉素、青霉素、四环素等常见抗生素的交叉反应率均小于2.1%,IC50为13.65 ng/ml,检测限达到1.01μg/L。获得了选择性好、特异性较高的氯霉素特异抗体,可用于氯霉素的快速定量检测。     

甲基对硫磷残留酶联免疫检测试剂盒的研制

合成了甲基对硫磷的半抗原,并与载体蛋白偶联合成了人工抗原,然后通过免疫的方法制备了其单克隆抗体.在筛选甲基对硫磷单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测苹果、玉米、蔬菜中甲基对硫磷残留的试剂盒.该试剂盒的灵敏度为0.5μg/L,对苹果、玉米、蔬菜样品的最低检测限分别可达到10、20、50μg/kg;加标回收率为70.3％～102.4％,变异系数为7.4％～13.0％;对实际样品的检测结果与气相色谱法基本一致.该方法快速、灵敏、可靠,为水果、蔬菜、谷物中甲基对硫磷的残留检测提供了便捷、准确的分析手段.     

用酶联免疫吸附试验检测马铃薯卷叶病毒

本文介绍用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法快速检测马铃薯叶片及块茎内的马铃薯卷叶病毒(PLRV),检测叶片的最高稀释倍数为1/128,检测块茎的最高稀释倍数为1/64。马铃薯病株的顶部叶片和底部叶片的病毒含量不同,而又没有一定的规律性。马铃薯感染PLRV后可表现为底叶卷叶、部分全株卷叶或顶叶卷叶,有的品种无症;还有一部分植株虽然表现出各种卷叶症状,但并不是由PLRV所致。我院马铃薯育种圃内常用的杂交亲本的带毒率为31.21％;在黑龙江省的几个主栽品种上均可检测到PLRV。     

检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法.结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5 μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min.对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%.     

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法。[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应,得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原,再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体,并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒。[结果]试验表明,该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34μg/kg,IC50(50%抑制浓度)为4.8μg/L,回收率为60.5%~79.7%,试剂盒的标准曲线范围为0~80μg/L,批内、批间的相对标准偏差均小于10%,三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1%,4℃下能够保存12个月,稳定性较好。[结论]研究可为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考。