黄瓜花叶病毒分离物核酸酶保护试验(RPA)方法的株系分化研究

 采用黄瓜花叶病毒((CMV)亚组Ⅰ株系Fny-CMV及亚组Ⅱ株系Ls-CMV的RNA₂的特定序列片段的cDNA克隆,体外转录,同时掺入³²P标记制备负链RNA探针,再与纯化的甜椒上的CMV中国分离物的RNA进行杂交,检测其与探针之间的同源性。共检测样品分离物3份。试验结果表明:河南新乡和北京密云的CMV甜椒分离物与Fny-CMV的核苷酸有高度同源性,隶属于Fny-CMV为代表的亚组Ⅰ株系。来自福建的样品与亚组Ⅱ的Ls-CMV株系有高度同源性,隶属于CMV亚组Ⅱ株系。本试验同时利用源于我国CMV亚组Ⅰ的K株系的RNA₂两个EcoR Ⅰ位点间1657-2125 nt的核苷酸序列为探针,同样与以上3份CMV中国分离物进行RNA杂交,进一步比较分析了这几个分离物与我国亚组Ⅰ的K-CMV株系的关系,证明了我国CMV存在亚组与株系分化。     

抑病毒菌素对黄瓜花叶病毒的作用效果初报

危害植物的病毒种类繁多,造成的损失惨重。在尚无良好的化学农药的情况下,国内外在抗病毒物质研究方面,取得了一定的进展［１～４］。据报道部分抗病毒菌素对植物病毒病的抑制和延缓病害发生具有一定作用［１］,但仍然无法应用于田间病害的防治上。为此,多年来作者致力于抗病毒微生物菌株的筛选和试验研究工作,发现Ｐｅｎｉｃｉｌｉｎｓｐ．的代谢产物对黄瓜花叶病毒（Ｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ,ＣＭＶ）作用效果良好。试验结果如下。１　材料与方法１．１　试验材料　寄主为番茄和菜豆;ＣＭＶ为本试验室由感病黄瓜上…     

黄瓜花叶病毒甜菜分离物的分离鉴定

 从新疆石河子地区春季采种甜菜和夏播母根用甜菜上分离到3个病毒分离物,代号为石-B-2、石-B-5和石-B-D,自然感染甜菜引起叶片黄色花叶、扭曲、皱缩和植株严重矮化。病毒粒体球状、直径28~30 nm、均含有分子量约为2 9k D外壳蛋白、3种相同的较大片段的双链RNA (即3400 bp的RNA1、3100 bp的RNA₂、2300 bp的RNA₃)和片段大小约400 bp的小RNA,石-B-2和石-B-D具有1100 bp的RNA4,在ELISA和琼脂双扩散试验中,3个分离物均与CMV-83抗血清有特异反应,初步认为这3个球状病毒分离物属于CMV,但它们具有狭窄的寄主范围,不感染心叶烟、蔓陀罗、番茄,在寄主反应、双链RNA4和卫星RNA的大小上明显不同于国内外报道的CMV株系或分离物,同时说明侵染甜菜的CMV可能存在着株系分化。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒病的鉴定与防治

黄瓜绿斑驳花叶病毒病是1种检疫性有害生物,主要为害葫芦科瓜类作物,在引种和调运种子、种苗时应加强对种苗进行检测,最好实行产地检疫。通常采用生物学、电镜观察、血清学和分子生物学进行鉴定。控制黄瓜绿斑驳花叶病毒病的有效方法是调运无病的种苗和瓜果,其次是合理轮作减少毒源。     

烟草和黄瓜花叶病毒互作中过氧化氢酶的动态变化

 病毒侵染能诱导植物体内活性氧的积累,是植物的一种广谱抗性反应.但是,活性氧也能使植物受到伤害,因此植物存在活性氧清除系统,过氧化氢酶(catalase,CAT)就是其中重要的清除酶类,将H2O2降解成为对植物无毒的H2O和O2.黄瓜花叶病是目前影响烟草生产的重要病害,但关于其互作中的AOS代谢研究,国内外尚未见报道.本文研究大量不同抗性的烟草品种接种CMV前后体内CAT活性的动态变化规律,以期明确酶活性栽的动态变化与抗病性之间是否存在确切的相关性.     

植物系统性获得抗病性的产生机理和途径

坏死型病原物侵染或某些生化制剂诱导处理后,植株未受侵染或处理部位产生对随后病原物侵染的抗性,称为植物系统性获得抗性,ＳＡＲ具有抗性表现系统、持久、抗病对象广谱三大特点。坏死型病原物侵染或某些生化制剂处理后,植株受处理部位迅速产生系统性信号,经韧皮部传导到未侵染或处理部位,诱发ＳＡＲ基因表达。水杨酸是诱发ＳＡＲ的系统性信号之一。此外,上部非处理部位处于敏化状态,能更迅速有效地产生针对挑战接种病原物的     

葡聚六糖诱导黄瓜抗霜霉病的研究

黄瓜经喷施人工合成的植物抗病性诱导剂葡聚六糖诱导后 ,黄瓜霜霉病的发病程度显著降低。葡聚六糖诱导黄瓜抗霜霉病的效果以质量浓度为10μg/L ,诱导间隔期为7d ,连续诱导 3次效果较好 ,其诱导持续期可达 7d。结果还表明葡聚六糖的诱导抗性表达不仅与它本身的作用机制有关 ,还与它的使用方法有关     

烟草品种对烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的抗性鉴定

 2010-2011年采用大田人工接种鉴定的方法,对生产中大面积推广使用的24份烟草品种进行了烟草花叶病毒（TMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）的抗性鉴定。结果表明,供试品种对TMV和CMV的抗病性存在较大差异,对TMV表现抗病的有Coker86、吉烟5号、Coker176、CV87、辽烟8号、CV91、中烟90等7份材料;表现中抗的有秦烟98、双抗70、C151等3份材料;表现中感的有秦烟96、G80、金星6007、龙江981、K326、秦烟201、NC89等7份材料;表现感病的有G28、云烟97、净叶黄、红花大金元、RG11、云烟85、云烟87等7份材料。对CMV表现抗病的有Coker86、龙江981、C151、秦烟201、云烟87等5份材料;表现中抗的材料是金星6007;表现中感的有CV91、RG11、Coker176、中烟90、K326、红花大金元、净叶黄、G80、G28等9份材料;表现感病的有秦烟98、云烟85、秦烟96、NC89、双抗70、云烟97、CV87、辽烟8号、吉烟5号等9份材料。其中兼抗TMV和CMV两种病毒病的材料有2份,分别是Coker86和C151。同时研究还发现,抗病性不同的烟草品种在受到病毒危害以后,对烟叶的产量和品质的影响也不同。明确了中国24个烟草品种的抗病性水平,为抗病品种的利用与品种合理布局提供科学依据,同时为烟草抗病毒病育种的亲本选择提供抗源信息。     

福建西番莲病毒病的发生及其病原黄瓜花叶病毒亚组鉴定

1988～1995年对福建西番莲病毒病的发生为害进行调查,发现在西番莲栽培区病毒病普遍发生,发病率通常在30％～40％,严重的达90％以上。田间症状主要表现为叶片环斑、皱缩、花叶、环斑花叶,死顶和果实木质化等。从田间病株采集40份样本,经电镜观察和采用A蛋白夹心ELISA(PAS-ELISA),用西番莲木质化病毒(PWV)、西番莲黄花叶病毒(PFYMV)、紫果西番莲花叶病毒(GMV)、烟草花叶病毒(TMV)及黄瓜花叶病毒(CMV)的抗血清进行测定,其中36个样本检测出CMV,表明福建西番莲病毒病的主要病原为CMV。与此同时,对西番莲上CMV进行亚组鉴定,采用鉴别寄主和单、多克隆抗体双夹心ELISA(DAS-ELISA)对36个CMV阳性样本进行测定,结果35个属CMV亚组Ⅰ,1个属CMV亚组Ⅱ,表明田间以CMV亚组Ⅰ分离物占绝对优势。     

异源Harpin对软腐欧氏杆菌与植物互作关系的影响

 本文通过三亲交配将带有梨火疫欧文氏杆菌功能完整的hrp基因簇的重组粘粒pCPP430转移到了胡萝卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora) Se9R中。从接合子中提纯的质粒与pCPP430的大小、酶切图谱相同;以该质粒为模板,用针对hrpN序列的引物经PCR扩增得到与hrpN大小相同的片段;用地高辛标记的hrpN作为探针进行Southern blotting分析,在接合子中的质粒上得到预期的杂交带。接合子可以在烟草叶片上稳定地引起过敏反应。另外,接合子可以在寄主马铃薯叶片上引起过敏反应样枯斑,表明异源harpin的表达及功能不受软腐菌的抑制。该接合子在体外产生的果胶酸裂解酶活性与受体菌Se9R无明显差别。低浓度的接合子在马铃薯块茎上的软腐症状明显低于受体菌Se9R。外源harpin表达可能不改变软腐欧氏杆菌的致病力、而是通过诱导马铃薯抗性达到减轻发病的作用。     

黄瓜花叶病毒两个甜瓜分离物的基因组及其侵染性克隆

为明确黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV）甜瓜分离物的分子变异情况及其侵染性,对2个甜瓜分离物CH99和XH18的基因组进行克隆、测序和分析,并通过构建全长cDNA克隆分析其侵染性。结果显示,黄瓜花叶病毒甜瓜CH99分离物3条RNA长度分别为3 356、3 049和2 211 nt,甜瓜XH18分离物3条RNA长度分别为3 381、3 048和2 217 nt。分离物CH99与XH18的核苷酸序列一致性为89.40%～95.80%,氨基酸序列一致性为90.00%～97.80%,CH99分离物与其他CMV分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性平均值分别为79.23%～89.29%和73.52%～93.90%,XH18分离物与其他CMV分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性平均值分别为79.81%～89.83%和74.02%～95.14%。遗传发育分析显示,这2个分离物均属于亚组IB成员。接种试验结果显示,分离物CH99和XH18的侵染性克隆构建成功,这2个分离物均能系统侵染本生烟、甜瓜和黄瓜,并在本生烟和甜瓜上引起较严重的症状,在黄瓜上引起的症状较弱,而二者均不能侵染西...     

种子种苗上黄瓜绿斑驳花叶病毒IC-RT-PCR检测方法的建立及应用

黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)是一种检疫性植物病毒, 种传和农事操作是其主要传播途径, 因此种子和种苗的早期检测尤为重要?鉴于种子检测的特殊性及幼苗病毒含量低的特点, 本试验通过制备CGMMV单克隆抗体, 结合特异性引物, 建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的IC-RT-PCR早期检测方法, 比较了IC-RT-PCR与DAS-ELISA和RT-PCR方法的特异性?灵敏度, 并对实际检测效果进行了评价?在操作程序上, IC-RT-PCR法与DAS-ELISA法一样简便, 但灵敏度远大于DAS-ELISA?IC-RT-PCR与RT-PCR均可检出20~25 ng种子上的病毒, 且特异性相当, 而DAS-ELISA法只可检出10 μg种子上的病毒?综上所述, IC-RT-PCR法可简便有效地应用于种子和种苗上CGMMV的检测, 为病毒防治的早期干预提供技术支撑?     

插接与劈接嫁接西瓜对黄瓜绿斑驳花叶病毒病传播的比较

为了明确西瓜嫁接对黄瓜绿斑驳花叶病毒病传播的影响,应用插接法与劈接法中刀片、竹签2种工具分别粘毒后再嫁接西瓜进行传毒能力比较,结果为：插接法嫁接传毒能力强于劈接法嫁接,粘毒竹签的传毒能力强于粘毒刀片,最初嫁接的1、2株瓜苗最容易染毒发病。     

烟草品种对烟草花叶病毒病和黄瓜花叶病毒病的抗性鉴定

由烟草普通花叶病毒(TMV)和烟草黄瓜花叶病毒(CMV)引致的烟草病毒病是世界烟草主产区普遍发生且危害严重的侵染性病害,每年给烟叶生产造成了重大的经济损失。本文采用温室苗期接种鉴定的方法,对16份烟草种质进行了TMV和CMV的抗病性鉴定。结果表明:不同的烟草品种对TMV和CMV的抗病性存在较大差异。在供试种质中,对TMV表现免疫的有‘牛耳烟’、‘8301’、‘台烟7号’、‘三生-NN’共4份材料;表现抗病的有‘吉烟5号’、‘双抗70’、‘大护脖香’、‘秦烟95’共4份材料;表现中抗的有‘铁把子’、‘中烟15’、‘秦烟98’、‘中烟98’共4份材料;表现中感的有‘NC89’、‘翠碧1号’、‘云烟97’共3份材料;表现感病的只有‘秦烟97’。对CMV表现中抗的材料有1份,是‘铁把子’;表现中感的有‘秦烟95’、‘三生-NN’、‘8301’、‘牛耳烟’、‘翠碧1号’共5份材料;表现感病的有‘秦烟98’、‘云烟97’、‘中烟98’、‘NC89’、‘大护脖香’、‘双抗70’、‘秦烟97’、‘中烟15’、‘台烟7号’、‘吉烟5号’共10份材料。研究发现,‘铁把子’是兼抗这两种病毒病的材料。本研究明确了我国16个烟草品种资源的抗病性水平,为抗耐病品种的利用与品种合理布局提供科学依据,同时为烟草抗病毒病育种的亲本选择提供抗源信息。     

Identification of blackeye cowpea mosaic virus from germplasm of yard-long bean and from soybean,and the relationships between blackeye cowpea mosaic virus and cowpea aphid-borne mosaic virus

Two potyvirus isolates, one from germplasm of yard-long bean (Vigna unguiculata ssp.sesquipedalis) introduced into the Netherlands, and another one from soybean plants (Glycine max) in Indonesia, were compared with two virus isolates of blackeye cowpea mosaic virus (BICMV) from the USA and a Moroccan isolate of cowpea aphid-borne mosaic virus (CAMV). It is proposed that all five isolates be now considered BICMV on the basis of host ranges, symptoms and serology. From our results, and a reassessment of the literature it is suggested to drop the name CAMV in favour of BICMV.Samenvatting Twee potyvirussen, de een in Nederland ingevoerd met genenmateriaal vanVigna unguiculata ssp.sesquipedalis en de ander uit planten van sojaboon (Glycine max) in Indonesië, werden vergeleken met twee isolaten van blackeye cowpea mosiac virus (BICMV) en een Marokkaans isolaat van cowpea aphid-borne mosaic virus (CAMV). Op grond van waardplantenreeksen, symptomen en serologie stellen de auteurs voor om alle vijf isolaten te beschouwen als BICMV. Gebaseerd op de verkregen resultaten en een kritische beschouwing van de literatuur wordt de aanbeveling gedaan om de naam CAMV te laten vallen ten gunste van BICMV.     

Taxonomy of Wisteria vein mosaic virus and extensions to its host range and geographical distribution

Wisteria mosaic, a serious disease of Wisteria spp. in horticultural production in many parts of the world, is caused by a virus, Wisteria vein mosaic virus (WVMV). This paper reports the presence of the virus in a new host, Wisteria venusta , and a new geographical distribution, New South Wales, Australia. A partial sequence (1329 nucleotides) of this isolate of WVMV was obtained, which represents the first available sequence data for the virus. Alignment of the nucleotide and predicted amino acid sequences with those of members of the Potyviridae showed closest identity with viruses of the Potyvirus genus. The predicted amino acid sequence has one open reading frame, open at the 5' end, corresponding to part of the nuclear inclusion b protein and the capsid protein, followed by a 251-nucleotide untranslated region and a polyadenylated tail at the 3' end.