“一种烟草花叶型病毒的快速灵敏检测方法”发明专利获公开

<正>日前,国家知识产权局公开一件由云南省烟草农业科学研究院和云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所共同申请的发明专利:一种烟草花叶型病毒的快速灵敏检测方法。该发明公开了一种烟草花叶型病株中烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒3种病毒的检测方法。通过     

郑州烟草研究院发明专利《一步法复合检测烟草普通花叶病毒与马铃薯Y病毒的方法及其引物》获得授权

<正>郑州烟草研究院发明的《一步法复合检测烟草普通花叶病毒与马铃薯Y病毒的方法及其引物》于2012年12月05日获得发明专利,国家专利局颁发的专利授权号为ZL201110067006.7。该方法包括:甄别比对病毒基因组中保守区域,人工筛选合成适用于两种病毒病复合RT-PCR特异性引物;分析获得TMV、PVY复合侵染烟叶样本,整合反转录和PCR反应所需酶和缓冲液,通过反应条件优化,建立基于一步法RT-PCR复合检测烟叶感染TMV、PVY的方法。     

简化一步多重RT-PCR法快速检测芜菁花叶病毒

芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)是侵染十字花科作物和观赏性物种的主要病害之一。利用反转录酶M-MLV和普通Taq酶,使用一步法多重RT-PCR技术,建立了一种快速、简便、特异性强的检测TuMV的方法。该方法简便,不需先对总RNA提纯,只需室温下在提取液中对病样叶片直接碾磨,用粗提液或浓缩后的DNA-RNA混合物为模板进行检测。2套针对TuMV的特异性引物确保了检测的准确性。     

双重RT-PCR检测方法可检测出太子参芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒

<正>宁德师范学院生物系和福建省特色药用植物工程技术研究中心研究人员针对不同产地栽培的太子参中主要存在芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒侵染且为害严重的情况,建立能同时检测这2种病毒的双重RT-PCR快速检测方法。根据GenB ank数据库中的TuM V、BBWV外壳蛋白基因核苷酸序列的保守区域分别设计简并引物,在单一RT-PCR检测体系的基础上,建立     

天津地区十字花科蔬菜病毒类型及其消长规律的研究

本文论述了天津地区十字花科蔬菜的病毒类型.主要分为四个类型:第一类芜菁花叶病毒(TuMV),第二类烟草花叶病毒(TMV),第三类黄瓜花叶病毒(CMV),第四类称为甘兰僵矮病毒,其中以芜菁花叶病毒为主导类型.调查鉴定结果表明,本地区夏季十字花科蔬菜病毒,主要来自种株白菜.二秋小白菜,小油菜以及秋甘兰,秋萝卜可为秋季大白菜直接提供毒源和传播介体.夏季栽培的或野生的十字花科植物是秋白菜病毒病的桥梁寄主.根据病毒消长规律的研究结果提出了秋白菜病毒病的防治途径.     

黄瓜绿斑驳花叶病毒的鉴定及分子检测

【研究目的】黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）的快速鉴定检测是控制该潜在危险性有害生物蔓延的有效途径。【方法】通过汁液摩擦接种、透射电镜观察、双抗夹心酶联免疫吸附测定法（DAS-ELISA）和RT-PCR方法对该病毒进行鉴定;同时对RT-PCR反应体系及扩增程序进行优化,建立CGMMV免疫捕获RT-PCR（IC-RT-PCR）检测方法。【结果】血清学、生物学、电镜观察和分子生物学方法证明供试样本为黄瓜绿斑驳花叶病毒引致。IC-RT-PCR方法可以简化RNA的提取,降低对试验材料要求。【结论】IC-RT-PCR的建立为CGMMV的检测提供了操作更为简便、特异性更强的快速、准确的检测方法。     

津田芜菁BrSIZ1基因克隆、定位及表达

SIZ1是植物细胞蛋白质翻译后修饰SUMO化的E3连接酶,参与植物蛋白相互作用、定位和抗逆反应等。为研究BrSIZ1在津田芜菁中的表达特性,本研究克隆了津田芜菁SIZ1基因全长cDNA序列,命名为BrSIZ1 (GenBank登录号为KY441465),该基因全长2754 bp,其ORF全长2571 bp,编码856个氨基酸残基的多肽。构建了BrSIZ1-GFP表达载体进行亚细胞定位研究,结果显示BrSIZ1-GFP定位于细胞核内,可能在细胞核中发挥其功能。利用荧光定量PCR检测表明,该基因表达量在叶子中最高,幼苗和红色根皮中次之,表达具有组织特异性。而且BrSIZ1在芜菁根皮中的表达受长波紫外线(UV-A)诱导,在4°C、37°C胁迫的幼苗中,表达量增加。     

辣椒三种病毒的多重RT-PCR同步检测

本研究根据辣椒轻斑驳病毒(PMMo V)、烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白(CP)编码序列设计了3对PCR检测引物,并初步建立了同步检测以上3种辣椒病毒的多重RT-PCR方法。以被感染了3种病毒的叶片的总RNA作为模板,可同时扩增到324 bp(TMV)、220 bp(PMMo V)和112 bp(CMV)的3个目标条带,在电泳图上清晰可辨。测序结果表明所扩增产物确为待检病毒靶序列。除阳性对照外,该多重RT-PCR体系不对ORSV、PVX和PVY等同属或不同属的其它病毒发生反应;该体系可检测到104倍稀释的病毒c DNA模板。同时,以建立的三重RT-PCR法对10份田间辣椒病样进行检测,其结果与单重RT-PCR结果一致,说明该法检测结果可靠,可用于PMMo V、TMV和CMV 3种辣椒病毒的同步检测。     

应用纳米磁珠荧光PCR检测棉花曲叶病毒

 为了提供快速灵敏检测棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus, CLCuV)的技术以防止其传播扩散,本研究根据CLCuV外壳蛋白基因（Coat protein, CP）保守序列设计了引物和TaqMan探针,并结合纳米磁珠(Magnetic nanoparticles, MNPs)建立了该病毒的MNP实时荧光PCR (Real-time PCR)检测方法。该方法检测阈值约为525 fg·μL^-1 DNA。通过对CLCuV、非洲木薯花叶病毒、烟草线条病毒、黄瓜花叶病毒及番茄斑萎病毒的检测表明,该方法具有良好的特异性;同时该方法无需任何PCR后处理,交叉污染风险小。本方法可用于CLCuV的快速检测。     

基因芯片技术检测黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒

黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大.农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法.本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并...     

我国新发明一种烟草疫霉菌分子检测引物及其检测方法

<正>福建省农业科学院植物保护研究所发明的一种烟草疫霉菌分子检测引物及其检测方法近期获得国家专利。该发明主要设计了一对烟草疫霉菌的特异引物(上游引物YhF:5'-GACATGATATCAACTGTTCTGCAG-3'和下游引物YhR:5'-CCTTGGATCTTCTCTCGATAAG-3'),经过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳,可在烟草疫霉菌纯DNA、带菌的发     

“抗TMV的三吡咯环类化合物及其制备方法和用途”发明专利获公开

<正>日前,国家知识产权局公开一项由中国农业科学院烟草研究所申请的发明专利:抗TMV的三吡咯环类化合物及其制备方法和用途。该发明化合物是生物制剂,且是专门针对TMV(烟草花叶病毒)开发的生防制剂,完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题,有利于农产品的无公害生产。据称,该发明化     

甜瓜种子中黄瓜花叶病毒和小西葫芦黄花叶病毒的RT-LAMP可视化检测方法

本研究旨在针对甜瓜种子中携带的黄瓜花叶病毒(CMV)和小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV),建立可视化环介导等温扩增检测方法。根据CMV和ZYMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列,分别设计并筛选出2套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,通过对反应体系中主要影响因素的优化,建立适用于快速检测CMV和ZYMV的RT-LAMP检测方法。对优化后的2种LAMP检测方法进行特异性和灵敏度验证。结果表明,建立的2种LAMP检测方法分别能够特异性地检测出CMV和ZYMV,检测灵敏度较常规RT-PCR分别高出10倍和100倍,并且可通过肉眼观察直接对反应结果进行判定。该方法的建立为基层及现场快速检测甜瓜种子的带毒情况提供了新方法。     

流式细胞术检测芜菁倍性与相对DNA含量方法

为探究合适的解离液类型用于流式细胞术检测芜菁倍性与相对DNA含量,明确新疆地区主栽芜菁品种的DNA含量和倍性,同时检测游离小孢子培养所获得的再生植株倍性。本研究选取‘阿恰芜菁’、‘温州盘菜’及小孢子培养所获得的再生植株群体为试验材料,在常用的10种解离液中筛选适合芜菁的解离液类型。LB01适合作为流式细胞术检测芜菁样品的最适解离液。以四倍体紫花苜蓿‘金皇后’为外标,检测芜菁的DNA含量及倍性后发现‘温州盘菜’的DNA含量为0.657 pg,倍性为二倍体。‘阿恰芜菁’的DNA含量为0.723 pg,倍性为二倍体。小孢子再生群体Ⅰ的DNA含量为0.626 pg,倍性为二倍体。小孢子再生群体Ⅱ的DNA含量为2.225 pg,倍性为四倍体。本研究为流式细胞术检测芜菁倍性和DNA含量的方法提供了数据参考,也将为芜菁群体变异、种质资源评价和新品种选育等研究提供基础。     

不同芜菁品种韧皮部花青苷的对比分析

本研究以新疆紫色芜菁与绿色芜菁(Brassica rapa var. rapa)为研究对象,结合超高效液相色谱(UPLC)和串联质(MS/MS)技术,对不同皮色芜菁果肉、果皮中花青苷进行分析鉴定。紫色芜菁与绿色芜菁中含有14种相同的花青苷,不同芜菁品种不同部位,花青苷含量不一致,表皮中含有的花青苷种类较多,果肉中含有的花青苷种类较少。不同皮色的芜菁品种在果肉中均含松香花青素O-己糖苷与松香苷3-O-葡萄糖苷。不同品种芜菁表皮中含有差异显著花青苷代谢物数目为8个,果肉中含有差异显著花青苷代谢物数目为5个;紫色芜菁果肉与绿色芜菁表皮花青素代谢物的相关系数为0.989 7;紫色芜菁表皮与绿色芜菁表皮花青素代谢物的相关系数为0.927 3。本研究完成花青苷代谢物的鉴定分析,明确紫色芜菁块根中花青素的分布,揭示新疆芜菁中花青苷类物质的组成差异与积累特性,这为揭示新疆芜菁中花青苷的合成与积累的分子机制和培育富含花青苷的芜菁新品种提供一定的理论基础。     

芜菁种子中总黄酮提取工艺研究

采用乙醇浸提法提取芜菁种子中的黄酮类化合物。结果表明:浸提提取的最佳条件是50 ml 70%乙醇在70℃下提取2 h。本试验采用分光光度法,以芦丁标准品测定芜菁种子提取物中总黄酮的含量,总黄酮含量为2.01%.方法简便,快速,重现性好,可作为检测芜菁种子提取物中黄酮含量的一种手段。     

不同大豆种质中大豆花叶病毒抗性基因的研究

大豆花叶病毒能引发世界范围内毁灭性大豆病害。有人已把美国鉴定出的98个大豆花叶病毒小种划分为7个菌株群（G1-G7）。已鉴定出控制大豆花叶病抗性的3个独立位点（Rsv1、Rsv3和Rsv4）在Rsv1和Rsv3位点存在多个抗性等位基因。本研究旨在依据不同大豆种质对大豆花叶病毒的差异反应，来对大豆种质进行分类。试验应用G1和G7大豆花叶病毒菌株来鉴定212个大豆基因型对大豆花叶病毒的反应。有55个基因型抗G1菌株群，     

应用纳米磁珠实时荧光PCR检测非洲木薯花叶病毒

建立非洲木薯花叶病毒(African cassava mosaic virus, ACMV)灵敏快速的纳米磁珠实时荧光PCR检测技术,防止其传入中国。采用TaqMan探针结合纳米磁珠(magnetic nanoparticles, MNPs)技术,以外壳蛋白基因为目标基因,通过特异性及灵敏度试验建立MNP荧光PCR检测方法。成功建立了非洲木薯花叶病毒(ACMV)的MNP荧光PCR检测方法;该方法检测阈值约为13 pg DNA,比普通PCR及ELISA方法灵敏度高25倍;该方法具有良好的特异性,能够有效区分双生病毒属的ACMV、棉花曲叶病毒(CLCuV)、番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)及番茄严重曲叶病毒(ToSLCV)。MNP荧光PCR方法能够快速灵敏的检测茎叶样品中的ACMV,无需任何PCR后处理,交叉污染风险小,适于口岸检验检疫。     

复合侵染甘蔗的病原病毒RT-PCR检测

根据甘蔗花叶病毒（sugarcane mosaic virus,SCMV）、高粱花叶病毒（sorghum mosaic virus,SrMV）和甘蔗黄叶病毒（sugarcane yellow leaf virus,SCYLV）外壳蛋白（CP）基因序列分别设计合成3对特异引物SCMV–F/R、SrMV-F/R和SCYLV-F/R,以表现花叶和黄叶复合症状的甘蔗叶片总RNA为模板,分别进行3种病毒单一RT-PCR检测,在SrMV和SCYLV特异引物RT-PCR反应体系中分别扩增到约850 bp和630 bp特异性片段。序列测定及同源性比对结果显示,850 bp片段测序所得序列与浙江象山、临平和余杭SrMV分离物（GenBank登录号分别为AJ310194、AJ310195和AJ310198）对应序列同源性95%,630 bp片段测序所得序列与广东、广西、福建SCYLV分离物（GenBank登录号分别为GU190165、GU190162、GU190159）对应序列同源性99%,表明该样品同时感染SrMV和SCYLV。在此基础上建立同时检测SrMV和SCYLV的一步双重RT-PCR体系,可检测10-6 g病叶组织中的病毒,田间样品检测效果良好。     

津田芜菁泛素结合酶BrUBC11基因的克隆及表达分析

为阐释津田芜菁Br UBC11基因的表达特性,克隆了津田芜菁UBC11基因的全长c DNA序列,命名为Br UBC11,Gen Bank登录号为KM396887。其c DNA全长685 bp,ORF区全长447 bp,编码148个氨基酸的开放阅读框;亚细胞定位结果显示,Br UBC11-GFP定位于细胞核内,表明Br UBC11蛋白可能在细胞核中发挥其功能。荧光定量PCR检测Br UBC11在芜菁不同组织中的表达结果表明,该基因在花瓣中表达量最高,花蕾中次之,具有组织特异性。而且Br UBC11在芜菁白色根皮中的表达受长波紫外线(UV-A)诱导。研究结果显示,在芜菁中,UBC11属于多功能基因,具有潜在的参与花发育和UV-A信号转导相关途径的功能。