华东地区家鸭中N2亚型低致病性禽流感病毒神经氨酸酶基因的重排

为研究华东地区家鸭中低致病性禽流感病毒NA基因的遗传进化规律,对2000年～2006年分离的包括H3N2,H5N2,H6N2,H9N2和H11N2的44株禽流感病毒的NA基因进行了遗传进化分析.44株病毒NA基因之间的同源性为82.9%～99.9%,4株H9N2病毒的NA基因同源性为96.9%～99.9%,所有H3N2病毒的NA基因同源性为92.3%～99.9%,H5N2、H6N2和H11N2病毒的同种亚型毒株间的NA基因同源性变化幅度较大,相反,有些不同HA亚型毒株间的NA基因同源性反而很高.进一步分析NA基因推导的氨基酸序列也表现出相似的规律.华东地区家鸭中N2亚型的禽流感病毒正处于不断地进化状态中,不同N2亚型的禽流感病毒之间已存在NA基因的重排.     

鸭源H5N1亚型高致病性禽流感病毒的分离鉴定及其HA和NA基因的生物信息分析

分离到1株 H5N1亚型高致病性禽流感病毒, 经序列测定发现HA蛋白裂解位点上插入多个连续的碱性氨基酸（PQREIRRKKR*G）,从分子上证实是一株高致病性禽流感病毒。核酸序列比较分析结果表明,分离的流感病毒HA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)同源率最高,达到98.8%;NA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1) 和A/chicken/Jiangsu/cz1/2002(H5N1)同源率最高,达到98.7%。氨基酸水平上,HA与A/duck/Viet Nam/Ncvd1/2002(H5N1)同源率最高,可达99.3%;NA与A/chicken/Jiangsu/cz1/2002(H5N1)同源率最高,达98.7%。HA与NA基因的潜在糖基化位点与作者所选参比毒株一致。通过遗传进化树分析结果表明,A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)可能是该毒株的来源株。     

美国发现低致病性禽流感病毒

美国农业部和内政部2006年8月14日联合宣布，正在进行的野生鸟类禽流感病毒监测发现，密歇根州的两只野生天鹅携带禽流感病毒，但不是在亚洲、欧洲和非洲流行的高致病性HsN1亚型，因此，不对人类构成威胁。     

一株鸭源新城疫病毒毒力基因分析及其对鸭的致病性研究

为了解中国鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的毒力特点,从2009年广东地区发病鸭群中分离和鉴定出1株新城疫病毒(简称NDV-104),对其生物学特性、致病性和融合蛋白(fusion,F)、血凝素神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)基因进行了研究。结果显示,分离株的MDT、ICPI和IVPI分别为56.4 h、1.95和1.64,结合F蛋白裂解位点(112~117位)的氨基酸序列分析,确定了分离株为新城疫强毒。致病性结果表明,分离病毒对雏鸭具有感染性和致病性。F基因遗传进化结果显示,分离株属于基因Ⅶd亚型。F、HN蛋白的氨基酸同源性结果表明,分离株与2000年以来国内外分离到的基因Ⅶ型NDV同源性较高,分别为96.6%~99.3%和97.0%~99.7%,而其与常用疫苗株B1、V4、Clone30、Mukteswar和LaSota的F、HN蛋白氨基酸序列的同源性较低,且与LaSota株和V4株的同源性最低,分别仅为88.1%和87.6%,说明分离株与经典新城疫病毒毒株存在一定的差异。     

鸭源H5N1亚型禽流感病毒分离株的致病性及表面蛋白基因序列分析

分析1株2004年从广东省分离获得的H5N1型禽流感病毒株A/Duck/GuangdongJiedong/23/2004对SPF鸡和鸭的致病性,并对其血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的序列进行测定,与GenBank中收录的其他序列进行比较。结果,此分离株对SPF鸡和鸭均具有高致病性,且致死率达100%。HA基因与SCK/ST/475/04的同源率最高,而NA基因与Ck/GD/178/04同源率最高。进化分析结果表明,此毒珠与DK/Ch i-na/E319-2/03的HA、NA亲缘关系较近,推测它们来源于同一祖代毒株。推导的HA基因氨基酸裂解位点为-RRRKK-,具有典型高致病性禽流感的特征序列;NA基因颈部49~68位20个氨基酸缺失是近年来H5N1亚型优势流行株共同的遗传标志。     

采用哨兵鸡早期预警高致病性禽流感

在商业化鸡场感染低致病性禽流感病毒（LPAIV）的鸡群中设置哨兵鸡有可能成为一种有效检测禽流感病毒向高致病性转变的方法。美国加利福尼亚州立大学戴维斯分校的科研人员收集了2002年智利发生高致病性禽流感暴发的数据以及有关实验室研究的报道资料，A／Chicken／Ghile／176822／02（H7N3／LP）和A／Chicken／Chile／184240—1／02（H7N3／HP）病毒被用于构建一个计算机模型。     

老鼠可向家禽传播低致病性禽流感病毒

禽流感病毒可感染多种哺乳动物,其中老鼠可能会将禽流感病毒传播给暴发场所以外的家禽,美国农业部国立野生动物研究中心的科研人员在最新的研究中找到确证。他们在爱达荷州近期暴发低致病性禽流感的斗鸡场捕获的6只老鼠均呈A型流感抗体阳性。采用5株不同亚型的低致病性禽流感病毒(3株分离自野鸟,2株分离自鸡)感染在野外捕获的老鼠。结果发现,野鸟源禽流感病毒接种老鼠后能够有效复制,而鸡源禽流感病毒则     

H5N1亚型禽流感病毒HA、NA基因在杆状病毒中的重组体的构建

本实验将禽流感病毒的HA,NA基因克隆到转移载体Pfastbackdual中,然后使其转入到杆状病毒,经卡那霉素、四环素、庆大霉素抗性及蓝白斑筛选得到阳性克隆,转染昆虫细胞,获得一株重组病毒。本研究为该病毒的亚单位疫苗的进一步研究奠定了基础。     

六株H4N6亚型水禽禽流感病毒分离株NA基因的进化分析

为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)的分子流行病学资料,通过对2002～2007年分离自华东地区家鸭的6株稀有H4N6亚型低致病性AIV的NA基因序列进行的分析,发现病毒M基因全长约1 464～1 465bp,开放阅读框(ORF)都位于NA基因的19-1431位,长度均为1 413bp.6株病毒NA基因之间的同源性为90.8%～99.8%,其中5株病毒NA基因的同源性非常高,达到96.0%～99.8%,但另外1株与其他病毒NA基因的同源性相对较低,介于90.8%～92.2%,进一步分析表明该病毒可能来源于其他地区禽类.对NA基因的推导氨基酸分析表明,ORF编码470个氨基酸,NA没有发生茎部缺失.研究结果表明,水禽内的H4N6亚型禽流感病毒进化相对比较缓慢.     

禽流感病毒神经氨酸酶基因在重组杆状病毒中的表达

根据已知H5N1亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)基因序列设计并合成引物。从H5N1亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高保真DNA聚合酶扩增NA基因,构建转移载体pFastBacHTA-NA,并与大肠杆菌DH10Bac的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-NA。在脂质体介导下将rBacmid-NA转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。在sf9昆虫细胞中表达NA蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和激光共聚焦检测蛋白。结果表明:表达的NA蛋白分子量约为53 ku,该蛋白能与H5N1亚型AIV血清发生特异性反应,证明NA蛋白表达正确,具有良好的免疫反应性。     

禽流感病毒N3亚型神经氨酸酶基因的克隆

本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOLL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT-PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18-T载体上,并进行鉴定和序列测定.测定结果表明所获得的NA基因DNA片段长1451bp,编码469个氨基酸残基,与其他亚型的NA基因编码的氨基酸长度相一致.根据推导的氨基酸序列进行预测,该蛋白具有6个潜在的糖基化位点和19个半胱氨酸残基.与其他亚型的NA基因相比较发现克隆的NA基因符合神经氨酸的分子结构特征,本研究首次获得N3亚型NA基因全序列.     

禽流感病毒血凝素保守氨基酸对其受体结合位点的影响

采用PCR定点突变技术,对H5N1亚型禽流感病毒的血凝素HA基因受体结合位点相关的保守氨基酸分别进行以下位点的定点突变：35位K→R、45位D→N、98位Y→F、193位K→R和267位A→T,构建突变表达载体pCI-HA,转染293T细胞进行瞬时表达。流式细胞检测结果显示：193位K→R的突变体的HA的表达显著增加;98位Y→F突变体的HA的表达受到显著抑制。同时,血球吸附试验表明,同一HA突变体吸附鸡红细胞和马红细胞时,显示出不同的红细胞吸附能力。因此,受体结合位点相关的193位和98位的保守氨基酸不仅对受体结合位点结构域的形成有影响,它们还在决定AIV感染的宿主特异性中具有重要的作用。     

2013－2019年广西边境地区低致病性禽流感病毒监测分析

为了解广西边境地区低致病性禽流感病毒（low pathogenic Avian influenza virus，LPAIV）的流行情况，本研究对2013-2019年在广西边境地区的规模养殖场和活禽市场采集的33 964份家禽棉拭子样品，采用鸡胚接种方法进行病毒分离，并结合血凝抑制试验和RT-PCR等方法鉴定禽流感病毒的亚型。结果显示，共有3 892份样品分离到LPAIV，2013-2019年的样品病毒分离率分别为17.39%、11.23%、13.59%、9.31%、9.09%、9.12%和15.21%，总分离率为11.46%，其中2013年样品的病毒分离率最高。分离到的LPAIV包括H1、H3、H4、H6、H9、H10和H11 7种亚型，样品病毒分离率分别为0.14%、4.37%、0.19%、4.06%、2.69%、0.01%和0.003%。其中活禽市场分离到H1、H3、H4、H6、H9、H10和H11 7种亚型流感病毒，样品病毒分离率分别为0.19%、5.53%、0.21%、5.29%、3.41%、0.01%和0.004%，总分离率为14.64%；而养殖场分离到H3、H4、H6和H9 4种亚型流感病毒，样品病毒分离率分别为1.26%、0.12%、0.79%和0.78%，总分离率为2.95%，养殖场的分离率远低于活禽市场（14.64%）。鸡源样品的病毒分离率为5.77%，水禽样品的病毒分离率为15.10%，环境样品的病毒分离率为21.67%，水禽和环境样品的病毒分离率远高于鸡。结果表明，当前广西边境地区家禽携带多种亚型LPAIV，水禽是高风险禽群，应进一步加强监测和防控；活禽市场污染严重，应进一步加强对活禽市场的监管力度，建立和实施更加科学有效的活禽市场运营机制。     

台湾发现低致病性禽流感病毒

据世界动物卫生组织(OIE)报道,台湾地区的一个鸭场发现低致病性禽流感。自2011年3月21日H5N2病毒在台湾爆发以来,台湾当局对疫病发生地区半径三公里以内的所有鸡场进行了疫病流行及临床调查。在调查过程中,调查人员     

加拿大从野鸟身上检出H7低致病性禽流感病毒

据加拿大食品检验署（CFIA）消息，11月1日加拿大食品检验署发布消息称，目前已确认加中西部地区的野鸟身上出现低致病性禽流感病毒。     

云南2008～2009年H9N2亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因序列分析

禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是病毒粒子表面抗原,是亚型划分的重要依据。从云南分离的H9N2亚型禽流感病毒感染鸡胚尿囊液中提取总RNA,采用特异性引物经RT-PCR分别扩增云南毒株10个HA和9个NA基因,纯化后克隆至pMD18-T载体,并对其进行测序。序列比对及系统发育分析结果表明:云南H9N2毒株HA基因核苷酸序列同源性为95.0%～99.7%;NA基因核苷酸序列同源性为86.2%～99.6%。在进化分枝中HA基因均属于欧亚分枝的类CBJ194亚分枝,与CBJ194的核苷酸序列同源性为92.0%～99.1%,NA基因属于CK/BJ/1/94和QaHKG1/97两个分枝。云南毒株HA裂解位点结构具有低致病性病毒分子特征;HA受体结合位点143、145、198和234位氨基酸存在变异,尤其234位氨基酸全部变为L,呈现了人流感受体结合特性。NA糖基化位点61～63、86～88部分毒株存在缺失,部分毒株在143～145位出现新的糖基化位点。     

广西鸭源H6N6亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析

为了明确H6亚型禽流感病毒在广西地区的流行情况,广西自治区动物疫病预防控制中心从健康家鸭体内分离鉴定了一株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/GX/038/2009 (H6N6) (Dk/GX/038/09),对其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进行了克隆和序列分析,并绘制了基因遗传进化树.结果显示,Dk/GX/...     

1株H6N6亚型禽流感病毒贵州分离株HA和NA基因克隆与序列分析

为了解 H6亚型禽流感病毒(AIV)在贵州地区的流行情况,本研究对2014年从贵州省三穗鸭体内分离鉴定出的1株H6N6亚型AIV (A/duck/Guizhou/013/2014) HA和NA基因进行了克隆和序列分析。结果显示,A/duck/Guizhou/013/2014的HA基因与华东地区2009年鸭源H6N6亚型AIV同源性最高,达97.5%,HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为P-Q-I-E-T-R-G,符合低致病性AIV的分子特征;而NA基因则与福建2007年鸭源H6N6亚型AIV同源性最高,达98.2%;由遗传进化树分析结果可知,HA和NA基因在遗传进化关系上,与湖南毒株位于同一分支,而与2007年贵州分离的3株H6N6亚型AIV不处于同一分支,说明A/duck/Guizhou/013/2014与本地区的H6N6亚型AIV亲缘关系较远。本研究结果表明当前贵州地区H6N6亚型AIV存在明显的遗传多样性。     

鸡禽流感及其诊断

1病原禽流感病毒(AIV)属正粘病毒科流感病毒属,病毒粒子呈球形、杆状或长丝状。典型的禽流感病毒粒子在电镜下呈球形,直径为80~120纳米,平均100纳米。流感病毒为负链单股RNA病毒,基因组是分节段的,由8个片段组成,共编码8种结构蛋白和2