籽鹅卵巢组织差异表达基因的研究

本研究旨在筛选产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织差异表达的基因,并进行功能分析,从而探讨鹅产蛋的分子调控机理。利用抑制性消减杂交技术筛选籽鹅卵巢组织中的差异表达基因,用GOTM软件将所得ESTs从分子功能水平进行GO分类。结果表明,所构建的籽鹅卵巢组织消减cDNA文库的削减效率在20倍以上,片段大小主要在300～750bp;挑选86个阳性克隆测序,获得15个ESTs,其中有11个为已知的ESTs,4个未知的ESTs;11个已知的ESTs被分成结合功能、催化活性、酶调节活性、转运蛋白活性和其它功能。本研究成功构建了籽鹅卵巢组织消减cDNA文库,并筛选得到了15个可能在产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织中差异表达的ESTs,它们可能在鹅产蛋过程中起着重要的调控作用。     

鹅TSH-β基因多态性与产蛋性能关联性分析

研究根据鹅TSH-β基因的DNA序列设计4对引物,采用PCR-SSCP技术进行多态性检测,并分析其与46只扬州鹅产蛋性能的关联性。结果表明:引物I2检测出多态现象,DNA直接测序后显示,在intron 2的第205~212位之间存在AACAACAGTGAATTCTGTGG或AGTTTAT 2种序列,形成AA、AB和BB 3种基因型,等位基因A和B的基因频率分别为0.6596和0.3404。经最小二乘分析,BB型群体在一个产蛋周期内的平均产蛋量显著高于AA型群体(P<0.05)。     

利用抑制消减杂交技术筛选鹅就巢行为相关基因

旨在利用抑制消减杂交技术构建鹅就巢与产蛋cDNA基因文库,筛选就巢母鹅上调与下调表达的基因.以就巢期和产蛋期鹅卵巢组织互为检测子和驱动子,进行正反双向消减杂交,获得鹅卵巢差异表达基因文库.从双向文库随机挑选单菌落进行PCR验证,结果表明文库质量良好.选取654个阳性克隆进行测序分析,获得641条表达序列标签(ESTs).对ESTs进行去除载体序列、质量检测、聚类及拼接,经BLASTn比对,有166条ESTs找到与之匹配的同源序列,其中92个是功能基因.比较就巢与产蛋SSH文库,发现就巢SSH库中参与细胞凋亡、信号转导及细胞结构的基因出现频率较高;产蛋特异性基因文库中参与物质能量代谢、细胞防御的基因较多;尚有许多差异片段属于未知功能蛋白或理论推定蛋白.结果提示,催乳素受体、抗苗勒管激素以及雌激素受体基因在就巢期上调表达可能与鹅就巢行为的启动与维持有关.该结果为进一步研究鹅就巢行为分子调控机制奠定基础.     

种鹅产蛋前期的饲养管理

饲养种鹅的目的在于提高鹅的产蛋量和种蛋的受精率,使每只种鹅生产出更多的健壮的雏鹅.产蛋前期的饲养管理水平将直接影响到产蛋期种鹅产种蛋的数量和质量,因此,做好种鹅产蛋前期的饲养管理在生产上有着十分重要的意义.     

种鹅产蛋前期饲养管理要点

后备种鹅进入产蛋前期时,体质健壮,生殖器官已得到较好的发育。母鹅体态丰满,羽毛紧扣体躯,并富有光泽,性情温驯,食旺盛,采食量增大,行动迟缓,常常表现出衔草做窝,说明临近产蛋期。现把种鹅产蛋前期的饲养管理要点介绍如下：     

产蛋后期的饲养管理

产蛋后期的饲养管理,产蛋期的划分为产蛋前期,即开产到42周龄,42周龄后为产蛋后期。产蛋后期母鸡体重几乎不再增加,产蛋率下降,为节约饲料,防止母鸡过肥,每隔4周应抽样一次。此期蛋白质每日每只15-16g,代谢能普通气温310大卡,炎热时280大卡。所以在产蛋高峰期后除要更换产蛋率小于80％的产蛋日粮外,还应做好以下四方面的工作：     

育成鹅与产蛋鹅的饲养

1育成鹅70~80日龄至开产前为种鹅的育成期,饲养管理的重点是对种鹅进行限制饲养,以达到适时的性成熟。饲养管理分为生长阶段、控料阶段和恢复饲养阶段。1.1生长阶段     

产蛋后期的饲养管理

产蛋后期的饲养管理,产蛋期的划分为产蛋前期,即开产到42周龄,42周龄后为产蛋后期。产蛋后期母鸡体重几乎不再增加,产蛋率下降,为节约饲料,防止母鸡过肥,每隔4周应抽样一次。此期蛋白质每日每只15-16g,代谢能普通气温310大卡,炎热时280大卡。所以在产蛋高峰期后除要更换产蛋率小于80％的产蛋日粮外,还应做好以下四方面的工作：     

蛋鸡与肉鸡卵巢组织基因差异表达与产蛋数杂种优势的相关性研究

以白莱航蛋鸡(AA)、农大褐蛋鸡(DD)和白洛克肉鸡(EE)3个纯系及其正反杂交产生的6个杂交系为试验材料，应用mRNA差异显示技术，研究了产蛋高峰期(32周龄)纯种鸡与正反交杂种群卵巢组织的基因差异表达，及其差异表达模式与32周龄产蛋数的杂种优势率的相关性。结果：24种引物组合共扩增出1572条带，其中能够重现的有1126条，重现率为71．63％。在6个正反杂交群中检测到7类基因差异表达模式：P1杂种超强表达(22．29％)；P2杂种特异表达(9．84％)；P3杂种减弱表达(9．85％)；P4杂种沉默(3．42％)；P5单亲特异表达(22．91％)；P6单亲显性表达(25．74％)；P7共显性表达(5．95％)。相关性分析表明：32周龄产蛋数的杂种优势率与杂种特异型表达模式(P2)呈显著的负相关(P＜O．05)；而与杂种减弱型表达模式呈显著的正相关(P＜O．05)。这一研究结果为探索鸡的产蛋性状杂种优势的分子遗传机理奠定了基础，同时探讨了差异表达基因与杂种优势的关系。     

怎样饲养产蛋后期的种鹅？

五、六月份一些品种的母鹅产蛋期已近尾声,如四川I白鹅、扬州鹅等,这些品种的鹅从上年的8月份开始产蛋,其这一繁殖周期的体力、营养都消耗很大,这时,要密切注意和掌握仍在产蛋的母鹅的膘情和产蛋情况,及时增补能量饲料、蛋白饲料和维生素,以防止蛋体变小、蛋壳变薄、畸型蛋增多、产蛋时间拖长等。     

家鸡血液生化遗传标记与产蛋相关性状间基因多效／连锁反应浅析

剖析了蛋鸡４个基因座位共１０个遗传标记与产蛋相关性状间基因多效／连锁效应,讨论了检测生化位点（主基因）与经济性相关效应的常用统计方法的效果。     

种鹅产蛋前期的饲养管理

近几年，随着人民生活水平的提高，膳食结构的改善，大鹅作为绿色食品已成为餐桌上不可缺少的佳肴。由于市场的推动，养鹅业发展的很快，根据笔者多年生产实践的体会，就种鹅产蛋前期的饲养管理技术介绍如下，供参考。     

鸡早期产蛋性能与ESR1基因内含子1多态性相关分析

为探寻鸡ESR1基因内含子1多态性与早期产蛋性能存在的关联性,采用DNA测序和PCR-SSCP技术对124只绿壳蛋鸡的基因型与性状进行相关性研究。结果表明,鸡ESR1基因In1片段中发现5种基因型:T1T1、T1T2、T2T2、T1T3和T3T3;试验群体处于高度多态,群体遗传偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。方差分析显示,各基因型个体间的早期产蛋性状指标达到了显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)水平,其中T1T3基因型个体性能处于优势,对该群体进行人为选择可提高产蛋性能。     

籽鹅卵巢5个基因产蛋前期与产蛋期mRNA表达的研究

为了进一步分析从消减文库获得的未知基因表达与产蛋性能的相关性,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法分析籽鹅卵巢组织中5个基因EST4、EST5、EST6、EST7和EST8产蛋前期与产蛋期的mRNA表达。结果显示,EST4、EST5、EST6、EST8的产蛋期表达量显著高于产前期(P<0.05),EST7的产蛋期表达量极显著高于产蛋前期(P<0.01)。研究结果提示,这5个基因参与鹅产蛋性状的分子调控。     

扬州鹅PRL基因5'调控区SNP检测及其与产蛋性状的相关分析

催乳素(Prolactin,PRL)是影响禽类就巢性和产蛋性能的重要候选基因,本试验以扬州鹅为研究素材,采用PCR-SSCP方法检测催乳素基因5′调控区序列的SNP位点并分析其与扬州鹅产蛋性状的相关性,以期为扬州鹅产蛋性状标记的辅助选择提供一定的理论依据。结果表明,在试验群体中检测到CC、DD两种基因型,未检测到CD型;对不同基因型个体测序分析发现,在外显子1上游﹢11处发现了一个G→T突变;等位基因C和D的频率分别为0.7692和0.2308。供试群体在5′调控区检测位点上处于Hardy-Weinberg不平衡状态。PRL基因5′调控区的碱基突变对扬州鹅的产蛋量和开产日龄有极显著的影响,CC型群体在一个产蛋周期内的平均产蛋量极显著高于DD型(P0.01);开产日龄也是CC型极显著早于DD型(P0.01)。     

抑制消减杂交技术及其在动物繁育研究中的应用

基因是染色体上具有一定座位的遗传单位.基因表型克隆法是以mRNA为起始材料,利用RT-PCR和接头技术,对差异显示的基因条带进行回收后作探针,在cDNA或基因组DNA文库中筛选新基因.这方面发展起来的新技术主要有：cDNA差式分析法（RDA）、标签接头竞争PCR技术（ATAC-PCR）、抑制消减杂交法（SSH）、基因表达连续分析法（SAGE）、cDNA3＇端限制酶切片段显示法（RFD）等,这些技术省去了分子标记定位分析的繁琐程序,并同时能分离多个未知产物的差异表达基因.其中,抑制性消减杂交技术是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术,具有检测的特殊性,在动物和人类的生殖和发育领域广泛应用.     

伊犁鹅产蛋前后各期卵巢转录谱的构建及卵泡发育相关基因的分析

【目的】构建产蛋前后各期伊犁鹅卵巢转录组文库,结合生物信息学分析揭示不同产蛋期伊犁鹅卵巢组织差异表达基因,并鉴定出影响鹅卵巢发育的关键基因,为伊犁鹅的繁殖调控提供理论参考。【方法】选择处于开产期（KL组）、产蛋期（CL组）及休产期（XL组）的伊犁鹅各4只,屠宰后取其卵巢组织,用于构建卵巢转录组文库。通过新基因挖掘、基因差异表达、基因注释以及蛋白互作网络分析筛选出与鹅卵泡发育相关的候选基因;随机挑选8个差异表达基因,应用实时荧光定量PCR验证其表达情况。【结果】伊犁鹅卵巢组织学结果表明,在开产期时,伊犁鹅卵巢表面有大量初级卵泡,而产蛋期卵巢则显示出卵泡的层级性,在休产期卵巢中可观察到卵泡出现向内凹陷、闭锁的现象。通过转录组测序（RNA-Seq）,从构建的12个伊犁鹅卵巢cDNA文库中获得有效读数57 811 186~85 328 377条,Q30值均>93.38%,每个样品所产的测序读数于鹅参考基因组上的比对率在82.79%~89.24%。在卵巢中注释的新基因共有1 112个,单核苷酸多态性（SNP）位点总数为1 642 273~2 425 069个;SNP和插入缺失（InDel）均主要注释于内含子区域;各时期的可变剪切类型主要集中为最后1个外显子可变剪切（TSS）及第1个外显子可变剪切（TTS）。在KL vs CL、XL vs CL及XL vs KL组中分别有337、1 136和525个差异表达基因,共有差异表达基因为α2A肾上腺素能受体（ADRA2A）、表皮蛋白（CP）、非转移性黑色素瘤糖蛋白B （GPNMB）及α-1-抗胰蛋白酶样（LOC106033756）。GO功能富集分析发现,差异表达基因主要富集在肽基酪氨酸磷酸化的正调控、细胞黏附及质膜外侧等过程。KEGG通路富集分析发现,差异表达基因主要显著富集于神经活性配体-受体相互作用、ECM-受体相互作用及类固醇生物合成等。结合蛋白互作网络分析,筛选到与鹅卵巢发育相关的潜在调控因子Bruton’s酪氨酸激酶（BTK）、血小板源性生长因子受体α（PDGFRA）、整合素β3（ITGB3）等。实时荧光定量PCR结果显示,RNA-Seq结果准确可靠。【结论】本研究揭示了产蛋前后各期伊犁鹅卵巢组织中的基因表达差异,筛选到影响伊犁鹅卵巢发育的神经活性配体-受体相互作用、ECM-受体相互作用、类固醇生物合成等重要通路与BTK、PDGFRA和ITGB3等关键候选基因,为了解鹅卵巢组织调控产蛋性能的分子机制提供了理论支撑。     

五龙鹅GnRH、PRL和FSHβ基因多态性与产蛋性状相关研究

本试验对五龙鹅促性腺激素释放激素(GnRH)、催乳素(PRL)和促卵泡激素β亚基(FSHβ)基因进行多态性检测,并分析其与产蛋性状的关系。选产蛋高峰期五龙鹅100只,采取个体圈养方式饲养,记录个体产蛋量。结果显示,FSHβ外显子3存在1个SNP位点产生3种基因型AA、AB、BB,产蛋量呈现AA型>AB型>BB型趋势;PRL内含子2上存在1个SNP位点产生3种基因型CC、CD、DD。CC型、CD型、DD型的开产日龄、开产蛋重、平均蛋重之间差异不显著(P>0.05),CD型、DD型的产蛋总量显著高于CC型(P<0.05);GnRH基因5′端调控区存在1个SNP位点产生2种基因型EE、EF型,EF型的开产日龄、开产蛋重、平均蛋重都要高于EE型,但是二者之间差异不显著(P>0.05),EE型的产蛋总量显著高于EF型(P<0.05)。     

扬州鹅产蛋性能与最适开产体重相关性分析

鹅的年产蛋量和体重是一对负相关（拮抗）性状,为阐明扬州鹅开产体重与年产蛋量这2个性状间的相关关系,在保持扬州鹅种蛋重量的前提下维持其高产特性,本研究以第6世代扬州鹅高产系、快长系共计754只母鹅产蛋和开产体重数据为实验材料,对2个性状的相关性进行了分析,并按照母鹅体重进行分组。结果显示：扬州鹅高产系与快长系分化明显,开产体重、年产蛋量及蛋重3个指标均差异显著;扬州鹅年产蛋量和体重呈显著负相关,相关系数为-0.938,和蛋重呈显著负相关,相关系数为-0.956;母鹅开产体重在4.0～4.5kg之间,年产蛋量最大,超过72个,蛋重在160g以上。综合实际鹅业生产的要求,扬州鹅年产蛋需保持在70个以上,蛋重超过160 g,故在种鹅饲养过程中,母鹅开产体重最好控制在4.0～4.5 kg。