大额牛冻精在瘤牛超数排卵中的应用效果及F1代的亲子鉴定

【目的】本研究旨在探讨大额牛（Bos frontalis）冻精在瘤牛（Bos indicus）体内胚胎生产及杂交改良中的应用前景。【方法】对9头瘤牛（婆罗门牛）供体进行超排,发情后将供体分为试验组（n=5）和对照组（n=4）,分别用大额牛和瘤牛（婆罗门牛）冻精人工授精（AI）,以第1次AI之日为0天,在第7天回收胚胎;对试验组287号供体左侧子宫角回收胚胎,右侧子宫角使胚胎继续着床妊娠;对287号母牛所产F1代犊牛（大额牛×瘤牛）进行亲子鉴定;测定F1代牛的初生、6月龄和12龄的体重、体尺指标。【结果】试验组和对照组供体的受精率分别是90.5 %和80.8%,头均获胚数分别是4.2±1.3枚和6.5±4.7枚,可用胚数分别是3.0±1.2枚和4.3±5.3枚,可用胚率分别是71.4%和65.4%,两者差异不显著（P＞0.05）;287号母牛左侧子宫角回收到2枚可用胚,右侧子宫角内胚胎继续发育,并成功产下1头母犊,妊娠期为288 d;对F1代犊牛亲子鉴定显示,9个微卫星座位上犊牛与公牛、犊牛与母牛都具有共享的等位基因,父子关系相对机会（RCP）为99.9949%,证明此例亲子鉴定的确是一个三联体家庭,从而证实了种间杂交的真实;F1代牛的初生、6月龄和12月龄重分别为31.5 kg、180.0 kg和280.0 kg;初生～12月龄平均日增重达680.8 g。【结论】大额牛冻精在瘤牛超排中应用效果好;并获得国内首例大额牛（独龙牛）与瘤牛杂种牛犊;F1代牛生长较快,杂种优势明显。     

大额牛（Bos frontalis）与瘤牛（Bos indicus）的种间杂交研究

 【目的】探讨大额牛（Bos frontalis）与瘤牛（Bos indicus）杂交利用潜能及杂交育种前景。【方法】选用婆罗门（Brahman）母牛,以CUE-MATETM（孕酮阴道栓）+ PG（氯前列烯醇）法同期发情处理后用大额牛冷冻精液对其进行人工授精（artificial insemination,AI）,调查记录母牛产犊时间、妊娠期及犊牛性别等;测定大额牛与婆罗门牛杂交F1（大婆F1）、大额牛和婆罗门牛的初生体重及6、12和18月龄的体重;进行大婆F1的核型分析;对大婆F1的繁殖性能进行研究。【结果】 ① 婆罗门母牛的同期发情率、妊娠率和产犊率分别为83.87%、60.56%和45.07%,母牛（n=24）的平均妊娠期为（290.83±5.26）d;② 大婆F1中母犊占71.88%,分别显著高于大额牛和婆罗门牛（P＜0.05）、极显著高于大额牛与黄牛杂交F1（大黄F1）和BMY牛（P＜0.01）;③ 大婆F1（n=29）初生体重及6、12和18月龄平均体重分别为（26.69±4.84）、（153.08±37.58）、（219.34±31.31）和（302.06±28.92）kg,分别比大额牛（n=18）高68.18%、37.12%、45.07%和40.13%（P＜0.01）;分别比婆罗门（n=45）低14.40%（P＜0.01）、5.23%（P＞0.05）、13.12%（P＜0.01）和12.76%（P＜0.01）;0—18月龄大婆F1中公牛和母牛平均日增重分别为（503.09±44.91）g和（502.89±53.54）g,分别比大额牛高35.98%和39.85%（P＜0.01）,但分别比婆罗门牛低16.49%（P＜0.01）和6.63%（P＞0.05）;④ 大额牛、婆罗门牛和大婆F1的染色体数目（2n）分别为58、60和59;大婆F1母牛（n=2）的初妊娠年龄、初妊娠体重和初产年龄分别为（16.00±2.83）月龄、（342.50±30.41）kg和（26.00±2.83）月龄,且年产1犊;⑤ 对5头、15—24月龄大婆F1公牛进行电刺激采精,均未采集到精液。【结论】大额牛和瘤牛杂交,其杂种牛生长发育快,适应性强,杂种优势明显;F1代母牛可繁育,且成熟早,繁殖力强;但F1代公牛是否可繁育有待进一步研究。     

大额牛的生物学特征及研究开发利用潜力

 大额牛是中国唯一的半野生半家养的珍珍稀牛种,仅分布于云南省的独龙江和怒江流域，以及印度的阿萨姆邦、东孟加拉和与缅甸北部钦邦。根据国内外研究和多年调查认为：(1)大额牛（Bos frontalis）染色体的数目、形态、结构均不同于黄牛(Bos taurus)和野牛(Bos gaurus)，3者染色体数目(2n)分别为58，60和56条，在常染色体中黄牛没有近中着丝点染色体，野牛有两对，而大额牛有一对，染色体的臂数相等；（2）大额牛的食物以竹子、青蒿和杂草为主，饲料条件差，生存环境恶劣，但其生长速度快，0.5，1，1.5，2和3岁大额牛的体重可分别达140 kg，218 kg，264 kg，296 kg和342 kg；(3)大额牛具有较为典型的肉用牛体型和较好的产肉性能，且其肌纤维直径明显小于其它牛，牛肉的系水率、嫩度和多汁性明显高于其它牛；（4）繁殖力强，能繁母牛基本上可实现一年一胎，且可以与黄牛杂交。大额牛不仅具有极高的研究学术价值，而且有极大的开发利用价值。     

BMY牛、婆罗门牛及云南黄牛遗传多样性及群体遗传结构研究

选用BMY牛、婆罗门牛和云南黄牛作为研究动物群体,对5个微卫星DNA座位的遗传变异及多态性进行分析,以了解其群体遗传结构及BMY牛的育成情况。结果显示:5个位点在3个群体中的多态信息含量分别为0.6708、0.5676和0.6307,呈高度多态性。平均杂合度BMY牛最高为0.6897,婆罗门牛为0.5701,云南黄牛为0.6078,3个群体均表现出较高的遗传多样性。     

大额牛寄生线虫的初步调查

 大额牛(Bos frontalis)在我国目前仅见于福贡、贡山的独龙江一带,为数较少。是一种半野生、半家养的珍贵畜类。由于产区地处边疆地区,交通十分不便。     

大额牛瘤胃细菌16S rRNA基因序列分析

【目的】研究大额牛(Bos frontalis）瘤胃细菌16S rRNA基因序列,为揭示大额牛瘤胃细菌组成的多样性以及开发这一珍稀生物资源提供分子生物学依据。【方法】采用细菌通用引物F27和R1492对目标基因进行PCR扩增,克隆、测序后利用Neighbor-joining方法构建系统进化树。【结果】共获得147个16S rRNA基因序列,在GenBank登录号为DQ673466～DQ673612。按照97%的相似性标准,这些序列被分为86个操作分类单元。有16个序列与已培养菌的序列相似性≥97%,占总序列的10.9%;另有22个序列与已培养菌的序列相似性为90%～97%,占总序列的15%;剩余109个序列为未培养、鉴定菌,所占比例高达74.1%。系统进化分析显示,大额牛瘤胃细菌主要分布于低G+C含量细菌门（57.1%）和噬纤维菌/屈扰杆菌/拟杆菌门（42.2%）,仅有一个序列位于螺旋体门。【结论】本试验获得了大额牛瘤胃细菌16S rRNA基因序列,为进一步研究大额牛瘤胃微生态系统组成及其与饲料消化之间的关系奠定了基础。     

全放牧婆罗门牛和BMY牛胚胎回收适期的探讨

选用婆罗门牛和BMY牛供体超数排卵,以第1次人工授精（AI）当日为0d,分别在AI第6～6．5天、7—7．5天和8—8．5天回收胚胎,统计≤16细胞胚、桑椹胚、囊胚和孵化胚的数量,计算各发育阶段胚胎所占的百分率,分析婆罗门牛和BMY牛的胚胎回收适期。结果表明：婆罗门牛AI第6～6．5天的桑椹胚率比BMY牛高43．54个百分点（P〈0．01）,AI第8～8．5天的孵化胚率比BMY牛高35．94个百分点（P〈0．05）,胚胎发育速度比BMY牛较快。罗门牛和BMY牛在AI第6～6．5天回收胚胎的囊胚率低,而第8—8．5天的孵化胚率高,胚胎回收以AI第7—7．5天为宜。     

大额牛 SCD 基因多态性及肉质性状的表达

为研究大额牛 SCD 基因突变与其肉质性状的关系,利用 DNA 直接测序的方法对大额牛、黄牛的 SCD 基因进行 SNP 检测,再应用 SPSS 及 BioEdit 软件对 SCD 基因多态性及肉质性状表达的关系进行分析。结果显示：在大额牛 SCD 基因中有9个 SNP 位点,第二外显子2884 bp 处发现 A→C 突变。该基因对其粗脂肪（大额牛背最长肌0．61％,半腱肌0．48％;黄牛背最长肌3．35％,半腱肌2．72％）与粗蛋白（大额牛背最长肌19．48％,半腱肌19．24％;黄牛背最长肌17．75％,半腱肌18．59％）2种肉质性状有显著影响。     

BMY牛和婆罗门牛核型分析

[目的]观察BMY牛及婆罗门牛染色体核型,为培育我国热带肉牛新品种积累细胞遗传学基础资料和数据.[方法]采用外周血淋巴细胞培养及常规染色方法制备牛染色体标本,比较BMY牛及婆罗门牛染色体核型的差异.[结果]BMY牛和婆罗门牛染色体数为2n=60,染色体臂数(NF)=62,公牛为XY型,母牛为XX型,29对常染色体为端着...     

全放牧婆罗门牛和BMY牛的超数排卵效果及激素水平比较

为了比较婆罗门牛和BMY牛的雌二醇(E2)、孕酮(P4)水平及胚胎生产潜力,并探讨MOET技术在BMY牛扩繁中的应用前景,采用进口激素(日本产FSH 24~36 mg+美国产PG 35 mg)和国产激素(国产FSH 10~12 mg+国产PG 0.8 mg)对全放牧婆罗门牛和BMY牛进行超排,并于超排前(同期发情第7天)、超排开始、超排第3天、超排发情当天和胚胎回收当天采集血液,采用RIA法分析血浆中的E2和P4水平。结果表明,BMY牛的黄体数和获胚(卵)数、可用胚数分别较婆罗门牛高2.09个和0.95、0.36枚,但差异不显著(P>0.05);BMY牛的排卵率较婆罗门牛高18.46%(P<0.01),而可用胚率则较婆罗门牛低2.55%(P<0.01)。BMY牛在5个处理时段的E2和P4平均值分别较婆罗门牛高0.58 pg/mL(P<0.01)和1.44 ng/mL(P>0.05),在各处理时段的P4水平变化规律几乎与婆罗门牛一致,E2/P4值为婆罗门牛的5.16倍。结果提示,BMY母牛的E2和P4水平高于婆罗门牛,在激素水平和繁殖性能方面表现出一定的杂种优势;E2水平低是婆罗门牛发情微弱和排卵率低的主要原因之一;在同等放牧管理和超排处理条件下,婆罗门牛及其杂种BMY牛对外源激素的敏感性基本一致,具有同等的胚胎生产潜力。     

云南大额牛的生物学特征及其瘤胃微生物特点综述

[目的]为大额牛的进一步研究及开发提供参考。[方法]根据国内外研究现状,综述了云南大额牛的生物学特征及其瘤胃微生物特点。[结果]云南大额牛具有较为典型的肉用牛体型和较好的产肉性能,且其肌纤维直径明显小于其他牛,牛肉的系水率、嫩度和多汁性明显高于其他牛;染色体的数目、形态、结构均不同于黄牛和野牛,三者染色体数目（2n）分别为58、60和56条,且可与黄牛杂交;独特的食性体现在以竹子为主食,且对各种粗饲料的体外干物质消化率都显著高于云南黄牛;瘤胃中总可见细菌和纤维分解菌分别为4.51×109和1.63×109个/ml,显著高于云南黄牛,其瘤胃优势细菌主要为纤维分解菌。[结论]云南大额牛不仅具有极高的学术研究价值,而且有极大的开发利用价值。     

从mtDNA和SRY基因多态揭示云南大额牛杂交起源

从父系、母系全面揭示云南大额牛的遗传背景.采集了云南大额牛、印度野牛(Bosgaurus)、迪庆黄牛、怒江黄牛以及文山高峰牛共5个种群的血液样品,对其中70头牛mtDNA D-loop和39头公牛Y染色体非同源部分SRY基因序列多态检测,结合GenBank已经报道的相关序列,对所构建的单倍型NJ系统树和网络图进行了聚类分析.线粒体DNA数据显示,云南大额牛母系来源于瘤牛(B.indicus)和普通黄牛(B.taurus),云南本地牛母系也来源于瘤牛和普通黄牛;SRY基因序列信息显示,云南大额牛父系来源于大额牛(B.frontalis),云南本地牛父系来源于印度瘤牛.结果说明,云南大额牛为大额牛与黄牛的杂交后代,云南本地牛主要为瘤牛血统.     

Y染色体多态性与中国黄牛起源和分类研究

通过常规法、G带和C带对7个黄牛品种染色体进行系统研究所获得的资料,同时汇集了近20年来中国境内22个黄牛品种和1个大额牛种共计30个黄牛品种（其中4个外来牛品种）染色体的研究资料,分析和探讨了中国黄牛的起源、进化与分类。结果表明,中国黄牛Y染色体具有多态性,有中、亚中和近端着丝点Y染色体。中国北方黄牛多为中部和亚中部着丝点Y染色体,南方黄牛多近端丝点Y染色体,中原黄牛在品种内个体间多具有中、亚中和近端着丝点Y染色体3种类型。说明中国黄牛起源的多元性,即源于普通牛和瘤牛。在进化过程中,中国北方黄牛受普通牛的影响大,南方黄牛受瘤牛的影响大,中原黄牛同时受普通牛和瘤牛的影响,是由普通牛和瘤牛长期交汇融合形成的。根据26个黄牛品种Y染色体形态类型,绘制了中国黄牛Y染色体在中国的分布地域图。     

地方牛品种云南独龙牛的研究进展

介绍了独龙牛的习性、起源和生产性能等,并针对目前存在的问题提出建议。独龙牛是珍贵的地方牛种资源,仅分布在中国大陆的云南省怒江流域。独龙牛种质资源的保护对保持牛种质资源多样性有着重要意义,并且在牛的新品种培育方面具有不可忽视的价值。     

雷琼牛Cyt b基因序列分析及其分子系统发生探讨

通过对20头雷琼牛(Bos indicus)细胞色素b(Cyt b)基因序列(1 140 bp)的比对和分析,共发现7个变异位点,定义了6种单倍型。经与GenBank上6个牛种的Cyt b基因序列进行比较,分析其碱基组成和核苷酸序列变异,计算不同牛种间的kimura双参数遗传距离。以亚洲水牛(Bubalusbubalis)为外群,应用邻接法构建牛属动物分子系统发育树。结果表明:雷琼牛与印度瘤牛(Bos indicus)一样同属于典型的瘤牛,但两者有明显的区别,推测中国可能是世界瘤牛的发源地之一,不支持雷琼牛含有爪哇牛(Bos javanicus)血统的观点。     

鲁西黄牛遗传多样性及其系统地位的研究

 以中心产区简单随机抽样在山东省鄄城县和梁山县共抽取鲁西黄牛87头，用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和水平淀粉凝胶电泳技术检测21个编码血液蛋白（酶）的结构基因座的基因频率，同时引用国内外13个群体7个相同座位的研究资料，进行聚类分析。结果表明，在所检测的21个基因座中，有9个存在多型，多态位点百分比为42.86%，群体内遗传变异水平相对较高，平均杂合度为0.1416；鲁西牛与东南亚牛种亲缘关系较近，证实了鲁西牛是由北方蒙古利亚牛系和南方瘤牛的混血种，但不可能含有巴厘牛的血统。目前应扩大保种群的数量，以维持群体内的遗传多样性。     

基于细胞色素b基因序列的中国牛亚科家畜系统发育关系

 【目的】探讨中国牛亚科家畜物种间的系统发育关系,为牛亚科家畜的系统演化历史提供分子证据。【方法】采用PCR产物直接双向测序法,获得普通牛、瘤牛、牦牛、大额牛、沼泽型亚洲水牛和河流型亚洲水牛共6个物种的线粒体DNA Cyt b基因全长序列,运用分子进化软件分析物种间的系统发育关系。【结果】6个牛种的Cyt b基因序列长度均为1 140 bp,没有观察到插入/缺失突变,共检测到220个变异位点,包含213个简约信息位点;Cyt b基因序列变异中转换数明显高于颠换数,转换数和颠换数的比值为5.2,突变没有达到饱和状态。由遗传距离可知,普通牛与瘤牛的亲缘关系最近,而它们与大额牛、牦牛、沼泽型亚洲水牛、河流型亚洲水牛的亲缘关系依次逐渐疏远。牛亚科家畜6个物种分布于4个主要的单系群分支,可划归为家牛属、牦牛属、准野牛属和水牛属;牛种间的分歧时间在0.775—6.43 MYA,亚洲水牛与其它牛种间的分歧时间最长,普通牛与瘤牛的分歧时间最短。大额牛和印度野牛的单系性都没有得到显现,大额牛和印度野牛在线粒体DNA水平上不能清晰地相互区分。【结论】中国牛亚科6个牛种划分为4个分支,分别对应于家牛属、牦牛属、准野牛属和水牛属,家牛属与准野牛属、牦牛属、水牛属的亲缘关系逐渐疏远;6个牛种间的进化分歧时间在0.775—6.43 MYA。大额牛与印度野牛的亲缘关系非常近,两者在较早的世代具有共同的母系起源;不支持大额牛是印度野牛的家养型或驯化种的观点,它们有可能都是现已灭绝的某种野生牛的后代。     

闽南牛结构基因座多型性的研究

以中心产区典型群简单随机抽样原则在福建省漳州市抽取闽南牛64头,采集血样,按常规方法分离血浆和血细胞,冷冻后带回实验室-20℃保存备用。用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和水平淀粉凝胶电泳技术(SGE)检测21个编码血液蛋白(酶)的结构基因座。同时引用其他学者用相同方法获得的国内外12个牛群体7个相同座位的研究资料,进行聚类分析。结果表明:在所检测的21个基因座中,有10个存在多型,多态位点百分比为47.62%,群体内遗传变异水平相对较高,平均杂合度为0.1593;证实了闽南牛与东南亚牛种亲缘关系较近,闽南牛是南方黄牛和瘤牛的混血种,但不应含有巴厘牛或斑腾牛的血统。