水貂犬瘟热CDV_3疫苗株基因组序列测定及H基因遗传稳定性分析

对水貂犬瘟热CDV3疫苗株基因组进行全序列测定与分析,以阐明该疫苗株的来源亲本毒株,基因特征及H基因遗传稳定性。将CDV3疫苗株基因组cDNA分9个重叠片段进行RT-PCR并克隆入pMD 18-T载体中,测定全长cDNA序列。并与CDV野毒参考株和疫苗株N、F和H基因氨基酸序列比对分析其基因变异情况。通过对CDV3疫苗株6个不同生产批次(Vero细胞培养代次)H基因序列测定以分析毒株的分子遗传稳定性。基因序列分析结果表明:CDV3疫苗株基因组全长15 690 bp,与CDV野毒株基因组同源性较低(93.0%~95.3%)。H基因核苷酸和氨基酸序列与Lederle疫苗株(EF418783)同源性最高,分别为99.6%和98.7%。而6个不同培养代次CDV3疫苗株H基因氨基酸序列无任何差异。由此证实CDV3疫苗株的亲本毒株与Lederle疫苗株有着最密切关系,不同培养代次的CDV3疫苗株H基因具有较高的遗传稳定性。     

犬瘟热新型疫苗研究进展

犬疸热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染引起的犬及其他肉食动物的一种急性或亚急性、高度接触性传染病.近年来虽广泛应用弱毒疫苗预防CD,但世界各地仍有犬及野生动物感染CDV并造成CD流行的报道.随着分子生物学技术的深入发展,国内外学者应用基因工程技术对犬瘟热预防进行了深入研究,并取得了丰富的研究成果.笔者对近几年来犬瘟...     

犬瘟热疫苗株CDV3的血凝素基因的克隆与序列分析

犬瘟热是由犬瘟热病毒(CDV)引起的犬科、鼬科、浣熊科等多个科属动物感染的一种急性、热性传染病,犬、水貂、狐狸、貉等动物极易感染此病。近年来,国外对CDV蛋白组成和基因组结构的研究已经较为深入。CDV基因组为负链线性RNA,总长15 690 bp,由15 616个核苷酸组成。病毒粒子中主     

犬瘟热疫苗研究进展

犬瘟热（CD）是由副粘病毒科麻疹病毒属的犬瘟热病毒（CDV）引起的犬科、鼬科、猫科等多种动物感染的1种急性、高度接触性传染病。本病主要侵害动物的呼吸系统、消化系统以及神经系统,具有较高的发病率和致死率,其自然感染宿主已不断扩大到多种陆生和水生动物。CD呈世界性流行,     

疫苗用犬瘟热弱毒株毒力返祖试验

以10代犬瘟热病毒（CDV－XN112）弱毒株第5代细胞种毒接种30日龄健康犬，对其遗传稳定性、安全性进行试验。结果表明，CDV－XN112毒株连传3代，接种犬临床无任何异常，精神、食欲、体温均正常；解剖后检查，肺门淋巴结、肝、肾、心、脾、肠也无组织病理学变化，血样电镜观察到较多典型CDV病毒粒子，TCID50达10^-4．5，用此病毒接种MA－104Vero细胞单层，产生典型细胞病变（CPE）。     

小熊猫接种犬瘟热弱毒疫苗的效果分析

使用荷兰英特威(intervet)公司生产的犬用犬瘟热(Canine Distemper)弱毒疫苗,接种了云南野生动物收容拯救中心、云南野生动物园和南京市红山森林动物园3处不同地点、不同饲养环境条件下的72只小熊猫,历时12 a,先后共接种302次,接种前所有小熊猫经过检疫、检查,无任何疾病,健康状况良好.抽检其中4只小熊猫作抗体变化测定,接种前中和抗体效价平均为1∶44,经犬用犬瘟热病弱毒疫苗接种后中和抗体效价提高到1∶1976,经多次接种试验,除1只发生不良反应出现死亡之外,其余接种的71只健康状况良好,多年来未发生犬瘟热病,通过此次试验,证明使用荷兰英特威公司生产的犬用犬瘟热弱毒疫苗接种小熊猫较为安全,中和抗体效价比接种前提高了45倍,有很好的免疫效果,是国内动物园预防小熊猫犬瘟热较为理想的疫苗.     

一例犬瘟热的病例报告

1只1岁10个月的雌性贵宾犬,1周前发现眼部分泌物增多、精神沉郁、食欲不振,经临床检查、犬瘟热抗原试纸检测、血常规检查、犬C-反应蛋白荧光定量检测,确诊为犬瘟热。对病例采取常规支持疗法治疗,最终病犬痊愈。     

一例犬瘟热的RT-PCR诊断

采用特异性引物，对一例犬瘟热疑似病例的肺脏及肝脏样品进行RT-PCR扩增(反转录多聚酶链式反应试验)，结果得到两份与预期相符合的阳性产物，而在对牛瘟疫苗进行扩增时则未得到阳性结果，表明该方法对犬瘟临床病例的诊断特异而有效。     

犬瘟热疫苗弱毒融合蛋白穿膜区基因的序列分析

本研究根据Ｂａｒｒｅｔｔ．Ｔ报道的犬温热病毒（ＣＤＶ）Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ株融合蛋白（Ｆ）的基因序列,设计合成了一对可扩增出穿膜区基因的引物（Ｐ８和Ｐ１８）,引对引物扩增的ｃＤＮＡ长度应为６２０ｂｐ。     

水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗（CDV3-CL株,悬浮培养）安全性评价

为考察新研制的水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV3-CL株,悬浮培养)的安全性,分别以一次单剂量(1头份)、单剂量重复和一次超剂量(10头份)接种动物,对疫苗进行全方位安全性评价,试验动物涉及水貂幼崽、育成水貂以及妊娠水貂等,重点观察注射动物的体温、食欲,生产性能是否发生改变、注射部位是否出现炎症反应以及实验动物接种部位组织病变等,连续观察15d,结果发现,实验动物没有发生炎症反应,动物体温变化也处于正常范围内,证明疫苗是安全的,从而为疫苗的推广奠定基础。     

犬瘟热主动免疫的研究概况

犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus,CDV)，是负链单股不分节的RNA病毒，属于副粘病毒科麻疹病毒属，是当前对我国养犬业、毛皮动物养殖业的野生动物保护业危害最大的病原之一，经常引起大批犬、貂、狐等动物发病、病死率30%-80%^[6]，雪貂高达100%^[4]，经济损失惨重。近年来，包括大熊猫、小熊猫以及狮、虎、豹等食肉目所有8个科、偶蹄目猪科、灵长目的猕猴属和鳍足目海豹科等多种动物，均有CD自然发病的报道，甚至人也有CDV感染的病例，并且CDV自然感染的动物范围还有不断扩大的趋势，其危害也越来越大。由于CDV呈世界性分布，敏感宿主种类广泛，且可在大量的不相关动物种类中交叉感染^[8]，靠种间传播，消灭CDV是不容易的，但可使用疫苗来控制。     

济南市犬瘟热病毒H基因遗传进化分析

为了解济南市犬瘟热病毒(CDV)的流行情况,通过随机采集7份济南市2019年1月-6月份宠物医院疑似感染CDV的临床样品,提取病毒RNA,扩增CDV H基因全长序列,连接至载体,测序后进行H基因序列的氨基酸及核苷酸同源性分析、进化树分析、主要氨基酸位点突变分析以及H基因抗原表位预测分析.结果显示,7个野毒株均为Asia...     

小熊猫接种犬瘟热疫苗后的抗体检测

以犬用犬瘟热弱毒疫苗接种从产地新引入南京市玄武湖动物园的２只小熊猫,在接种后１１个月内每月采血１次,用微量中和试验检测其体内抗犬瘟热病毒抗体效价结果显示：小熊猫接种后１个月时抗体效价已达１：１０００左右,２个月时效价最高达１：２０００左右,而后缓慢下降,至７和１１个月时分别约为１：１００和１：２００;同时检测了以前接种过同一疫苗的３只该动物园自己繁育的小熊猫和福州市动物园内的６只小熊猫的ＣＤＶ中和     

紫锥菊增强犬瘟热疫苗和犬细小病毒疫苗免疫效果的研究进展

详细阐述了紫锥菊的药理活性、安全药理学、临床应用以及毒理学研究等内容。紫锥菊可作为免疫增强剂,提高犬瘟热疫苗和犬细小病毒疫苗的免疫效果,本文为其研究与开发提供一定的参考。     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性,坏死,空泡化,合肥体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体,８天可见核内包涵体,核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比,ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。     

犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗,分组进行了免疫小鼠试验,对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应,pVAXLPH pVAXLPF pVAXLPN 3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答,免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0.332,而免疫前为0.158;抗CDV中和抗体效价为1∶(4~16);CD4 T/CD8 T比值为2.05±0.38,而对照组为1.99±0.56;免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0.384和0.356。基因疫苗免疫犬试验中,进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示,基因疫苗免疫3次后,血清中抗CDV ELISA抗体效价为0.296,抗CDV中和抗体效价为1∶(8~32)。基因疫苗免疫2次,再使用弱毒疫苗加强免疫1次,血清中抗CDV ELISA抗体效价为0.433,抗CDV中和抗体效价为1∶(16~64)。     

怀化地区犬瘟热病毒H、F基因遗传多样性及其遗传进化分析

【目的】探究怀化地区犬瘟热病毒的基因变异与遗传多样性情况,阐明其遗传进化关系。【方法】从怀化地区收集30株犬源犬瘟热病毒样本,用PCR法扩增其H、F基因序列。利用DNAStar软件分析H、F基因序列碱基组成;利用Clustal X、MegAlign软件进行变异位点和遗传多样性分析;运用Clustal X、PhyML 3.0软件,采用最大似然法(ML)对怀化地区犬瘟热病毒进行遗传进化分析,并用FigTree v 1.3.1软件构建遗传进化树。【结果】30株怀化地区犬瘟热病毒均为Asia-Ⅰ型,其H、F基因序列长度分别为1 778和1 850 bp,其AT含量分别为56.8%～57.9%和54.9%～56.1%,GC含量分别为42.2%～43.0%和44.1%～44.9%。H基因的种内差异为0～3.1%,种间差异为51.36%～60.15%;F基因的种内差异为0～2.4%,种间差异为39.60%～53.09%。基于H、F基因序列所构建的遗传进化树发现,来源于怀化地区的30株犬源犬瘟热病毒全部位于遗传进化树的同一分支上。【结论】来源于怀化地区犬瘟热病毒之间虽存在一定程度的基因变异和遗传多样性...     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性、坏死,空泡化、合胞体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体,８天可见核内包涵体,核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比,ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上增殖后的毒力较高,除不同毒株间可能存在差异外,培养温度的高低亦是原因之一。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的最佳增殖条件是在３３℃培养８～１２天。