规模化猪场猪瘟、细小病毒抗体水平监测和免疫效果分析

兽医防疫体系的建设除了与猪舍的建筑、饲养管理、卫生管理及消毒、药物预防保健等有直接关系外,最关键的是要有一套因地制宜、切实可行的疫苗免疫程序及免疫监测评价系统。但是在疫苗免疫接种上普遍存在一个很大的误区,即仅仅注重疫苗免疫接种的数量(免疫密度),却忽视了免疫接     

规模化猪场猪瘟、口蹄疫抗体水平监测和免疫效果分析

应用正向间接血凝试验检测45个规模化猪场共954份血清,其中母猪的猪瘟抗体水平大于和等于1∶16的血清占88.3%(362/410),育肥猪、保育猪的猪瘟抗体水平大于和等于1∶16的血清分别占80%(40/50)和65.2%(75/111),保育猪免疫效果最差;母猪的口蹄疫抗体大于和等于1∶128的血清占84%(583/694),育肥猪、保育猪的猪瘟抗体水平大于和等于1∶128的血清分别占66.7%(30/45)和47.7%(31/65),保育猪、育肥猪免疫效果较差。     

规模化猪场口蹄疫、猪瘟和蓝耳病抗体水平监测及免疫效果评估

为摸清规模化猪场中猪瘟、蓝耳病和口蹄疫的免疫状况,通过免疫监测,及时了解免疫效果,为有重点地开展相应的免疫预防提供准确的科学依据.     

河南规模化猪场猪瘟、口蹄疫抗体水平监测与免疫效果分析

为了解河南规模化猪场猪瘟、口蹄疫疫苗的免疫效果,应用正向间接血凝试验对全省18个省辖市41家猪场的924份血清样品进行实验室检测。结果显示:对种公猪、母猪、育肥猪3种不同年龄段的猪群的猪瘟抗体检测中,母猪血清检测347份,其中免疫合格329份,合格率94.8%;种公猪血清检测126份,免疫合格126份。合格率100%;育肥猪血清检测448份,免疫合格387份,合格率86.4%。口蹄疫抗体检测中,母猪血清350份,其中免疫合格326份,合格率93.1%;种公猪血清检测126份,免疫合格126份。合格率100%;育肥猪血清检测445份,免疫合格378份,合格率84.9%。以上结果表明,猪瘟、口蹄疫的抗体水平检测合格率均在80%以上,且种公猪的抗体免疫合格率大于母猪,育肥猪为三者中最低。     

规模化猪场猪瘟、口蹄疫抗体水平监测和免疫效果分析

近几年,我市养猪规模有了很大的提高,但随之而来的猪群饲养密度也越来越高,再加上猪场的猪流动和引种工作频繁,场厂疾病相当复杂.     

宁夏某规模化猪场猪瘟、口蹄疫抗体水平监测和免疫效果分析

2002年以来,对宁夏某规模化猪场,合计1 622份血清,分别进行了猪瘟、口蹄疫的抗体检测.其中,在我们检测的1 385份血清中,猪瘟抗体合格的831份,合格率为82.88%.检测的237份血清中,口蹄疫抗体合格108份,合格率45.57%.     

规模化猪场猪瘟抗体水平监测和免疫效果分析

应用ELISA检测来自柳州市3个大型规模猪场共435份血清中的猪瘟抗体,其中57份血清猪瘟抗体OD值低于30,占13．1％;有44份血清OD值在30-40之间,占10．1％;有334份血清猪瘟OD值大于或等于40,占76．8％。育肥猪和种猪群的抗体阳性率分别为67．5％和88．2％。种猪的免疫效果比育肥猪好。     

规模猪场口蹄疫、猪瘟和蓝耳病抗体水平监测及免疫效果分析

猪O型口蹄疫(FMD)、高致病性猪蓝耳病(PRRS)、猪瘟(CSF)三种疫病都是当前国家强制免疫的猪重大疾病,危害极大,其免疫预防的成败直接关系到养猪业的健康发展,为了摸清我县规模猪场中口蹄疫、猪瘟和蓝耳病抗体水平和免疫状况,有重点地开展相应的免疫预防措施,我们抽查检测了28个规模猪场184份血清中的口蹄疫、猪瘟及猪蓝耳病抗体,并对其免疫抗体的阳性率及保护率结果进行对比分析,提出提高猪三种疫病免疫抗体的措施,以供参考.现报道如下.     

闽西地区规模化猪场猪瘟抗体水平监测及免疫效果分析

应用猪瘟正向间接血凝试验 ,检测了闽西地区规模化猪场 10 93份血清的猪瘟抗体水平。结果表明 ,猪瘟血清抗体水平≤ 1∶ 8的有 2 6 7份 ,免疫合格率为 75 .5 %。哺乳仔猪检测 10 7份 ,猪瘟血清抗体水平≤ 1∶ 8的有 34份 ,免疫合格率为 6 8%。断奶仔猪检测 333份 ,猪瘟血清抗体水平≤ 1∶ 8的有 12 3份 ,免疫合格率为 6 2 %。育肥猪检测 34 0份 ,猪瘟血清抗体水平≤ 1∶ 8的有 94份 ,免疫合格率为 72 %。母猪检测 313份 ,猪瘟血清抗体水平≤ 1∶ 8的有 16份 ,免疫合格率为 95 %。所有猪群中断奶仔猪免疫合格率最低 ,与临床上断奶仔猪猪瘟发病率最高相吻合。     

浙江省规模化猪场猪瘟免疫状况监测

应用正向间接血凝试验分别检测了46个规模化猪场1075头母猪、9个规模化猪场198头育肥猪、规模化猪场72头断奶前仔猪和13个规模化猪场296头断奶后仔猪血清的猪瘟抗体效价。结果，母猪、育肥猪、断奶前仔猪和断奶后仔猪分别为149、65、3和110份血清抗体效价≤1∶8，低于临界保护线；分别有926、133、69和186份血清抗体效价≥1∶16，视为免疫合格，免疫合格率分别为86．17％、67．17％、85．83％，检测结果表明，断奶后仔猪和育肥猪免疫效果不理想。     

四川省PPV与PCV2的病原流行病学调查

从四川省21个规模化猪场采集样品273份,利用PCR方法检测并分析了猪细小病毒和猪圆环病毒的感染及混合感染情况,结果共检出PPV病原阳性样品47份（占17．22％）;PPV阳性猪场8个（占38．1％）;种猪的感染率较高,仔猪感染率相对较低;检出PCV2病原阳性样品143份（占52．38％）,PCV2阳性猪场18个（占85．7％）;PCV2感染随猪年龄的增长而升高;检出PPV和PCV2混合感染样品29份（占10．62％）;同时存在PPV和PCV2的猪场6个（占28．7％）,混合感染主要集中在母猪和保育仔猪阶段。仅有3个猪场未检出PPV和PCV2病原,占14．3％。该结果说明PPV与PCV2及其混合感染在四川省流行广泛,对养殖业构成了较严重的危害。     

猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究

从全国7个省市1200多份可疑猪瘟病料中分离出9个猪瘟病毒（HCV）野毒株，编号分别为HCV－01－09。将9株野毒分别通过PK15细胞分别通过PK15细胞传6代，测其毒价，并提纯做电镜观察，结果表明：毒价范围在10^2-10^7TCID50，电镜观察均可清晰地见到直径为25－70nm，略呈圆形的病毒颗粒，具有较完整的囊膜和纤突结构。从9株野毒中选取5株经猪瘟阴性猪各传3－4代，测其毒力、病原性、致死性，结果表明：各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这5株野毒做免疫保护相关性试验，结果证明：攻毒后的疫苗接种猪100％保护，而攻毒对照猪100％死亡，且对照猪在攻毒1周后便出现猪瘟野毒感染，而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒，表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及1982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究，结果表明：猪瘟病毒可分2个基因组6个基因亚组，HCV－02、03、06、07等4个野毒株与国内的C株、石门强毒株、国外的C株、日本GPE株、ALD株、意大利Brescia株均属同一基困组，而HCV－08株及郑州株等2个野毒与法国的Alfor株同属另一个基因组。     

猪细小病毒NS基因原核表达与多克隆抗体制备

旨在制备抗猪细小病毒(PPV)非结构蛋白共有氨基酸的NS多肽多克隆抗体。根据GenBank(MK993540)公布的PPV基因组序列,克隆其非结构蛋白NS1、NS2共有基因序列(NS基因),并进行生物信息学分析。进而将NS基因克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-NS,转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,利用镍柱亲和层析技术纯化表达的重组多肽,用重组多肽免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,PPV杨凌株NS基因长258bp,编码86个氨基酸的多肽,是具有亲水性的非跨膜NS多肽,具有大量的B细胞线性表位。NS多肽在37℃、0.8mol/L IPTG条件下,诱导6h有大量的可溶性表达。免疫印迹试验结果显示,该多肽具有较好的抗原性。用纯化NS多肽免疫小鼠后获得鼠抗NS多肽的血清抗体效价为1∶12800。用制备的NS多克隆抗体检测纯化的NS重组多肽及真核表达的NS1蛋白,均能检测出相应特异性条带,为进一步研究NS蛋白在PPV致病过程中的作用奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染抑制猪瘟疫苗的免疫应答

对20日龄SPF猪和20日龄猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）血清阳性猪，人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北京分离株（BJ－4）后48h接种猪瘟疫苗，利用ELISA方法检测仔猪针对PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫，利用MTS法检测仔猪外周血单核细胞对有丝分裂原ConA的刺激反应。结果表明，不论是SPF仔猪还是带有PRRSV抗体的仔猪，在鼻内接种PRRSV后48h接种猪瘟疫苗，其对猪瘟疫苗的抗体反应显著低于对照组，对有丝分裂原ConA的刺激反应也下降。由此说明，PRRSV感染使仔猪对猪瘟疫苗的免疫应答受到抑制。     

猪细小病毒VP2的原核表达与多克隆抗体制备

克隆猪细小病毒(PPV)VP2基因全长1 740bp,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达与纯化,接种家兔制备多克隆抗体。用PCR方法扩增PPV VP2全长基因,扩增产物克隆至表达载体pET-32a并转化至E.coli BL21(DE3)感受态中。分别用不同诱导时间、IPTG浓度、温度诱导表达VP2重组蛋白,经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。对家兔进行3次免疫后,采集血清制备抗体。PCR扩增得到1 740bp的VP2基因片段;构建原核表达载体pET-32a-VP2,经37℃,IPTG浓度1.0mmol/L诱导表达4h可得分子质量大小约为82ku目的蛋白;间接ELISA检测抗体效价可达1∶12 800;Western blot证明所制备的抗体能够有效的应用于PPV VP2抗原的检测。本研究成功构建了表达PPV VP2基因的原核载体,获得了VP2蛋白,制备了兔抗多克隆抗体,为建立检测PPV VP2蛋白ELISA方法奠定了基础。     

猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型多重PCR检测方法的建立及应用

根据猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的基因序列,分别选取各自的保守区段设计引物,通过反应条件的优化,建立了检测PPV、PRV和PCV-2的多重PCR方法.用建立的方法对采自陕西省部分猪场的286份病料及血样进行检测,从对临床健康猪全血样品中PPV、PRV和PCV-2的检测结果看...     

检测猪细小病毒血清抗体乳胶凝集试验方法的建立及初步应用

将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖,待出现细胞病变后,反复冻融,收获病毒液,用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定,选择致敏乳胶的最佳条件,制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒,而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验（LAT）与血凝抑制试验检测了203份猪血清,其中血凝抑制抗体阳性为161份,阴性为42份,阳性率为79.31％;乳胶凝集抗体阳性为150份,阴性为53份,阳性率为73.89％,两种方法阳性符合率为93.16％,经统计学检验P＞0.05,两者差异不显著。结果表明,乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛,具有简便、准确的优点,在检测细小病毒（PPV）抗体上具有较好的应用前景。     

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

用PCV2 Cap蛋白单克隆抗体预包被酶标板,将杆状病毒表达系统表达的PCV2 Cap蛋白作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于猪圆环病毒2型抗体的检测.通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于圆环病毒2型疫苗的免疫效果检验.利用研制的试剂盒与IFA、商品化进口和国产同类试剂盒对178份猪血清进行平行检测,总符合率分别为96.63％、97.75％和84.27％,与其他几种常见猪病毒抗体阳性血清无交叉反应.试剂盒批内、批间变异系数分别为2.35％ ～4.06％和4.87％ ～ 6.54％,2～8℃保存15个月稳定,适合于对不同来源猪圆环病毒2型疫苗人工免疫猪血清抗体进行检测.     

猪瘟流行毒E2基因部分编码序列的分析与比较

利用PCT-PCR方法获得16个猪瘟流行毒株、5株弱毒疫苗株和外来的4株猪瘟E2基因部分编码序列的扩增片断，并对其进行测序，获得659bp含E2基因N段A、B、C、D四区域的编码序列。利用DNAstar软件对其中616bp的片段进行序列分析，并与Genebank中的Alfort、Brescia、HCLV、Shimen等毒株进行比较．结果20株病毒所测序列均为猪瘟E2基因序列，所有毒株碱基替换随机分布于整个序列．部分毒株出现碱基缺失现象。序列分析结果表明近期流行的毒株不仅与50年代流行的Shimen株、现用的疫苗株距离较远，而且流行毒株呈不同亚群方向演变。本研究所测的20株流行株E2基因N端6个与C端的2个半胱氨酸(Cys)均未发生变异．但其他位点的核甘酸变异与缺失．引起各区的抗原表位呈现不同程度的变异。     

以超滤技术浓缩猪细小病毒含毒细胞液的试验

在研制猪细小病毒灭活疫苗时,应用了超滤浓缩技术,提高了合毒细胞培养液中的抗原含量。为了保证浓缩的流量,减少对滤膜的污染,对含毒细胞培养液作了预处理一离心及微滤,以便除去细胞培养液中的细胞碎片、蛋白质等大分子物质及固形微粒。超滤时选用50000Da滤膜,在20psig压力下,经过5倍浓缩的PPV细胞培养液,血凝滴度提高2个滴度以上。病毒含量测定表明,TCID50／0．2mL由107左右升至109以上,以其配制疫苗,能显著地提高疫苗的免疫原性。超滤技术具有易于操作、高效、分离精度高、没有二次污染等优点,可以根据需要选择不同的浓缩浓度,对保证疫苗的质量具有重要作用。