鸡肠道波形蛋白免疫组织化学研究

采用免疫组织化学SABC-AP法探究波形蛋白在黄羽肉鸡肠道的分布规律。结果:免疫组织化学显示,波形蛋白在鸡小肠黏膜上皮、小肠腺细胞腔面、黏膜下神经丛和肌间神经丛均呈强阳性表达;在黏膜的固有膜呈阳性表达,肌间神经丛的血管壁周围呈强阳性表达;波形蛋白在鸡大肠黏膜上皮、大肠腺呈阳性表达,在固有膜、黏膜下神经丛和肌间神经丛均呈强阳性表达。波形蛋白是神经胶质细胞的标记物之一,其在鸡肠道的分布特征表明肠神经胶质细胞(EGCs)不仅对肠神经系统(ENS)的肠神经节细胞起支持、营养和保护作用,而且可能参与肠黏膜屏障、肠腺分泌、肠道物质的分泌与吸收、肠蠕动及血液的供应调节等诸多功能。     

鸡胸腺中血管活性肠肽的免疫组织化学观察

运用免疫组织化学超敏SP法对不同生长阶段鸡胸腺中血管活性肠肽(Vasoactive Intestinal Peptide，VIP)的表达特点进行了研究。结果显示：胸腺中VIP阳性反应主要分布于被膜及髓质，而皮质内反应较弱；随日龄增加，VIP在被膜和髓质内一直维持较强的表达；实质中VIP强阳性淋巴细胞数量随日龄逐渐增多，至42d开始减少。鸡胸腺中VIP阳性反应物质的广泛分布。提示胸腺是产生VIP的又一个重要部位，胸腺中的VIP参与鸡免疫器官的功能调节，它可作为一种信号分子介导神经内分泌系统和免疫系统之间的相互作用。     

鸡肠Remak神经显微形态学研究

肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一条神经节链。取鸡INR制备冰冻切片并将切片分别进行苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色。在光镜下观察INR内神经元的形态,统计神经元的数量,测量神经元的面积并用SPSS软件对数据进行分析。通过观察发现,不同肠段INR内神经元的形态存在差异。数量统计显示INR神经节内包含大量的神经元胞体,每只鸡的INR内神经元的总数平均为31821个,并且直肠段INR内的细胞数量最多,为27109个。空肠段INR内神经元的平均面积最大,达到478.46μm2,面积较大的神经元所占的比例也最高;而直肠段INR内单个神经元的平均面积最小,约为391.74μm2。可以推测不同段INR中神经细胞的形态、大小和数量具有一定差异,这种差异可能与其对胃肠道功能的调节有关。     

鸡包涵体肝炎免疫组织化学动态研究

本试验对１００ 只３ 日龄雏鸡人工感染Ⅷ型腺病毒建立鸡包涵体肝炎（ Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ ｈｏｐｙｔｉｔｉｓ Ｉ Ｂ Ｈ）模型,以免疫金银法进行免疫组织化学动态研究。结果表明,该病毒对雏鸡肝脏、胸腺、法氏囊、脾脏、肾脏、肠及胰腺等器官的上皮细胞以及淋巴细胞、血管内皮细胞、红细胞等均具有亲嗜性,主要定位于细胞核中,以肝脏、胸腺及法氏囊最为明显,揭示了感染鸡中枢 及外周免疫器官的细胞免疫和体液免疫功能呈现抑制的发病学基础。此外,接种后１２ ～４８ ｈ 及９～１１ ｄ,组织的胞核中两次表现胶体金颗粒多量存在,其形态为粗大颗粒状或微细颗粒两种,笔者认为是病毒在鸡体内两次复制高峰引起病毒血症的标志。     

鸡免疫器官中血管活性肠肽的分布特点

应用免疫组化超敏SP法对鸡不同生长阶段免疫器官中血管活性肠肽(VIP)的表达特点进行了研究,结果显示,胸腺中VIP阳性反应主要分布于被膜及髓质,而皮质内反应较弱;随日龄增加,VIP在被膜和髓质内一直维持较强的表达;实质中VIP强阳性淋巴细胞数量随日龄逐渐增多,至42 d开始减少.脾脏中VIP阳性反应主要出现于被膜及红髓,并在整个生长阶段维持较强的表达,红髓的脾索和脾窦间还有较多的巨噬细胞呈VIP强阳性反应;白髓中仅见动脉周围淋巴鞘中央动脉有VIP的表达,并随日龄的增加逐渐减弱.法氏囊中VIP的表达范围广泛,涉及黏膜、黏膜下层和肌层,尤以黏膜上皮细胞和法氏囊小结髓质的表达为典型;随着日龄增加,黏膜上皮细胞VIP表达逐渐减弱,囊小结髓质一直保持较强的VIP阳性着色,囊小结皮髓质交界处上皮细胞层内VIP强阳性细胞有逐渐增多的趋势.鸡免疫器官中VIP阳性反应物质的广泛分布,提示这3种器官是神经系统以外产生VIP的重要部位,法氏囊中的VIP可参与鸡免疫器官的功能调节,它可作为一种信号分子介导神经内分泌系统和免疫系统之间的相互作用.     

肠神经对鸡输卵管支配的逆行追踪法研究

应用HRP和CB—HRP逆行追踪支配鸡输卵管神经元在肠神经内的分布和形态特点，以探察鸡肠神经在体内的支配范围以及肠神经时生殖系统的可能调节作用。结果显示，肠神经内出现大量阳性神经元和神经纤维，这些神经元大多数为小型多极神经元，少数是双极神经元。阳性细胞主要位于肠神经节内，节间束也见个别分布。这就从形态上证实，肠神经支配并调节鸡的生殖活动。本研究还比较了HRP和CB—HRP2种示踪物在标记神经元时的敏感性和反应强度。     

鸡脾脏中血管活性肠肽的表达特点

运用免疫组织化学超敏SP法对不同生长阶段鸡脾脏中血管活性肠肽 (vasoactivein testinalpeptide ,VIP)的表达特点进行了研究 ,结果显示 :脾脏中VIP阳性反应主要出现于被膜及红髓 ,并在整个生长阶段维持较强的表达 ,红髓的脾索和脾窦间还有较多的巨噬细胞呈VIP强阳性反应 ;白髓中仅见动脉周围淋巴鞘中央动脉有VIP的表达 ,并随日龄的增加逐渐减弱。研究结果提示鸡脾脏是产生VIP的又一个重要部位 ,脾脏中的VIP可参与鸡免疫器官的功能调节 ,它可作为一种信号分子介导神经内分泌系统和免疫系统之间的相互作用     

痛风鸡免疫器官中血管活性肠肽的构筑

目的:研究血管活性肠肽(VIP)在痛风模型鸡免疫器官中的表达情况,从而探讨VIP在鸡痛风中的作用。方法:采用免疫组织化学(SABC)的方法,分别检测20只正常鸡和两组各20只由不同日粮所建立的痛风模型鸡的胸腺、脾脏、法氏囊中VIP的表达情况,并比较其差异。结果:高钙日粮组和高钙高蛋白日粮组模型鸡免疫器官中VIP的表达比正常组高(P<0.05),高钙日粮组与高钙高蛋白日粮组模型鸡免疫器官中VIP的表达无明显差异(P>0.05)。结论:高钙日粮组和高钙高蛋白日粮组模型鸡免疫器官中有较高VIP的表达,推测VIP作为一种信号肽介导了免疫系统和神经内分泌系统间的相互作用,并与鸡痛风的发生可能有密切关系。     

兔圆小囊及肠道组织中抗菌肽的免疫组织化学和免疫电镜细胞化学定位

采用免疫组织化学和免疫电镜细胞化学技术观察了兔圆小囊及其他肠道组织中产抗菌肽细胞的分布定位。免疫组织化学观察发现,产抗菌肽细胞在兔圆小囊的黏膜上皮、圆顶上皮以及淋巴组织的滤泡生发中心、圆顶区和帽区均有分布;在兔感染多杀性巴氏杆菌后,圆小囊及其他肠道组织中的抗菌肽免疫组织化学阳性细胞数量明显增多,阳性反应增强。免疫电镜细胞化学观察结果显示,除肠道黏膜上皮细胞、异嗜性白细胞、巨噬细胞中存在抗菌肽免疫组织化学阳性反应信号外,在淋巴细胞内也发现阳性反应信号,尤其是在圆小囊淋巴组织中的DNES细胞内发现抗菌肽免疫组织化学阳性反应信号。表明圆小囊的DNES细胞和淋巴细胞均可产生抗菌肽。     

固始鸡免疫器官内细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的动态表达

应用免疫组织化学技术和Leica 显微图像处理系统,对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在固始鸡免疫器官内的动态表达进行了研究。结果：Bax蛋白在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达,但表达量不同;Bax蛋白表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜、细胞质和细胞核;Bax蛋白表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同,呈散在或簇团状分布：脾脏内不同部位均有分布,主要在动脉周围淋巴鞘、红髓、淋巴小结边缘、边缘区,很少出现在淋巴小结内;胸腺内主要分布于胸腺小叶的皮质与髓质交界处,其次是胸腺小叶髓质,极少出现于皮质;法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴滤泡间的区域,在淋巴滤泡边缘的少量淋巴细胞也有Bax蛋白表达,淋巴滤泡内极少有阳性细胞。Bcl-2蛋白在固始鸡免疫器官内的表达与Bax相似,但表达量与Bax相比较少。以上结果表明,细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2参与了固始鸡免疫器官内淋巴细胞发育分化过程中的凋亡调控,对免疫器官的稳定发挥重要作用。     

不同禽流感疫苗和不同接种剂量免疫麻花鸡的免疫效力试验

对我国目前推广的5种不同禽流感疫苗进行了免疫效果的比对分析;对麻花鸡群以不同免疫剂量进行接种,比较分析了疫苗剂量对禽流感免疫效果的影响;对比结果表明,重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）、禽流感灭活疫苗（H5N2亚型,N28株）、禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1Re-1＋H9N2Re-2株）抗体水平高,效果稳定,这3种疫苗为乌鲁木齐市麻花鸡禽流感防控中的疫苗首选;不同免疫剂量的对比试验结果表明,最佳禽流感疫苗接种剂量为0.5ml。     

家兔消化道胃泌素细胞的免疫组织化学定位

为了研究家兔(Oryctolagus cunieulus Rabbits)消化道胃泌素(Gas)免疫活性细胞的分布及形态,试验采用免疫组织化学ABC(avidin-biotin-peroxidase complex,ABC)法。结果表明:Gas细胞在家兔消化道中除食管、结肠、盲肠外均有分布,其中以胃体数量最多,直肠次之,回肠最少,其形态多样,有锥体形、圆形、椭圆形和梭形等,以锥体形和椭圆形为主;Gas细胞大多分布于上皮细胞之间、腺泡上皮细胞之间及固有膜内,上述Gas细胞的形态特点与内分泌、外分泌功能有关,分布型与消化道各部位功能有关。     

1株鹑鸡肠球菌产ESBLs和AmpC酶的基因型鉴定

为检测1株临床分离的七彩鸟鹑鸡肠球菌的ESBLs和AmpC酶的基因型,探讨其耐药基因的进化机制;采用两倍稀释法测定此菌株对18种常用药物的敏感性,并用9对特异性引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鹑鸡肠球菌ESBLs和AmpC酶的基因型及基因亚型.结果表明,鹑鸡肠球菌为产ESBLs和AmpC酶菌,除对3代、4代头孢,碳青霉烯类和磷霉素体外敏感外,对其他常用药物均呈现耐药,具有多重耐药特性;该菌所产 ES-BLs的TEM序列与AJ847364(TEM-116)序列相比发生了2处碱基突变,即512T→A和695A→C,引起了相应氨基酸的突变171Ile→Lys、232Lys→Thr,是一种新的TEM亚型,GenBank注册号DQ849329;AmpC酶与序列EF078894(ACT-like型)有97%的同源性,GenBank登录号是DQ849330.这表明该株鹑鸡肠球菌ESBLs为一种新TEM亚型,来源于同时分离的鹑鸡克雷伯菌TEM型的ESBLs;ACT型AmpC酶的存在可能与七彩鸟鹑鸡接触过β-内酰胺类药物有关.     

免疫剂量和母源抗体对禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫效力的影响

利用表达 H 5亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素基因的重组鸡痘病毒 (r FPV- HA)以不同剂量免疫 1日龄 SPF鸡、有或无母源抗体 (FPV、AIV H5)的商品鸡 ,并于免疫后 2 1d利用同亚型 AIV通过肌肉注射进行致死性攻击 ,通过检测免疫后 HI抗体应答、比较攻毒后发病率和死亡率评价免疫剂量和母源抗体对 r FPV- HA免疫效力的影响。结果发现 ,免疫后 2 1d,15 %～ 2 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可检出 HI抗体 ,而含母源抗体商品鸡检测不到 HI抗体。利用H5亚型 AIV致死性攻击后 ,10 3～ 10 6 PFU的 r FPV- HA可保护 95 %～ 10 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡抵御强毒攻击 ,使之免于发病和死亡 ;而不同剂量 r FPV- HA接种的含母源抗体商品鸡有 80 %～ 90 %发病和死亡。结果表明 ,在较宽的免疫剂量范围内 ,r FPV- HA对 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可提供良好的保护 ,显示出一定的应用前景 ;母源抗体影响 r FPV- HA诱导的免疫应答 ,且提高免疫剂量亦不能克服其干扰作用 ,这提示在实际应用中需优化免疫程序 ,避免母源抗体干扰。     

鸡传染性支气管炎H120细胞活疫苗规模化生产的研究

通过近两年时间的试验,摸索出并掌握了利用转瓶培养鸡传支H120细胞弱毒的关键技术,利用转瓶机成功生产出鸡传支H120细胞弱毒活疫苗三批,依照<中华人民共和国兽用生物制品质量标准>,经物理性状、无菌、支原体、特异性、外源病毒及安全检验均合格,EID50平均值分别为6.93、6.71和6.82,免疫保护率均达87%以上.     

乳牛肾淀粉样变病超微结构和免疫组织化学的研究

对临床尸检一例乳牛肾淀粉样变病进行了组织与超微病理学和免疫组织化学的研究。结果提示其淀粉样蛋白为无分枝、平行或非平行排列的微丝,主要沉积在肾小球和小血管周围。在肾小球,系膜区沉积最为严重,其次为肾小球毛细血管基膜。生物素-亲和素免疫过氧化物酶(ABC)染色结果显示,抗淀粉样蛋白A(AA)反应阳性颗粒沉积于肾小球和肾的小血管壁上,其抗AA阳性反应提示本病为继发性淀粉样肾病。     

日粮中缺硒对鸡空肠肥大细胞组织化学和超微结构的影响

为探讨硒缺乏对鸡空肠中肥大细胞(MC)的形态学和超微结构的影响,将10只鸡随机分成低硒试验组(饲喂低硒日粮0.032 mg/kg)和正常对照组,在75日龄时断头处死立即取出空肠,进行甲苯胺蓝、长时间甲苯胺蓝、阿利新蓝-藏花红染色、阿利新蓝-高碘雪夫氏反应和醛品红-阿利新蓝5种染色并进行透射电镜观察.结果显示,采用不同染色方法所获得的MC数量、大小、形态、颜色及颗粒的黏多糖成分均不相同.电镜下,MC细胞胞浆内充盈大量的特征性颗粒,颗粒内容物呈均质状,电子密度高低不等,核圆形或椭圆形,胞质中可见高尔基复合体和较多的线粒体;试验组可见MC数量显著增加并与变性细胞紧密相邻,异染色质增多,核偏位或固缩,胞质稀疏,同时可见MC内颗粒内容物释放后的空隙或空泡.因此,组化染色提示肥大细胞存在不同亚型;试验组MC数量明显增加,这提示MC是重要的免疫细胞之一,在机体的免疫调节中发挥着重要的作用.     

免疫血管活性肠肽调节鸡产蛋和就巢的机理研究

旨在研究免疫血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)和抑制催乳索(Prolactin,PRL)分泌对鸡产蛋和就巢的影响机制.试验1:对18周龄未开产的泰和鸡,分别在试验d1、d28、d56和d84免疫含VIP羧基端15肽片段的VIP-BSA偶联蛋白,观察对产蛋和就巢的影响.试验2:利用刚开产的23周龄粤黄鸡,在试验d1、d23、d48、d73、d98免疫VIP串联四聚体重组蛋白,观察对产蛋和就巢的影响,并在第98天检测卵泡发育和下丘脑、垂体、F1～F3级LYF颗粒层和膜层相关基因的表达.试验1中免疫VIP组在开产后高峰期(d55～d61)的产蛋率显著低于对照组,但高峰后的(d89～d103)产蛋率显著高于对照组,同时免疫VIP组的就巢发生也要迟于对照组.试验2中,VIP免疫组的产蛋率在试验初高于对照组;在d33将光照从12 h延长至16 h后,2组的产蛋率均快速上升;产蛋高峰后,免疫组产蛋率快速下降并在dS0～d105显著低于对照组.免疫VIP重组蛋白也降低了就巢的发生.2组鸡在d98的大黄卵泡、小黄卵泡和大白卵泡的数量无显著差异.免疫VIP重组蛋白并不影响下丘脑Gn-RH-Ⅰ和VIP、垂体LHβ和FSHβ的mRNA水平,但显著降低了垂体PRL的表达,也显著降低了垂体和下丘脑PRLR的表达.在检测的F1～F3卵泡组织中,免疫VIP重组蛋白也显著降低了F1和F3颗粒层的PRLR mRNA水平,降低了F1～F3颗粒层和膜层的LHR表达量,但对P450scc和StAR的表达量没有影响.两试验结果表明,免疫VIP能够降低PRL的表达和分泌,从而抑制产蛋引发的就巢发生,但是免疫VIP在抑制PRL表达分泌后也会抑制卵泡发育和产蛋,这一机制可能是通过影响卵泡组织LHR的表达而实现的.     

鸡神经症状性疾病的诊治

1病毒侵害鸡马立克氏病的典型神经症状为头部歪斜,坐骨神经肿瘤引起单侧或双腿麻痹,侧卧或呈劈叉状。对所引进的新鸡进行马立克氏病疫苗免疫,并应注意疫苗的选择,免疫次数,时间、方法等。鸡新城疫由鸡新城疫病毒侵害脑组织引起。