发根农杆菌对栝楼的遗传转化

利用5种发根农杆菌1.2556、A4、LBA9402、R1000、R1601对栝楼组培苗茎段和叶片进行感染,诱导出毛状根,PCR检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已经整合到栝楼的基因组中.     

发根农杆菌Ri质粒T-DNA对杜仲的遗传转化研究

杜仲是中国特有的经济树种,杜仲毛状根能够合成与杜仲含量相当的次生代谢产物。本实验用发根农杆菌ATCC15834分别感染杜仲Eucommia ulmoides Oliv的子叶、叶片、叶柄、下胚轴和根5个营养器官,结果表明杜仲植物的5个营养器官均能单独诱导出大量的毛状根。经PCR检测,发根农杆菌ATCC15834Ri质粒的rolB基因已转入杜仲毛状根基因组中。说明用发根农杆菌诱导杜仲产生大量的毛状根的方法有效,为大规模用发根农杆菌Ri质粒转化到杜仲植物中提供了理论基础。     

发根农杆菌介导的花生遗传转化体系的建立

[目的]为花生的转基因研究和白芦藜醇的生物技术生产奠定基础。[方法]利用发根农杆菌R1601分别侵染花生的子叶、叶片和茎段,诱导毛状根;利用PCR技术检测毛状根。[结果]叶片和茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,但叶片诱导率较高,其诱导率达65.6%,更适合作为转化外植体。毛状根除菌后,能在MS培养基上自主生长。PCR扩增表明,T-DNA序列整合进花生的基因组中。[结论]建立了发根农杆菌介导的花生遗传转化体系。     

发根农杆菌转化三倍体毛白杨

分别用发根农杆菌30148,ATCC 15834和ZALF3种菌株感染三倍体毛白杨叶外植体,获得毛状根。建立三倍体毛白杨毛状根离体培养系统,在含不同激素的培养基上诱导毛状根再生植株。利用PCR方法分别对转化再生植株ro lC,ro lD,及m as基因进行了检测,表明R i质粒的T-DNA已整合进再生植株中。     

发根农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系的建立

[目的]建立新的橡胶树遗传转化体系,为利用基因工程技术研究橡胶树提供基础。[方法]利用发根农杆菌R1601、15834和1.2556 3个株系分别侵染橡胶树热研7-33-97的叶片和茎段,诱导毛状根,并利用PCR技术检测诱导得到的毛状根。[结果]在相同的条件下,仅橡胶树茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,其诱导率达36.6%;PCR结果表明,T-DNA序列已整合进橡胶树的基因组中。[结论]初步建立了发根农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系。     

怀地黄花药培养与再生植株体系的建立

以怀地黄花药为外植体,通过器官发生途径建立怀地黄再生植株体系.结果表明,在4℃条件下预处理3d有利于愈伤组织的诱导;愈伤组织诱导的最佳培养基为2.0 mg·L-1MS +2,4 -D +0.5 mg·L-16 -BA +2.0 mg·L-1KT;愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为10 mg·L-1MS +IAA +10 ...     

发根农杆菌介导的杜梨毛状根遗传转化方法

以杜梨(Pyrus betulaefolia)为研究材料,利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)开发了一种简单、快速、高效的杜梨毛状根遗传转化方法.将含有mCherry基因的表达载体pROK2导入发根农杆菌K599,侵染杜梨幼苗,通过注射烟草叶片、常规PCR及体视显微镜观察,检测转化效率.结...     

不同基因型怀地黄组织培养及植株再生研究

[目的]研究不同基因型怀地黄的组织培养及其植株再生。[方法]以4种不同基因型怀地黄为材料,研究了其在7种不同激素配比培养基上的愈伤组织诱导效应及其分化效果。[结果]7种不同浓度激素配比的培养基均能使4个不同基因型怀地黄产生愈伤组织,且愈伤组织均有不同程度的分化,但不同基因型怀地黄的愈伤组织诱导效应及其分化存在差异,其中武陟6号的愈伤组织诱导及其分化效果较好。[结论]为进一步研究怀地黄的组织培养提供了依据。     

发根农杆菌转化茶树的研究

以3个品种茶树的不同部位、器官为材料,探讨发根农杆菌转化茶树及毛状根增殖的条件.感染1025菌种的大红品种茎段,在添加IBA 0.4mg/L的1/2MS培养基上诱导出了毛状根.茶树毛状根细如头发,着生稀疏长根毛,具有激素自主性、分枝多、生长快等特点.经正交试验,将1/2MS培养基的KNO3,NH4NO3质量浓度降至MS培养基的1/8时的培养基,是毛状根伸长、分枝较好的基本培养基.添加IBA 0.2mg/L的培养基,毛状根的伸长、分枝优于添加IBA 0.1mg/L的培养基,但在毛状根上出现少量愈伤组织.     

发根农杆菌介导不同基因型大豆转化效率的筛选

基因型是影响发根农杆菌转化大豆的主要因素之一,为筛选转化效率高的大豆基因型,利用不同基因型大豆的下胚轴接种发根农杆菌K599(含GUS基因),待长出毛状根后,根据不同基因型大豆发根诱导率和发根数的差异,选择适宜大豆基因型进行GUS基因的组织化学染色和RT-PCR分析。结果表明,34个大豆基因型发根诱导率和发根数有很大差异,选择发根诱导率大于60%以及发根数大于1.6条的20个大豆基因型毛状根进行GUS基因组织化学染色,其中Y091、Z184、P108、L010等4个大豆基因型的GUS基因转化效率较高,分别为96.2%、91.7%、87.5%、86.4%;进一步对以上4个大豆基因型毛状根进行RT-PCR分析,结果表明,GUS基因均得到了正确转录。表明大豆基因型Y091、Z184、P108、L010是发根农杆菌转化大豆较为理想的受体材料。     

怀地黄试管苗的快繁体系研究

[目的]建立怀地黄试管苗的快繁体系。[方法]分别进行了NAA、6-BA和KT对茎尖培养以及NAA、6-BA试管苗快速繁殖的试验。[结果]中低浓度的NAA和6-BA可以在一定程度上促进怀地黄试管苗的快速繁殖,而高浓度的NAA和6-BA则会抑制怀地黄试管苗的快速繁殖;优选出的怀地黄试管苗的快速繁殖的最佳培养基为MS+0.002 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA。[结论]试验优选出了怀地黄试管苗的快速繁殖的最佳培养基,为怀地黄的开发利用提供了理论依据。     

怀地黄脱毒试管苗生根移栽技术的研究

怀地黄为传统大宗中药材,为探究其脱毒试管苗生根移栽的最佳条件,提高移栽成活率,以怀地黄脱毒试管苗85-5为材料,探索了不同因子对地黄试管苗管内和管外生根的影响以及适宜于试管苗移栽的基质配比。结果表明:管内生根最适的PP333质量浓度为0.10mg/L,此时试管苗的根数达到28条,株高为4.0cm;接种密度为6个/瓶时,株高、叶片数、根数、根长都达到了较为理想的状态,根数达38条,株高为3.3cm;接种部位为顶芽时根数较多,达到38条,株高达到3.5cm,与侧芽相比有显著性差异;管外生根NAA生根效果明显优于IBA,2种激素最适浓度和处理时间分别为:NAA 50mg/L处理60min,苗存活率100%,生根率90%;IBA 50mg/L处理15min,苗的存活率95%,生根率85%;移栽基质的最适质量比例为草炭土∶蛭石=1∶2。     

怀地黄基因片段及其中转座酶基因的克隆与序列分析

根据已知裂叶牵牛花PNZIP启动子碱基序列的相关信息设计引物,采用PCR方法,从怀地黄基因组中扩增出5个基因片段,回收和克隆出其中一个1 096bp的基因片段。经过NCBI对比分析,发现它是一个类似转座子的相关蛋白基因序列,含有一个完整的开放阅读框,大小为450bp,编码由150个氨基酸组成的转座酶。然后,基于该开放阅读框的碱基序列,设计另一对引物,用PCR方法,从中扩增出该完整开放阅读框的序列片段。     

怀地黄液泡质子泵焦磷酸水解酶基因的克隆与生物信息学分析

为了克隆地黄功能基因,根据NCBI GenBank核酸数据库中5种已知植物生长素诱导的器官膨大基因(ARGOS)碱基序列的保守区,利用CLUSTAL 2.1和DNAMAN 4.0软件设计简并引物,采用RT-PCR技术扩增出一个cDNA片段,测序表明,获得基因cDNA片段序列长度为495bp。经过NCBI数据库BLAST分析,发现它与莲花、蓖麻、烟草、苜蓿、葡萄、碧桃、灰绿藜7种植物的液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因同源性很高,在83%～86%,因此获得的基因是地黄液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因。     

肥力水平对怀地黄脱毒苗生长发育和生理特性的影响

研究了不同肥力水平对怀地黄脱毒苗生长发育和生理特性的影响。结果表明:随着肥力水平的增加,怀地黄脱毒苗的株高、冠幅、功能叶面积和叶片数呈先升高后降低的变化趋势,但变化较小,差异大多未达到显著水平。8月份,氮磷钾复合肥1 125kg/hm2处理的株高和叶片数最大(35.29cm、26.62片);1 687.5kg/hm2处理的功能叶面积最大(410.32cm2);9月份,1 687.5kg/hm2处理的冠幅最大(60.52cm)。叶绿素总含量、净光合速率和蒸腾速率均随着肥力水平的增加呈先上升后下降的趋势,1 687.5kg/hm2处理达到最大值,分别为2.39mg/g、26.30μmol/(m2.s)、6.55mmol/(m2.s);叶片的过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性随着肥力水平的增加而增加。综合考虑,氮磷钾复合肥1 687.5kg/hm2较适宜脱毒怀地黄苗的生长发育。     

怀地黄有机生产

通过对怀地黄生产现状、有机生产等研究的分析,提出了推广怀地黄有机生产的技术措施,以促进怀地黄生产向有机化、商品化、标准化、产业化方向发展。     

怀地黄脱毒试管苗培养条件的优化

研究了怀地黄脱毒试管苗在不同pH值、不同光照强度和不同温度下形态指标的差异,以寻求怀地黄脱毒试管苗的最适培养条件。结果表明:适合培养怀地黄脱毒试管苗的pH值在5.8~6.2,该pH值范围内,试管苗生长较健壮,株高和繁殖系数最大,分别为6.66 cm和4.8。最适合培养怀地黄脱毒试管苗的光照强度为2 500 lx,此光照强度下,试管苗生长较健壮,叶色浓绿,株高和繁殖系数分别为5.2 cm和4.6。最适合培养怀地黄脱毒试管苗的环境温度值为30℃,该温度下试管苗生长较健壮,株高和繁殖系数最高,分别为5.8 cm和4.8。因此,适合怀地黄脱毒试管苗生长的pH值为5.8~6.2、光照强度为2 500 lx、温度为30℃。     

怀地黄无害化施肥

针对怀地黄施肥中存在的问题,对道地药材怀地黄无害化施肥进行研究,提出了怀地黄无害化施肥的途径和方法,为实现怀地黄生产的无害化、标准化、产业化、规范化、现代化奠定基础。     

怀地黄6个主流品种产量相关性状及其相关分析

以6个怀地黄主流品种为材料,用测量法、观察法、称量法、紫外分光光度法和SPSS软件统计分析了单株鲜重产量和鲜重产量的相关性状及其相关性。结果表明,单株鲜重产量与叶绿素a含量、花序高度呈显著正相关,而与蒴果长度呈显著负相关,和花冠长度/宽度的比值呈极显著正相关。鲜重产量与块根长度/直径的比值呈显著负相关,而与块根直径、块根长度呈显著正相关。鲜重产量与蒴果长度之间有较强的负相关性。     

不同怀地黄品种在地膜覆盖栽培下产量和品质的研究

以4个怀地黄主栽品种为材料,采用地膜覆盖密植栽培技术,用测量法、观察法、称量法、成分分析法,研究了4个品种单株产量和每公顷产量及其品质的差异.试验结果表明,地膜覆盖种植怀地黄后,4个怀地黄品种产量和品质都有差异,85-5产量最高,为95 038.95 kg·hm-2;北京1号梓醇最高,为0.14%;锌/铜北京3号最高,为110/1;还原糖含量生津最高,为6.742 7%;总糖含量北京1号最高,为98%.