应用ELISA法诊断非典型猪瘟的报告

近年来,猪瘟的流行特征发生了重要变化,出现了以非典型、隐性感染为主的流行趋势,致使猪瘟的临床诊断更为困难.酶联免疫吸附试验(ELISA)是快速检测猪瘟的有效方法.本试验通过应用ELISA法检测非典型猪瘟病例,摸索出诊断非典型猪瘟的可靠方法.发现非典型猪瘟——流产型猪瘟病例,其血清中不含抗病毒抗体,因此诊断本病必须通过检测病毒的方法.     

应用ELISA法诊断非典型猪瘟的报告

ELISA法是一种快速而准确的诊断方法,本试验通过应用ELISA法检测非典型猪瘟病例,摸索出诊断非典型猪瘟的可靠方法。发现非典型猪瘟—流产型猪瘟病例,其血清中不含抗病毒抗体,因此,诊断本病必须通过检测病毒的方法。同时采用两种不同温度对抗原进行包被,摸索出包被抗原的适宜条件。     

猪瘟病毒RT-PCR核酸检测与ELISA抗原检测试验应用研究

本试验根据NCBI公布的猪瘟病毒石门毒株E2基因序列,设计、合成了1对检测猪瘟病毒E2基因的PCR引物。以120份疑似猪瘟病料为试验材料,使用RT-PCR核酸检测与ELISA抗原检测2种方法,分别用这2种方法检测疑似病料,并且比较这2种方法在猪瘟病料检测中的实际差别。通过猪瘟病毒RT-PCR核酸检测结果及ELISA抗原检测结果相互印证,为云南猪瘟的诊断及防制提供了技术支持。     

ELISA方法在猪瘟抗原抗体检测上的应用

本文总结了猪瘟抗原检测,包括双抗体夹心ELISA、竞争ELISA、抗原捕获ELISA和NASBAELISA,以及猪瘟抗体检测方法,包括间接ELISA、竞争ELISA、液相阻断ELISA和斑点ELISA方面的研究进展。     

应用ELISA试验检测猪瘟免疫抗体

猪瘟在我省流行比较严重，曾造成较大的经济损失，从1988年后全省采取每年春秋两防，并随时补针的免疫措施，使我省的猪瘟疫情得到了全面的控制。但是，我省由外地引入仔猪的猪瘟病例时有发生。为了掌握我省猪瘟免疫状况，海南省动物疫病诊断中心于2005年7月应用猪瘟ELISA试验方法在省内6个市县进行了猪瘟免疫抗体检测。     

ELISA和胶体金法在猪瘟病毒检测中的应用

为探讨胶体金检测技术和ELISA在猪瘟病毒检测中的应用,通过对西藏林芝地区某县采集的92个疑似猪瘟样品进行免疫胶体金免疫层析法与ELISA法检测猪瘟抗体和抗原,比较两法检测结果的符合率。结果表明,猪瘟胶体金法抗原和抗体检测阳性符合率为100%,ELISA法检测的阳性符合率为95%以上。猪瘟的胶体金法抗原和抗体检测阳性符合率较高,同时该结果与ELISA的抗原和抗体检测阳性符合率高,说明使用猪瘟疫苗进行免疫在西藏林芝地区某县可以取得95%以上的免疫效果。这两种方法操作方便、快速,适合于临床快速检测和疫病普查中高通量样品的筛查。     

规模化猪场猪瘟免疫程序的研究与探讨

以猪瘟纯化病毒抗原和酶标葡萄球菌A蛋白探索建立了检测猪瘟病毒抗体的PPA－ELISA方法,经检验本法有较高的特异性和敏感性,通过ELISA检测,证实了猪瘟母源抗体的半衰期大致为2周,仔猪超前免疫有其科学性,对规模化猪场猪瘟免疫程序进行了研究和探讨,同时未试验也证明ELISA与IHA检测结果具较高相关性。     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要。目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量PCR(qPCR)、多重PCR(mPCR)、微滴数字PCR(ddPCR)、巢氏PCR(nested-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、交叉引物扩增技术(CPA)、原位杂交技术(ISH)以及生物传感器技术等,抗原检测常用荧光抗体试验(FAT)、抗原ELISA、侧向流动免疫色谱分析(LFA)等,而抗体检测主要通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFA)、胶体金快速免疫层析法(GICA)、免疫印迹法(IBT)等方法。每种诊断技术都有其特点,从而为不同情况下的A SFV诊断提供了多种选择。未来,其他技术如CRISPR等与上述技术的结合应用,以及不同诊断技术的联合应用,将成为非洲猪瘟诊断技术发展的趋势。     

诊断猪瘟常用的方法

猪瘟是一种流行广泛,发病率和死亡率均高的传染病,严重危害养猪业的健康发展。及时、准确地对猪瘟进行鉴别诊断显得尤为必要。本文主要从临床诊断、抗原及抗体检测的角度对常见的诊断方法,如病毒的分离与鉴定、猪体回归感染试验、家兔级别交互免疫试验、ELISA、FAT、IHA、中和试验、免疫酶测定技术或酶标记抗体诊断法做了简明的阐述,为猪瘟的诊断提供参考。     

间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用

间接ELISA以其灵敏、特异、简单、快速、稳定、高通量及易于操作等优点,在猪瘟免疫猪群抗体水平监测、猪瘟的快速诊断与流行病学调查中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就间接ELISA方法及其在猪瘟诊断上的应用概况做一综述,以期为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

抗原捕获ELISA对猪瘟的诊断效果

应用抗原捕获ELISA方法分别对现行猪瘟疫苗毒及接种疫苗后产生定型热的兔脾、不同地区可疑猪瘟组织样品进行检测。结果表明，ELISA方法对猪瘟强毒组织样品的检测效果良好，但对弱毒的检测并不敏感，因而可用于野毒感染鉴别。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

猪瘟的免疫血清学检测技术

本文综述了血清中和试验、猪瘟间接血凝试验、正向间接血凝试验、荧光抗体技术、免疫酶测定技术、间接ELISA、夹心-ELISA、DOT-ELISA、PPA-ELISA、C-ELISA、抗原捕获ELISA等在猪瘟血清学检测上的应用情况,并对其优、缺点作了浅析.     

猪瘟病毒荧光RT-PCR快速检测方法的建立

以猪瘟病毒5＇端非编码区为靶核酸序列设计引物和探针，建立了一步法荧光RT-PCR检测猪瘟病毒。荧光RT-PCR仅检测出猪瘟C株、T株，未能检测出牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、猪呼吸系统冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、PK-15细胞和牛睾丸原代细胞；对猪瘟病毒T株的扩增反应产物进行了测序分析，与预期序列相符。荧光RT-PCR的检测极限可达到1 TCID50／mL，整个试验流程只需2h。采用荧光RT-PCR和抗原捕获ELISA同时检测临床病料、猪副产品共207份样本，两种方法的检出率分别为17．4％和13．5％，两者符合率为95．7％（198／207）；荧光RT-PCR的检出率高于ELISA，两者差异显著。结果表明，建立的荧光RT-PCR可用于猪产品、临床病料中猪瘟病毒的快速检测。     

近阶段河北地区猪场猪瘟的流行特点——由温和趋向典型

很长时间以来，各地区猪场温和型猪瘟的报道不断，纵观这些“温和型”报道，总还是有些猪瘟的影子，还可以从中发现一些猪瘟的诊断线索。而从近期我地区猪场猪瘟的流行情况看，发病时的表现已不再那么温和了，甚至可以按教科书中提到的诊断要点做出明确的诊断，从临诊表现，尸检病理，血清学、病原检测均能明确说明猪场发生了猪瘟。但是，这些猪瘟病例的出现事前却没有什么临诊征兆，进一步的病原学检测表明：健康猪群中携带有猪瘟抗原。跟踪屠宰时的病理变化发现，出现疑似猪瘟病变的个体超过50％．而这些猪从出生直到屠宰并没有表现出猪瘟的临诊表现．感觉上长势良好。     

不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响

为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35 kD、42 kD、16 kD和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用BandScan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检测包被用原料纯度的要求。将上述4种蛋白作为包被抗原进行ELISA,以10份企业阳性质控品血清和10份企业阴性质控品血清为检验指标比较不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响。结果以E2蛋白为原料的包被板检测质控血清时,灵敏度和特异性均达到80%以上,能够满足猪瘟病毒抗体ELISA检测的要求,故选择E2蛋白作为包被抗原并进行相关检测试剂的研制。用研制的试剂与国际知名度高、产品质量好的美国IDEXX同类试剂对432份临床猪血清进行符合性检测,结果与美国IDEXX试剂的阳性符合率为95.53%,阴性符合率为86.56%,总符合率为91.67%,两种试剂检测结果具有较高的一致性。试验表明,用E2蛋白为包被抗原对猪瘟病毒抗体进行ELISA检测的效果最好,制备的检测试剂可用于临床猪瘟病毒血清抗体的检测,为今后猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。     

非典型性猪瘟的诊断与防制

猪瘟又名猪霍乱,是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、高度接触性传染病.本病根据其临床症状可划分为典型性猪瘟和非典型性猪瘟.由于非典型性猪瘟的临床症状及其病理变化不及典型性猪瘟明显,导致对本病的临床诊断越来越困难.目前,本病的诊断主要以实验室诊断为主.标准的实验室诊断程序是防控非典型性猪瘟的重要手段之一.实验室诊断方法主要包括病毒及病毒抗原的检测和血清学检测两个方面.     

猪瘟病毒研究进展

本文对猪瘟病毒已经定位5种结构和非结构蛋白以及猪瘟病毒的抗原检测、感染性检测、基因组检测、抗体检测技术进展进行了较为系统的综述,以期望最终寻找出彻底控制猪瘟的办法。     

ELISA间接法用于猪瘟免疫监测研究

本文介绍以猪瘟兔化弱毒犊睾细胞苗为材料提取猪瘟病毒抗原,以羊抗猪IgG—HRP结合物为免疫试剂,建立快速ELISA检测猪瘟抗体的方法,同时用血清中和试验进行比较,和ELISA抑制试验,证明该法特异,敏感,快速,准确,是进行猪瘟抗体监测的好方法。     

一例猪瘟和猪伪狂犬病的鉴别诊断

主要介绍了在具有相似临床症状和解剖病变情况下,通过实验室血清学ELISA方法进行猪瘟病毒抗体、抗原和猪伪狂犬病毒gE抗体、gB抗体的检测。根据检测结果,综合分析,得出结论,达到鉴别诊断猪瘟和猪伪狂犬病的目的。