免疫微球反向凝集试验检测亲城疫病毒抗原的研究

以苯乙烯为单体，合成带有功能基的羧化聚苯乙烯微球作栽体，通过化学交联剂碳化二亚胺反应把纯化的抗体联接到微球载体上，制备成新城疫免疫微示诊断血清。对41例人工发病鸡的检测。40／41被栓出，符合率为97.5％，具有较高的敏感性、特异性和稳定性，且方法简单易行，快速准确，适用于现场检疫。     

丝素蛋白缓释微球的研究进展

微球是以高分子材料为载体包裹或吸附药物而制成的微小球状实体,粒径范围一般为1～500μm。丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然蛋白质,具有良好的生物相容性、可降解性和理化性能,被广泛应用于手术缝合线、人工皮肤、组织工程材料、细胞培养基、药物缓释载体等。以丝素蛋白为原料制备的丝素微球,具有比表面积大、可生物降解、生物相容性好等优点,因此被广泛地研究。本文介绍了丝素蛋白缓释微球的研究现状,并对丝素微球的发展前景做出了展望。     

自组装方法制备丝素微球及其结构与性能表征

为了简化丝素微球的制备方法及保证丝素微球作为药物缓释载体的安全性与结构稳定性,以丝素蛋白为原材料,采用自组装方法并调节丝素蛋白溶液浓度、冷冻温度、异丙醇添加量等条件,制备粒径在0.4~1.3μm之间的丝素微球。扫描电子显微镜(SEM)下观察制备的丝素微球呈规则的球状结构,球面光滑,粒径分布较为均匀;采用红外光谱仪(FT-IR)和热重分析仪(DTG)测试自组装后丝素微球的分子构象已发生转化,β-折叠结构含量明显增加,并具有较好的热稳定性。研究结果表明,丝素蛋白溶液浓度、冷冻温度、异丙醇添加量对丝素微球的形态结构有影响,可以通过自组装方法制备出粒径可控,结构和性能稳定的丝素微球,并有望开发为药物缓释载体。     

新型凝集技术快速检测产肠毒素性大肠杆菌菌毛的研究

为建立以彩色二氧化硅微球(CSN)为载体,快速检测产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)菌毛K88ab、K99、987p和F41的新型凝集技术,本研究采用反相微乳液法制备二氧化硅微球,将其与菌毛单因子血清偶联制成免疫彩色二氧化硅微球(ICSN),通过优化反应条件建立了快速检测ETEC菌毛的方法。特异性试验结果显示,ICSN只与携带其对应菌毛的菌株发生反应,与携带其它菌毛的菌株无交叉反应;敏感性试验结果显示菌液的最小检出浓度为1.0×10~6cfu/m L~5.1×10~6cfu/m L;稳定性试验显示4℃保存30 d,ICSN特异性、敏感性无明显变化;双盲样品检测准确率为100%。本研究有助于ETEC菌毛的快速检测和幼畜大肠杆菌性腹泻的诊断。     

多肽、蛋白质药物的微球缓释/控释系统

近年来多肽和蛋白质类药物的缓释或控释给药系统发展很快,尤其倾向于使用以生物可降解聚合物(biodegradable polymer)制成的毫微球剂、微球剂为载体来制备长效注射剂。本文综述了近年来多肽、蛋白质药物微球给药系统概况,生物降解型微球的制备方法,释药理论,各种多肽、蛋白质药物的进展和研究中存在的问题。     

生长调控因子与GHRP-6微球的制备及对水貂生长的影响

以乳酸-乙醇酸共聚物为载体,利用复乳-液中蒸发法制备pcDNA3-GRF微球、pIRES-HBs/AgSSM微球和GHRP-6微球.将空微球、pcDNA3-GRF微球(1 mg/kg),pIRES-HBs/AgSSM微球(1 mg/kg)和GHRP-6微球(1mg/kg)分别肌肉注射至水貂骨骼肌.120 d后,3个试验组水貂体长均高于空微球组(P<0.01);采用RIA法测定各组水貂血清IGF-Ⅰ浓度,3个试验组水貂血清IGF-Ⅰ浓度均比空微球组高,但pcDNA3-GRF微球组血清IGF-Ⅰ浓度显著高于对照组(P<0.05).结果表明:pcDNA3-GRF乳酸乙醇酸共聚物微球有明显的促水貂生长作用.     

伊维菌素 酸微球的研制及其体外释药试验

以生物可降解材料聚乳酸为载体,用乳化溶剂挥发法制备含伊维菌素的聚乳酸微球,采用Ｌ１８（３＾７）正交设计,以微球粒径分布为主要优选指标,筛选出最佳制备条件。     

常温下制备豌豆淀粉微球的方法及对亚甲基蓝的吸附性能研究

以普通豌豆淀粉为原料,在常温下利用W\O乳化方法制备交联淀粉微球(CSM)为吸附载体。研究了制备豌豆淀粉微球的最优制备工艺条件。利用红外(FT-IR)、X射线衍射仪(XRD)、扫描电镜(SEM)对微球进行表征。结果表明当淀粉溶液浓度为7%,搅拌速度为500 rpm,交联剂聚乙二醇二缩水甘油醚用量为8%,水油相比1∶6时,制备出的淀粉微球成球率最高,粒径均一,大小约为150μm。以亚甲蓝为载药模型,吸附实验表明淀粉微球对亚甲基蓝的吸附行为符合Langmiur方程。表明该淀粉微球在吸附药物等领域有广阔的应用前景。     

贝尼尔聚乳酸微球的制备及体外药物释放

以生物可降解材料聚乳酸（PLA）为载体,用溶剂挥发法的原理制备含贝尼尔（Diminazene Acetrras）的聚乳酸微球。制得的微球平均粒径为（74.82±3.78）μm;贝尼尔含量为（35.53±1.6233）％;微球的收得率为（70.86±4.414）％,贝尼尔的利用率为（50.26±2.1535）％;平均回收率为99.751±1.0917;利用转蓝法研究了微球的体外释药规律,贝尼尔原料药达峰时间为2h,贝尼尔聚乳酸微球的累积释放率在12h时为46.67％,微球无明显突释现象,可缓慢地释药。     

胶乳凝集抑制试验快速鉴定肉种类研究

以羧化聚苯乙烯胶乳作载体,将动物血清分别共价交联到载体微球表面,制成免疫微球。将此微球同相应抗血清配对,进行胶乳凝集抑制试验以鉴定牛肉、马肉、羊肉、狗肉和猪肉。通过对162份牛肉、43份马肉、100份猪肉、34份羊肉、30份狗肉、10份骡肉、4份驴肉和7份山羊肉的鉴定,制备的5种胶乳试剂敏感性均为100％。除马肉胶乳试剂和羊肉胶乳试剂有种属内交叉反应外,其它胶乳试剂特异性为100％。实验具有良好的重复性,试剂稳定性强,易于保存。5分钟内出结果,操作简便,适于基层单位应用。     

恩诺沙星淀粉微球的制备及缓释性能的研究

为了优选恩诺沙星淀粉微球的最佳制备工艺,试验将反相乳液聚合法与包埋载药法结合起来,以可溶性淀粉为载体、环氧氯丙烷为交联剂,制备恩诺沙星淀粉微球;以载药量和包封率为指标,通过L9(34)正交试验对制备工艺进行优化,采用扫描电镜观察载药微球的粒径大小及形态。结果表明:最佳工艺条件为淀粉4 g、恩诺沙星0.04 g、交联剂1.0 g、乳化剂0.8 g、反应时间2 h;按照此优化工艺参数制得的载药微球的总载药量为2.53%、包封率为89.72%;恩诺沙星淀粉微球大小较均匀,形态圆整,分散性较好,粒径为60μm左右;在最初2.5小时时释药量约为43.12%,至第8小时时释药量达80.69%,之后逐步释放,到第10小时时累积释药量占总药量的82.51%。说明此制备工艺可行,所制得的恩诺沙星淀粉微球具有一定的缓释效果。     

恩诺沙星肺靶向微球的制备

以天然可生物降解的明胶为载体材料,液体石蜡为油相,Span80为乳化剂,采用正交试验优化空白明胶微球的乳化法制备工艺,并在此基础上制备了恩诺沙星明胶微球。结果显示,含药微球平均粒径为12.35μm,粒径7～30μm的微球占总数的92.3%,符合肺靶向的要求。恩诺沙星明胶微球载药量为20.67%、包封率为43.62%,动态透析法研究体外释放特性,符合Higuchi规律,释药t1/2比原药延长了约6倍,表明有明显的缓释功能。在37℃、相对湿度值（RH）75%考察3月,几乎无变化。兔体内分布试验表明具有明显的肺靶向性,肺中药代动力学行为符合三室开放模型。     

小鼠对温和气单胞菌口服缓释微球疫苗的免疫应答

采用中华鳖温和气单胞菌(Aeromonas sobria,As)Z-1株灭活全菌液,以生物降解性高分子材料为载体,制成微球疫苗,口服免疫ICR小鼠,测定了血清中凝集抗体效价、血液中单核-巨噬细胞的吞噬活性以及对活菌攻击的免疫保护力.结果显示小鼠微球疫苗口服免疫后第4周,血清中凝集抗体效价和血液中单核-巨噬细胞的吞噬指数均可达到与灭活菌液注射组相当的水平(P＞0.05),明显高于灭活菌液口服组(P＜0.01);免疫后第7～12周,微球疫苗口服组血清凝集抗体效价显著高于灭活菌液注射组(P＜0.05);微球疫苗口服组和灭活菌液注射组的免疫保护力均为87.5%,而灭活菌液口服组不能提供有效的保护,与对照组死亡率相同(100%).结论认为,中华鳖气单胞菌口服微球疫苗具有缓释作用;以可生物降解的微球作为中华鳖气单胞菌口服疫苗的载体系统具有潜在的优势.     

PCI-Ghrelin-28aa质粒微球对小鼠的促生长效应

以乳酸-乙醇酸共聚物为载体，采用复乳-液中蒸发法制备PCI-Ghrelin-28aa真核表达质粒微球，微球大小与文献报道相符，平均粒径分布在2~3 μm间，测得的包封率为99.27%，载药量6.8 μg/mg，回收率65.7%；将质粒微球肌肉注射小鼠，并记录25 d里小鼠的体重变化情况；体重统计结果表明，25 d时微球包裹质粒组累积增重比裸质粒组、生理盐水组分别高14.3%、27.9%(P<0.05)。结论认为，载PCI Ghrelin 28aa质粒微球具有缓释作用，并有增强质粒吸收及表达的趋势。     

羧化胶乳凝集抑制试验快速鉴别牛肉和马肉的研究

以羧化聚苯乙烯胶乳作为载体,将牛血清和马血清分别共价交联到载体微球的表面,制成免疫微球.将此免疫微球同相应的抗血清配对,进行胶乳凝集抑制试验以鉴别牛肉和马肉.通过对265头份牛肉、242头份马肉、100头份猪肉、60头份羊肉、30头份狗肉、13头份骡肉和4头份驴肉鉴别,牛肉胶乳试剂和马肉胶乳试剂的敏感性均为100%,牛肉胶乳试剂的特异性为100%,马肉胶乳试剂同骡肉和驴肉呈完全交叉反应.实验具有良好的重复性和稳定性,试剂易于保存,本试验可在5min内报告结果,操作简便,适于基层动检部门应用.     

PAPS免疫微球的制备及其在寄生虫病诊断中的应用

我们研制成功一种新型的PAPS载体微球(Polyaldehyde,Polystyrone),为国内外首创。PAPS微球上的活性基团在两年之内未脱落,保存两年的PAPS和配基交联效果与新制备的一样。我们应用这种新型的PAPS载体微球与伊氏锥虫抗原、日本血吸虫虫卵抗原、弓形体的腹水S_1抗原等配基交联所制备的快速免疫诊断试剂具有特异性强,敏感性高、重复性好的特点,而且较稳定,一年内均有效。制备的诊断试剂可用血纸代替血清进行试验。一份血样本可作几种寄生虫病的诊断试验。本方法非常灵敏、快速、简便、可节省许多经费开支,是一项富有生命力的新技术。     

Vero细胞生物反应器微载体悬浮培养工艺的建立

为了实现非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)在生物反应器中的大规模生产,并使其可在以Vero细胞为细胞基质的病毒疫苗生产中应用,试验采用控制变量法对Vero细胞微载体悬浮培养相关参数进行逐一摸索研究。结果表明:在3~5 g微载体、1 L培养体系中,使用DMEM培养基、血清浓度为8%~10%、初始接种密度为30~50个/球,采用灌流式培养方式可使细胞达到最佳状态。说明成功建立了Vero细胞生物反应器的微载体悬浮培养工艺。     

以免疫纳米微球为凝集原的犬细小病毒2型抗体凝集检测方法的建立

为建立以红色聚苯乙烯纳米微球为载体的犬细小病毒(CPV)抗体检测的间接凝集方法,本研究表达纯化了CPV-2VP2截短的重组蛋白rsVP2,并以rsVP2为致敏原与纳米微球偶联制备了免疫彩色纳米微球;通过对反应条件的优化,建立了一种快速检测CPV-2抗体的间接凝集方法。特异性试验结果显示,致敏微球仅与CPV-2阳性血清发生凝集反应,不与犬瘟热病毒、狂犬病病毒和犬腺病毒的阳性血清发生凝聚反应,特异性强;该凝集方法检测血清中和抗体的最低效价为1∶256;同一批次制备的3份致敏微球、3个不同批次制备的致敏微球以及4℃保存90d的致敏微球与CPV-2阳性血清的凝集反应特异性一致,凝集程度无明显差异,重复性稳定性均较好。该间接凝集检测方法对40份血清样品的检测结果与ImmunoComb■ Canine VacciCheck试剂盒(Dot-ELISA)检测结果的阳性符合率为97%。本研究建立的间接凝集方法为幼犬CPV-2母源抗体或免疫犬CPV-2抗体检测提供了一种快速、简便、准确、经济的方法。     

生长激素释放肽-6缓释微球的制备及其对动物生长的影响

以生物降解材料乳酸乙醇酸共聚物(PLGA,LA-GA 8515)为载体,采用复乳-液中蒸发法制备含生长激素释放肽-6的乳酸乙醇酸共聚物微球,并通过体外药物释放试验评价载药微球的释药特征.结果得到收率、粒径大小和分布及含药量均满意的微球,其中包封率为100%,平均体积径为3.45μm,收率为79%.在37℃、pH7.0的生理等渗缓冲液中,首日释药19.19%,其后以平均日释药3.23%的速度释药25 d.小鼠肌肉注射微球30 d后,累积增重比注射生长激素释放肽-6、生理盐水分别高22.56%(P<0.05)和53.17%(P<0.01).结果表明,生长激素释放肽-6乳酸乙醇酸共聚物微球有望发展成为新型长效制剂.     

生物反应器中PRRSV TJM株在Marc-145细胞上最佳增殖条件研究

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM株,对细胞培养条件、细胞接种量、微载体的用量以及病毒培养时间等条件进行了优化。结果表明,利用生物反应器悬浮培养Marc-145细胞在血清为金源康且含量为10%、培养基为DMEM、细胞接种密度为20~30细胞/球、微载体为5 g等条件下生长状态最好;病毒最佳培养时间为27~36 h,病毒增殖效果好且能够达到最高的病毒滴度。本试验为微载体培养条件下大规模生产PRRSV-TJM株疫苗奠定了一定理论基础。