侗族传统腌鱼中乳酸菌的分离鉴定与生物学特性

对侗族传统发酵腌鱼中的乳酸菌进行分离鉴定,并对其生长特性进行研究。从产品中分离得到乳酸菌疑似菌株16株,经生理生化鉴定,初步确定为消化乳杆菌(8株)、植物乳杆菌(4株)、草乳杆菌(2株)和发酵乳杆菌(2株)。结合生理生化鉴定结果,对样品中分离出的ZZY-6、CJY1-1、ZZY-3和CJY2-3等4株分离菌株进行16S r DNA基因序列分析,构建系统发生树。经分析可知,ZZY-6为消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius),CJY1-1为植物乳杆菌(L.plantarum),ZZY-3为草乳杆菌(L.graminis),CJY2-3为发酵乳杆菌(L.fermentum)。生长特性研究结果显示,分离所得菌株均具有良好的生长性能、产酸性能和耐盐性,但均未检测到脂肪酶活性,仅植物乳杆菌表现出蛋白酶活性。     

黄喉拟水龟致病菌——松鼠葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

从患病的黄喉拟水龟Mauremys mutica肝、肾中分离得到一株革兰氏阳性菌株,经人工感染试验证实,该菌为致病菌。对该菌的生理生化指标进行了分析,结果表明：该菌具有氧化酶、触酶、葡萄糖呈阳性,凝固酶、鸟氨酸脱羧酶、密二糖呈阴性,M—R为阳性,VP反应为阴性等特征,与报道的松鼠葡萄球菌特征一致。采用BIOLOG自动微生物鉴定系统对该菌进行鉴定,将适当浊度的细菌悬液接种GP2板条培养16—24h后读出结果,并将结果输入计算机,经Biolog Microlog24．2软件分析鉴定,结果显示为松鼠葡萄球菌Staphylococcus sciuri,可能性为99％,相似性和位距分别为0．913和1．30。结合形态和生理生化特点,将其鉴定为松鼠葡萄球菌。纸片扩散法药敏试验结果表明,该菌仅对头孢拉定和阿米卡星敏感,对头孢哌酮中度敏感,对其他抗生素均存在不同程度的耐药性。     

海洋源芽孢杆菌的分离鉴定及其消化酶代谢产物的测定

【目的】从海洋生物和环境中分离鉴定出产消化酶代谢产物的芽孢杆菌,为微生态制剂的研制提供益生菌种。【方法】从雷州半岛近岸海域采集样品,用高温处理、富集培养和分离培养的方法获得分离菌株;通过菌落形态、细胞结构、染色特征、生化试验和16S rRNA基因测序对分离菌株进行鉴定;采用福林-酚比色法、淀粉-碘比色法和橄榄油乳化法测定分离菌株代谢产物中的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性。【结果】从22份样品中初步鉴定出疑似芽孢杆菌43株,筛选3种消化酶综合活性最强的8株,经生化试验和16S rRNA基因测序鉴定,有蜡样芽孢杆菌3株、暹罗芽孢杆菌3株、特基拉芽孢杆菌1株、解木糖赖氨酸芽孢杆菌1株。其中,解木糖赖氨酸芽孢杆菌BC1产脂肪酶活力最高,为52.13 U/mL;蜡样芽孢杆菌BC3产蛋白酶活力最高,为4.78U/mL;暹罗芽孢杆菌BC6产淀粉酶活力最高,为2.35 U/mL。【结论】成功筛选出产消化酶代谢产物的海洋源芽孢杆菌。     

腐乳毛霉高产蛋白酶菌株的分离与鉴定

从贵州各地风味较好的腐乳样品中分离到20株疑似毛霉菌株,经理化鉴定。并采用福林-酚试剂法检测产蛋白酶活力,获得1株发酵风味良好且蛋白酶活性较高的腐乳毛霉菌株MGC317。鉴定为雅致放射毛霉Actinomucor elegans（Eid）Benjam et Hesseh。将MGC317菌株接种麸皮培养基,28℃培养48h。其蛋白酶活性为57．26μL;对其16SrDNA的ITS序列进行克隆和分析,其分子长为711bp,与雅致放射毛霉比较。序列同源性为96％-97％。前发酵结果显示,MGC317菌株的菌丝高度为3．1cm。48h时蛋白酶活性为13.82μL。     

乳杆菌的分离及鉴定

从健康学龄儿童的新鲜粪便样品中分离得到6株乳杆菌,并对其进行属和种的鉴定。首先通过形态学观察及H2O2酶、糖发酵等生理生化试验对所分得菌株进行初步鉴定,然后利用16S rDNA序列同源性分析方法,对所分得菌株进行16S rDNA基因扩增与测序,测序结果与GenBank中该属内菌株的16S rDNA基因序列进行同源性分析,从而准确鉴定所分得菌株,并申请各菌株的GenBank登录号。经鉴定,其中1株为卷曲乳杆菌,2株为植物乳杆菌,1株为发酵乳杆菌,1株为黏液乳杆菌,1株为唾液乳杆菌。     

Domiati奶酪中抗黄曲霉毒素活性物质产生菌的分离鉴定及其抑菌作用

通过抑菌活性试验、蛋白酶敏感性试验、菌株的动力学生长曲线测定,菌株的生理生化试验以及1 6S rRNA序列鉴定试验,对埃及传统Domiati奶酪中的产抗黄曲霉毒素的活性物质的菌株进行分离与鉴定.结果显示:分离得到的菌株的发酵上清液对多株受试真菌均有明显抑制作用,尤其对产生黄曲霉毒素的黄曲霉(Asper-gillus flauus)有很强的抑制效果;该菌株产生的抑菌活性物质不是蛋白类物质,也不同于一般细菌素;该菌鉴定为扩展短杆菌(Brevibacterium linens),命名为lpl-8菌.     

自然发酵东北酸菜中乳杆菌的分离与鉴定

文章从15份自然发酵的东北酸菜样品中分离乳杆菌,并对其种属进行鉴定。通过形态学观察及H2O2酶、糖发酵等生理生化试验对所分离菌株进行初步鉴定,再利用16S rDNA序列同源性分析的方法对所分离菌株进行16S rDNA基因扩增与测序,并将测序结果与GenBank中该属内菌株的16S rDNA基因序列进行同源性比较分析。结果表明,从15份自然发酵的东北酸菜中分离获得21株菌,其中6株为植物乳杆菌,8株为短乳杆菌,6株为罗伊氏乳杆菌,1株为米酒乳杆菌。本研究为从多角度开发利用东北酸菜中的微生物资源提供依据。     

利用PCR鉴定发酵肉制品中分离的植物乳杆菌

从自然发酵肉制品中分离得到100多株乳酸菌,通过对分离菌株发酵适应性和发酵特性研究,从分离菌株中优选出1株能够进行单菌株发酵的乳酸菌1.1MRS.采用快捷的PCR技术对1.1MRS进行了鉴定.通过生理生化初步鉴定为植物乳杆菌,菌株16srDNA序列分析充分证实了鉴定结果.     

南疆地区青贮玉米中乳酸菌的分离与鉴定

为了从青贮玉米中筛选产酸能力强的乳酸菌菌株,利用MRS培养基从青贮玉米中筛选到两株乳酸菌菌株F和菌株J,对它们进行形态特征、生理生化特征、分子生物学鉴定。形态学和生理生化结果表明菌株F符合葡萄球菌属,菌株J符合芽孢杆菌属特征,经16S rDNA鉴定结果表明菌株F属于葡萄球菌属Staphylococcus sp,J菌株属于芽孢杆菌属Bacillus sp。     

发酵产生5-氨基乙酰丙酸的科氏葡萄球菌的筛选

以发酵产生5-氨基乙酰丙酸(ALA)为目标,从自然界进行菌株的随机筛选,结果得到4株可生产5-氨基乙酰丙酸的细菌LA-2、LA-4、LA-7、LA-10。摇瓶发酵LA-10产量最高,达6.88mg.L-1。在常规生理生化特性测定基础上,结合16SrDNA序列分析,LA-10鉴定为科氏葡萄球菌(Staphylococcus cohnii),命名为科氏葡萄球菌LA-10。     

猪渗出性皮炎病原的分离鉴定

从广东省棠下、增城等地区猪场送检病料中,分离到9株葡萄球菌, 经TH-16S细菌生化编码系统鉴定表明,其中4株松鼠葡萄球菌,3株木糖葡萄球菌,2株猪葡萄球菌.参考Genebank中登录的基因序列,设计合成可区分4种猪葡萄球菌表皮脱落毒素ExhA、ExhB、ExhC、ExhD的引物,并以此引物对2株猪葡萄球菌和其余7株葡萄球菌进行了 PCR检测,结果表明1株为ExhB型,1株为无毒力型,其余7株葡萄球菌均不能产生表皮脱落毒素,用此9株葡萄球菌回归动物后证实,ExhB毒力型的猪葡萄球菌致病力强,很快死亡;无毒力型的猪葡萄球菌无致病力;4株松鼠葡萄球菌都有不同程度的致病性;3株木糖葡萄球菌无致病力,说明猪渗出性皮炎的发生与猪葡萄球菌所产生的表皮脱落毒素有关.     

2株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及特性研究

【目的】寻求适合制作水产类微生态制剂的益生菌。【方法】从养鱼塘底泥和健康鲫鱼Carassius auratus肠道中分离芽孢杆菌,结合细菌形态学、生理生化特征和16S rRNA序列分析对其进行鉴定,对菌株安全性、高温耐受性、酸性耐受性、拮抗性及产酶情况等特性进行研究。【结果】分离到2株芽孢杆菌,分别命名为B1和B2,细菌形态学、生理生化特征和16S rRNA序列分析的结果显示,B1和B2均为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。特性研究结果证实B1、B2菌株都具有较好的安全性、高温耐受性和酸性耐受性,可对致病性大肠埃希菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila以及温和气单胞菌A.sobria有良好的体外抑菌能力,均具有产脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的能力。【结论】分离到2株性能优良的枯草芽孢杆菌,可将其作为水产微生态制剂的候选菌株。     

黄喉拟水龟松鼠葡萄球菌16S rDNA的序列测定和系统进化分析

从患病的黄喉拟水龟肝脏、肾脏分离到1株葡萄球菌（YLD81101）,经人工感染实验证实其为该病的病原菌。为了从分子水平上对其进行分类学鉴定,采用扩增细菌16S rDNA的通用引物对该菌的16S rDNA进行PCR扩增、克隆及序列分析。结果扩增出长约1．5kp的目的片段,测序得到1条长度为1515bp的核苷酸序列（GenBank登录号GQ261178）。核苷酸相似性分析表明,所得序列与GenBank公布的松鼠葡萄球菌（Staphylococcus sciud,S．sciuri）CTSP9菌株16S rDNA核苷酸序列相似性最高（99．9％）。同时,用与该序列相关性较高的S．sciuri及常造成动物葡萄球菌病的S．aureus S、saufeuss．bsp．anaerobius、S.gallinarum、S.hyicus代表菌株构建的系统发育进化树显示,菌株YL081101与S.sciuri代表株聚为一簇。上述研究证实,分离菌株YL081101为松鼠葡萄球菌。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌凝固酶基因型研究

 【目的】了解上海和贵州地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌凝固酶基因型情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】利用16S rRNA保守序列设计引物,PCR扩增鉴定金黄色葡萄球菌,并利用凝固酶基因及其酶切产物多态性对分离鉴定出的金黄色葡萄球菌进行了凝固酶基因分型。【结果】共鉴定出78株金黄色葡萄球菌,有74株金黄色葡萄球菌扩增凝固酶基因片段,分为5个基因型和两个亚型。PCR 1型为贵州地区优势基因型,PCR 3型为上海地区优势基因型。【结论】两地区各基因型菌株分布比例有显著的地域性差异,这与两地区地理环境和养殖水平差异对病原流行传播的影响有关。     

兰州地区奶牛临床型乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

从甘肃省兰州市2家奶牛场采集了44份患有临床型乳房炎奶牛的乳样,进行细菌分离鉴定及主要病原菌的药敏试验.结果表明:导致奶牛临床型乳房炎的主要致病菌有葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属,其中金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌共35株,占44.3％;牛链球菌20株,占25.3％;大肠杆菌11株,占13.9％,说明奶牛乳房炎的主要致病...     

鹅掌楸内生菌分离纯化及其抗菌活性初步研究

从鹅掌楸的茎、叶中分离出内生菌5株,以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureu）、大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）为供试菌,用杯碟法分别对其液体发酵液进行了抗菌活性的研究。结果表明：鹅掌楸内生菌对4种供试菌有一定的押菌活性,不同组织中内生菌的抑菌活性存在差异,其中J1、Y3对供试菌具有普遍抑茼作用。     

新疆某地奶牛隐性乳房炎病原分离鉴定及药敏试验

本研究对新疆昌吉郊区部分奶牛场进行调查,从两个大型奶牛场集乳样,主要针对患有隐性乳房炎的奶牛,共采集120份乳样进行细菌分离鉴定并选择主要病原菌进行药敏试验。结果表明,导致奶牛隐性乳房炎的主要致病菌有葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属,其中金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌共71株,占55.04%;牛链球菌18株,占13.95%;大肠杆菌1株,占0.78%。这些致病菌对环丙沙星、新生霉素等药物有很高的敏感性,而对青霉素、链霉素、杆菌肽和多粘菌素已经产生耐药性。     

柞蚕肠道菌群分析及产酶菌的筛选与鉴定

 【目的】研究柞蚕肠道菌群结构及产酶菌,探寻具有新的生理功能的微生物,用于研制微生态制剂,以提高柞蚕生产的叶丝转化率及抗病能力。【方法】采用培养法分离柞树叶饲喂的5龄柞蚕幼虫肠道细菌,通过生理生化特性结合16S rDNA系统发育分析,对其肠道细菌群落类型进行鉴定,采用筛选培养基筛选产纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶的菌株。【结果】获得的柞蚕肠道菌有芽孢杆菌、葡萄球菌、肠杆菌,其中以芽孢杆菌为主要菌群。芽孢杆菌是肠道菌中产纤维素酶、蛋白酶的主要菌群;葡萄球菌产蛋白酶能力较弱;肠杆菌不产酶。【结论】柞蚕肠道菌与家蚕肠道菌群结构相似,筛选出的产酶菌活性较高,可以制备微生态制剂用于蚕业生产。     

四川兔源金黄色葡萄球菌毒力检测及分子分型

【目的】研究四川部分区域兔源金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的基因型总体结构特征、遗传变异以及毒力因子的分布情况。【方法】从四川地区分离41株兔源金黄色葡萄球菌,鉴定fem B基因特异性,进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)筛选,并通过PCR法检测13种常见的毒力基因,采用多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)和脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)确定基因型特征。【结果】41株金黄色葡萄球菌中共检测出MRSA 31株,检出率为75.61%;共检出9种毒力基因,其中nuc、hla、eta和clf A在所有菌株中均存在,而sea、sec、see、hlb和PVL的阳性检出率分别为9.7%、85.4%、80.5%、90.2%和7.3%。MLST分型结果显示,41株金黄色葡萄球菌只存在2种序列型(ST398、ST3320)和1个克隆群CC398,其中ST398为优势序列型,所占比例为97.6%。PFGE将41株金黄色葡萄球菌分为18个基因型,但不同区域间的基因型条带差异较小。【结论】四川调查区域兔源金黄色葡萄球菌毒力因子携带率较高,其对家兔的养殖业存在较大的安全威胁;分型分析说明四川部分区域金黄色葡萄球菌的主要流行菌株遗传变异程度小,菌株间亲缘关系较近。     

部分鸡场致病性葡萄球菌的分离·鉴定·药敏试验

[目的]从合肥地区部分养鸡场病鸡组织中分离葡萄球菌,并对其进行鉴定和药敏试验。[方法]从合肥地区部分养鸡场病鸡组织中分离葡萄球菌,并通过形态特征观察、溶血性试验、血浆凝固酶试验、生化试验对其进行鉴定,最后对其进行药敏试验。[结果]共分离到9株葡萄球菌。经鉴定,其中4株为金黄色葡萄球菌,在临床分离的葡萄球菌中为优势群株;在凝固酶阴性葡萄球菌中2株为头状葡萄球菌,孔氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌和沃氏葡萄球菌各1株。这说明金黄色葡萄球菌是合肥地区家禽养殖场中葡萄球菌类疾病的主要病原菌。药敏试验结果表明,所有分离菌株对12种临床常用抗生素均呈不同程度的耐药性,对青霉素、复方磺胺甲噁唑和恩诺沙星有较高的耐药性。凝固酶阴性葡萄球菌与金黄色葡萄球菌在抗药性方面存在差异。[结论]在用抗生素防治葡萄球菌病时需通过药敏试验进行药物筛选。该研究结果可为养鸡场用药提供参考。