马铃薯X病毒的分子鉴定与检测技术

为建立快速、灵敏、特异的马铃薯X病毒(PVX)分子鉴定与检测技术,利用反转录—聚合酶链式反应(RT—PCR)技术扩增得到了PVXcp基因,并进行序列测定,同时采用RT—PCR方法和核酸斑点杂交(NASH)方法对PVX进行了分子检测。结果表明:利用PVXcp基因序列及蛋白氨基酸序列分析可准确鉴定PVX,并可分析各分离物间的分子差异。利用PVX特异性引物和DIG标记的PVXcp基因采用RT-PCR技术和NASH技术可对PVX进行准确的检测,其特异性及灵敏度均优于传统方法。     

实时荧光RT-PCR方法检测马铃薯V病毒

为了给马铃薯V病毒提供快速灵敏的检测技术以防止其传播扩散,根据其外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针,通过特异性及灵敏度试验建立该病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法检测灵敏度高,至少可检测到36 pg/μL的总RNA;对马铃薯V病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯A病毒、李痘病毒及马铃薯X病毒具有良好的特异性。该方法快速、灵敏、无需任何PCR后处理且交叉污染风险小,可用于马铃薯V病毒的快速检测。     

同时快速检测马铃薯X病毒、Y病毒和S病毒试纸条的研制

为实现在马铃薯种薯生产田现场同时快速检测马铃薯X病毒(PVX)、Y病毒(PVY)和S病毒(PVS),采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,利用抗体与胶体金相结合的特性制备金原子与PVX、PVY和PVS抗体结合物(简称金标抗体),通过三维划膜喷金仪将金标抗体喷射于玻璃纤维上作为金标垫,将PVX抗体、PVY抗体和PVS抗体分...     

马铃薯病毒RT-PCR检测体系的建立

依据马铃薯病毒PVS、PVX、PLRV、PVA的CP保守序列设计特异性引物,从马铃薯病叶组织中提取出病毒总RNA,进行cDNA合成和PCR扩增,得到了与预期片段长度一致的PCR特异扩增产物,建立了能够同步检测PVS、PVX、PLRV、PVA的RT-PCR多重检测体系。该方法对PVS、PVX、PLRV、PVA扩增出的靶带大小分别为435、625、222、300 bp,凝胶电泳易辨别区分。研究结果表明,该方法特异性好、灵敏度高、快速简便,为马铃薯病毒的高效检测提供了有效手段。     

云南马铃薯病毒种类及脱病毒种苗筛选技术体系

应用电子显微镜(负染色观察、免疫电镜、细胞病理)、血清学(DAS-ELISA、TAS—ELISA)的方法,对采自云南省马铃薯产区的2 000多份马铃薯病毒病样品及试管苗、微型薯样品进行了检测鉴定。检出的病毒种类有马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)、马铃薯M病毒(PVM)、番茄斑萎病毒(TSWV)、类烟草脆裂病毒(TRV like)、类马铃薯帚顶病毒(PMTV like)7种,其中PVX、PVY、PLRV是主要毒源。研究了PVY对合作88、PVX对中甸红产量的影响,随着种薯带毒率增加,产量显著下降。应用电子显微镜、TAS—ELISA技术建立了脱病毒核心种苗的检测筛选技术体系。制备了PVY的TAS—ELISA快速检测试剂盒,应用于生产用种苗、种薯的检测。     

应用改进的DAS-ELISA法快速检测马铃薯病毒

试验分别用改进DAS-ELISA法和常规DAS-ELISA法对马铃薯4种主要病毒PVX、PVY、PVS、PLRV进行检测,其检测结果完全一致,且灵敏度也基本相同。改进法比常规法操作简便、节省时间,表明改进DAS-ELISA法是一种直观、实用、快速、准确可靠的检测方法,适合种薯生产中大量样品的多种主要马铃薯病毒的快速检测。     

马铃薯病毒疫情调查及马铃薯S病毒的检测鉴定

[目的]了解河北省张家口市马铃薯病毒病害发生情况并对马铃薯S病毒（PVS）进行鉴定。[方法]对采自河北省张家口市的46份马铃薯样品进行生物学测定和血清学及分子生物学检测。[结果]46份样品中有35份为马铃薯Y病毒（PVY）侵染,其中有6份是PVY与PVS混合侵染,其余29份为PVY单独侵染。用特异性引物扩增PVS外壳蛋白基因的部分序列,获得685bp的目的产物,该序列与已报道的PVS核苷酸序列同源性在80％以上,编码227个氨基酸,与已报道的PVS外壳蛋白的氨基酸同源性均在90％以上。证明该样品中确实携带PVS。[结论]该研究为今后该地区马铃薯病毒病害的控制及防治提供了依据。     

雁北地区马铃薯主要病毒种类的检测

采用先进的酶联免疫吸附测定法,对雁北地区4个马铃薯主要产区的17个品种(系)进行了病毒检测。检测对象为马铃薯主要病毒PVX、P'VY和PLRV(卷叶病毒)。检测结果,其发病率分别为75.2％、35.8％和38.1％。这说明本区在脱毒和引种过程中,应以防治PVX、PVY和PLRV为重点,并建立相应的良种繁育体系。     

DAS-ELISA与RT-PCR法检测马铃薯S病毒的比较

在马铃薯种薯生产中,马铃薯S病毒是田间发病率较高的病毒之一,同时也是最不易脱掉的病毒。为了更准确地筛查马铃薯病毒病,减少病毒病在田间的侵染,保证种薯质量,提高种薯产量,用DAS-ELISA和RT-PCR两种方法对马铃薯S病毒筛查的效果进行了比较。结果表明:两种方法间有较高的吻合度,但也存在一定的差异。DAS-ELISA相对RT-PCR而言成本更低效率更高,但灵敏度略低。同一条件下,对于同一样本,不同的试验方法会对试验结果有一定的影响。因此,在病毒检测工作中,应根据检测的实际要求,谨慎合理选取正确的方法,灵活利用RT-PCR进行补充检测,以保证检测及科研工作结果更加可靠。     

应用RT-PCR法快速检测马铃薯X病毒

根据马铃薯X病毒的外壳蛋白基因序列 ,设计合成了 1对寡核苷酸引物 ,从感染PVX的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,得到一条长度约为0 .72kb的特异性PCR扩增产物 ,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。在基因水平上为PVX的检测提供了一种快速、灵敏、简便的新方法 ,为PVX的防治提供了有效手段。     

甘薯病毒病脱毒及检测

甘薯茎尖分生组织脱毒培养技术是目前防治病毒病最有效的方法。阐述了我国甘薯病的田间症状及病原种类,并综述了茎尖分生组织脱毒及检测甘薯病毒常用的生物学、血清学、分子生物学等几种主要检测技术的特点。     

贵州不同海拔地区马铃薯病毒病初步调查及检测鉴定

[目的]调查贵州省不同海拔地区马铃薯病害发生情况,鉴定出贵州省马铃薯易感病毒种类。[方法]采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)对在黔南州、黔东南州及毕节地区采集的805份马铃薯样品进行病毒检测。[结果]805份马铃薯样品中检出有29份马铃薯X病毒(PVX)为阳性;41份马铃薯Y病毒(PVY)为阳性;285份马铃薯S病毒(PVS)为阳性;23份马铃薯卷叶病毒(PL-RV)为阳性,带病毒率46.95%。[结论]对贵州马铃薯危害较重的病毒种类依次为:马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)。     

利用RT-PCR快速检测马铃薯X病毒(PVX)

采用TRIZOL试剂盒和异硫氰酸胍法2种方法提取了带PVX马铃薯试管苗的总RNA.根据设计好的1对特异性引物,运用反转录PCR技术对提取的总RNA进行了体外扩增.结果表明,所用2种方法都能有效地提取马铃薯RNA,并适合于反转录合成病毒cDNA,得到了与预期大小相一致的720 bp片段,而对照未得到任何产物.但利用TRIZOL试剂盒进行RNA提取价格较贵,而异硫氰酸胍法所用试剂可自己配制,方法灵活,价格较TRIZOL试剂盒便宜.从而建立了经济简便的PVX RT-PCR检测体系,为PVX的防治、脱毒种薯和核心种苗的检测提供有效手段.     

甘肃马铃薯脱毒种薯质量现状及发展建议

阐述了甘肃马铃薯脱毒种薯质量现状,分析了存在的问题,提出了加强种薯生产经营许可管理,规范脱毒种薯生产经营行为;建立和完善种薯3代（G3）繁育推广体系及质量保证管理体系;加强种薯检测体系建设,改善检测手段,保证种薯质量等发展建议。     

马铃薯Y病毒对不同马铃薯品种的致病力

为明确不同马铃薯Y病毒(PVY)株系对马铃薯的影响及危害,采用PVYN:O、PVYN-Wi、PVYNTN-NW(SYRⅠ)和PVYNTN-NW(SYRⅡ)株系分离物人工侵染马铃薯,并通过透射电子显微镜观察经PVY侵染后马铃薯植株细胞的超微结构。结果表明,敏感品种更适用于PVY病毒致病力鉴定,敏感品种‘克新13’和‘克新18’对PVY不同分离物的反应强烈,差异显著,而‘兴加2号’对4个PVY分离株均表现耐病,虽然细胞内均出现叶绿体变形、单层膜小囊泡和典型的风轮状内含体,但症状只表现为不同程度的花叶。同时,发现PVYN-Wi致病力较弱,侵染后,4个马铃薯品种均出现花叶症状,细胞内部产生多膜结构、风轮状内含体,引起敏感品种‘克新13’和‘克新18’细胞变形、叶绿体变形和髓鞘样结构;PVYNTN-NW致病力最强,感病的‘克新13’和‘克新18’植株受害症状明显加重,且植株早衰、细胞破坏严重,有些死亡较快的植株甚至未产生特征性内含体结构;PVYN:O致病力中等,植株受害症状和超微结构变化也介于PVYN-Wi和PVYNTN-NW之间。不同马铃薯品种对PVY病毒的感病程度有较大差异,‘兴加2号’为耐病品种。     

浅析马铃薯免耕栽培技术

马铃薯免耕栽培技术是一项简便易行且生态环保的新技术,它能改善土壤结构,培肥地力,且能使资源的利用达到最大化,提高经济效益。该文归纳了植物生长调节剂、覆盖稻草的厚度、施肥量等因素对马铃薯免耕栽培的影响,以及马铃薯免耕栽培的优缺点和技术要点,期望为生产起到一定的指导作用。     

河南省马铃薯Y病毒的分子检测与鉴定

利用RT-PCR技术对郑州市和信阳市的马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)进行了鉴定。依据PVY p1基因序列设计合成1对引物,以带毒的马铃薯叶片总RNA为模板,RT-PCR扩增得到0.58kb的目的DNA片段,而健康对照无此片段。对PCR产物进行序列测定,Blast分析表明,该DNA序列与PVY N:O株系p1基因序列相似性可达99%,证明所得DNA片段确为PVY p1基因,从而建立了PVY的RT-PCR检测方法。在此基础上,从节省检测时间、优化反应程序及反应体系等方面进行了改进。