更好地控制马立克氏病的技术措施

多年来马立克氏病病毒(MDV)的毒力在增强中,其原因是多方面的,其中MDV疫苗的使用是原因之一.随着MDV毒力的增强,现有的疫苗可能会对鸡群失去保护作用,因此,有必要寻求一种更好的疫苗.本文主要介绍研制更好疫苗的技术,并从实用的角度出发,在控制MD方面引入新的策略.     

鸡马立克氏病二价苗免疫机理的探讨

鸡马立克氏病（MD）是由马立克氏病毒（MDV）引起的淋巴组织增生性肿瘤疾病。MD发病机理非常复杂，并能引起免疫抑制和许多功能障碍，给世界养禽业带来巨大经济损失，在我国也是三大禽病之一。疫苗接种是防制MD的主要手段，常用疫苗有HVT冻士苗、MDV血清1型CVI998/Rispens疫苗和由MDV血清1、2、3型组成的双价苗和三价苗。近来年，由于MDV超强毒株的出现和早期感染很难完全防制，使经典的火鸡疱疹病毒（HVT）疫苗常常发生免疫失败。近15年来用液氮苗取代HVT冻干疫苗已成为全世界的趋向。     

马立克氏病病毒不同致病型meq基因的比较研究

为了研究马立克氏病病毒（MDV）的meq基因与不同毒株致病性的关系，应用PCR技术扩增了不同致病型MDV毒株的meq基因，测定和比较了它们的核苷酸和氨基酸序列。这些毒株包括：国际通用Ⅰ型疫苗毒CV1988/Rispens株和中国特有的疫苗毒814株、强毒GA株（vMDV)、特超强毒648A株（vv MDV)以及6个广西分离到的野毒株。结果发现，MDV不同致病型的meq基因序列相对比较保守，它们相互间核苷酸和氨基酸序列的同源性均在95.6%-99.7%。但是，与所有测试的致病性MDV毒株相比，二个Ⅰ型疫苗毒CV1988/Rispens株和814株均在阅读框的核苷酸序列中缺失第575-577位3个碱基（CAC），导致一个氨基酸（脯氨酸）的缺失。该缺失性突变恰恰位于meq基因的多脯氨酸功能的一个重复序列（EELCAQLCSTPPPPI）之中。该缺失性突变与一个疫苗毒株失去致肿瘤性是否有关，还有待进一步研究。     

表达马立克氏病病毒CVI988／Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究

用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白B（gB）基因构建成重组鸡痘病毒（rFPV）。以MDV　GA或Md5和RBIB混合攻毒，在不同品种的鸡中评价rFPV－gB／R单价苗和与火鸡疱疹病毒（HVT）组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明，MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中，rFDV－gB／R均能提供免疫保护作用，且其中一种商品蛋鸡中rFPV－gB／R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用，均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出，rFPV－gB／R与常规疫苗一样，可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。     

表达马立克氏病病毒CV1988／Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究

用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白B（gB)基因构建成重组鸡痘病毒（rF-PV)。以MDV GA或Md5和RBIB混合攻毒，在不同品种的鸡中评价rFPV-gB/R单价苗和与火鸡疱疹病毒（HVT）组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明，MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中，rFDV-gB/R均能提供免疫保护作用，且其中一种商品蛋鸡中rFPV-gB/R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用，均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出，rFPV-gB/R与常规疫苗一样，可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。     

鸡群马立克氏病免疫失败应采取的措施

马立克氏病（MD）是鸡的一种传染性肿瘤性疾病，采用疫苗免疫接种可以控制或减少MD的发生。但不幸的是免疫保护并非完全有效，免疫失败时有发生。MD免疫失败可由许多因素所致，最常见的原因是免疫接种不当、MD病毒（MDV）的早期感染或超超强毒MDV（vv＋MDV）毒株的侵袭。此外，管理不善、缺乏有效的生物安全措施、鸡群缺乏对MD的遗传抵抗力、免疫抑制性疾病的感染，以及疫苗贮存不当等其他因素也可引起免疫失败。如果发生免疫失败，应尽快确诊，并注意与禽白血病病毒（ALV）或网状内皮组织增生病病毒（REV所致的疾病相区别。MD、…     

表达MDV—gB基因的重组鸡痘病毒免疫效果观察

将马立克氏病病毒（MDV）gB基因插入鸡痘病毒中，构建了含有MDV－gB基因的重组鸡痘病毒（rFPV)，用rFPV、火鸡疱疹病毒（HVT）冻干疫苗、rFPV HVT二联疫苗分别免疫1日龄AA肉用雏鸡，8日龄攻毒后观察免疫保护效果。结果表明，3种疫苗均诱导了免疫应答，免疫保护率分别为69％、69％和85％。该重组病毒疫苗的免疫效果与HVT疫苗的免疫效果相当，二者联用具有免疫协同作用。     

马立克氏病免疫学原理研究新进展和防制方法的改进

马立克氏病（MD）是由疱疹病毒B群马立克氏病毒（MDV）所引起的一种致瘤性传染病。近年来发现，MDV的毒力增强，由原来的强毒vMDV逐渐变为超强毒性vv＋MDV，症状也由原来的神经麻痹型为主变为内脏肿瘤型为主，不但致死率提高，而且以往的疫苗HVT，甚至CVI９８８／C毒株疫苗保护率都低。在免疫学上，证实MDV所侵犯的主要靶细胞为免疫淋巴细胞T细胞，而作为机体内的免疫淋巴细胞T细胞在MD中既是起主要免疫作用的细胞，又是受MDV攻击的细胞，因而其免疫机理十分复杂。正因为如此，引起兽医界众多学者对MD的研究，近年来在马立克…     

鸡马立克氏病的免疫

马立克氏病（MD）是由疤疹病毒（马立克氏病毒）引起鸡的一种高度接触传染性的肿瘤性疾病,以内脏、肌肉、皮肤、淋巴瘤的形成和周围神经的淋巴细胞浸润为特征。到目前为止,各国研究成功并已使用的MD疫苗有如下三类。1同源病毒疫苗这种疫苗是由致弱的MDV或由自然无毒力的MDV制备的,早在1969年,就分别通过用CK细胞和CEF培养物做病毒传代而获得了致弱的毒株。     

马立克氏病病毒的分子生物学研究进展

马立克氏病病毒（MarekDiseaseVirus，MDV）主要侵害鸡性腺、神经、肌肉、虹膜及各内脏器官，引起单个或多个组织器官的淋巴细胞增生和单核细胞浸润。MDV所引起的疾病──马立克氏病是危害世界养禽业最严重的传染病之一，也是世界上第一个用疫苗预防的病毒性肿瘤获得成功的范例。MDV属于疮疹病毒科（Herpesviridae），又称鸡疮疹病毒2型（AvianherPesvirus2）、神经淋巴瘤病毒（Neurolymphomatosisvirus）、鸡麻痹病毒（Fowlparal－ysisvirus）。根据血清学反应不同，可将MDV相关的疤疹病毒划分为3个不同的血清型：血清1型包括引起…     

鸡传染性贫血病毒与马立克氏病病毒共感染SPF鸡群免疫抑制协同作用的研究

将鸡传染性贫血病毒（Chicken infectious anemia virus,CIAV or CAV）和马立克氏病病毒（Marek s dis-ease virus,MDV）人工单一和共同感染1日龄的SPF鸡,感染后分别于14、21、28、35日龄检测鸡体红细胞压积的变化,并检测鸡群疫苗免疫3周后的抗体反应,以探讨CAV与MDV共感染对鸡体的免疫抑制是否有协同作用。结果表明,在血液分析方面,CAV与MDV共感染组较病毒单一感染组与对照组差异极显著,共感染不仅加重了鸡群贫血现象,而且延长了贫血的病理症状;而在禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）H5/H9疫苗、新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）疫苗和传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）疫苗免疫后3周的抗体检测中,CAV与MDV共感染组较其它各实验组差异极显著,抗体滴度大大低于其它实验组;此外,CAV与MDV共感染组,鸡体生长状况明显差于实验各组,有6只鸡只死亡（6/25）,比病毒单一感染时的死亡率大大增加。综上研究证明,CAV与MDV共感染在免疫抑制作用上有协同作用。     

鸡马立克病疫苗株CVI988/Rispens meq基因编辑及缺失毒株的构建与鉴定

meq是鸡马立克病病毒（MDV）最重要的致瘤基因，在马立克病（MD）肿瘤发生中发挥关键作用。同时，它在疫苗株和强毒株之间具有明显的序列差异性。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，以MDV疫苗株CVI988/Rispens meq基因为靶点，设计合成gRNA，克隆构建pX459-gRNA质粒，转染CEF并感染CVI988/Rispens，然后对meq基因编辑的病毒噬斑进行克隆纯化，经过PCR扩增、测序分析及IFA鉴定，成功构建1株meq基因编辑的缺失毒株CVI988Δmeq-C7，为后续筛选和鉴定抗MD疫苗株MEQ单抗及鉴别诊断研究奠定了基础。     

马立克氏病病毒光敏生物素核酸探针的制备及应用

从马立克氏病病毒（MDV）GA株BamHI基因文库中选取L片段，用光敏生物素标记该片段，制备了MDV光敏生物素核酸探针，其检测灵敏度pg水平，保存期至少4个月，对细胞培养物中病毒核酸的检测结果表明，探针只与血清Ⅰ型MDV DNA发生分子杂交，而不与血清Ⅱ型（SB－1和血清Ⅲ型（HVT（MDV DNA发生反应，分别以京－1株（血清Ⅰ型）和Fc126株（血清Ⅲ型）按种1日龄急诊鸡，于14日龄和30日龄采用斑点杂交法检测须提取的病毒DNA，结果京－1株均为阳性，Fc126株均为阴性，表明该探针可以用于MDV强毒株和HVT疫苗毒株的区别诊断，采用斑点发校法检测实验感染MDV GA株的鸡全部为阳性（16／16），检出率为100％，而用琼脂免疫扩散试验的检出率为87．5％（14／16）。结果表明，所制备的MDV光敏生物素核酸探针具有特异性强、灵敏度高、无放射性污染等优点，为MDV强毒株的临床检测及MDV分子生物学研究提供了一种重要手段。     

马立克氏病发病原因及应对方法

多年来随着家禽业的迅猛发展，鸡群中马立克氏病野霉霉力也从温和型向超超强毒进化，马立克氏病疫苗也从冻干型HVT发展为HVT＋SB1等二联疫苗，而近年来超超强毒型马立克氏病毒（VV＋MDV）的出现，导致了Rispens CVD88疫苗的使用。到目前为止     

应用CRISPR/Cas9系统对鸡马立克氏病病毒基因编辑的研究进展

鸡马立克氏病病毒（MDV）属于疱疹病毒，基因组巨大，编码百余个基因，绝大多数的基因功能未知，在一定程度上滞后了MDV致病机理的研究。MDV在鸡体内的增殖不受母源抗体干扰使其作为理想的重组疫苗载体一直备受关注。CRISPR/Cas9系统已经广泛应用于基因编辑，具有高效、快捷优势。本文针对近五年利用CRISPR/Cas9系统研究MDV基因功能及重组MDV的进展进行总结，对于MDV的致病与免疫研究具有重要的参考意义，也为其它家禽病毒基因编辑的研究提供参考。     

鸡马立克氏病病毒的分子生物学研究

鸡马立克氏病（MD）,是由鸡马立克氏病病毒（MDV）引起的淋巴增生性疾病,病毒经空气传播,传染力很强,被感染鸡产生肿瘤和死亡,给养鸡业主造成了巨大的经济损失.在国外,MD已成20世纪50年代以来最受重视的鸡病之一.MDV感染可引起肿瘤，同时还能引起感染鸡的免疫抑制。MDV疫苗自20世纪60年代末用于生产后，已大大降低了本病所造成的损失一MDV是少数几种能在自然宿主中诱导产生肿瘤的疱疹病毒之一。     

用MDV感染模型进行死亡和传染性参数估计

许多马立克氏病病毒（MDV）毒株的病毒排出率较高，并可以更迅速使鸡致死。研究人员发现，虽然接种疫苗可以提高宿主的期望寿命，但不能显著减少病毒的排出。     

鸡马立克氏病免疫失败的原因及综合防制措施

鸡马立克氏病（MD）是鸡的一种高度接触传染性，并以淋巴细胞性肿瘤为特征的病毒病，广泛分布于全世界。70年代初应用火鸡癌疹病毒（HVT）疫苗成功防制MD，但80年代以后，世界各地屡屡发生HVT免疫失败，致使由MD引起的经济损失大幅度上升。1996年收检鸡病例348例，鸡马立克氏病78例，占22．41％，为鸡各类疫病之首。1病原及临诊特征MD的病原为鸡马立克氏病病毒（MDV），为鸡疮疹病毒科、鸡瘤疾病毒1型，HVT为鸡疤疹病毒D型。MDV及其相关的病毒分为3个血清型，即：I型包括MDV强毒（VMDV）、超强毒（VVMDV）及由它们致弱的变异…     

引起鸡马立克氏病免疫失败的重要原因──vvMDV

鸡马立克氏病（MD）是目前影响养鸡业最重要的病毒病之一，引起淋巴组织均生致肿瘤病变，传染性很强．70年代初，本病在许多国家（包括我国）开始发生时，用火鸡疱疹病毒（HVT）疫苗控制效果很好，但在几年后即出现HVT保护率降低的免疫失败．这种免疫失败的原因很多，如疫苗质量问题，疫苗使用不当，鸡对MD的易感程度不同，HVT同源母淅抗体的存在，育雏早期感染，毒力增强的马立克氏病毒（MTV）的出现等，其中毒力增强的MDV变异毒株的出现与免疫失败极其相关．80年代末，美国、意大利等国家均从HVT免疫失对的对群中分离到毒力表现…     

一株鸡马立克氏病毒的分离鉴定及其主要致病基因分析

吉林省某地区鸡马立克氏病（MD）疫苗免疫鸡群暴发MD,从发病鸡羽髓中分离到一株适应鸡胚成纤维细胞生长的马立克氏病毒（MDV）。该毒株感染无特定病原体（SPF）鸡可引起典型的MD临床症状：对非免疫鸡和火鸡疱疹病毒（HVT）疫苗免疫鸡的致病率分别为76％和72％,二者无显著差异,表明HVT疫苗对该毒株不能提供有效保护。通过对该毒株病毒基因组中132bp重复序列、meq基因的核苷酸及推导的氨基酸序列分析,发现该毒株的132bp重复序列的拷贝数、meq基因的变异符合高毒力MDV毒株的特点。