枯草芽孢杆菌对板栗采后黑斑病的抑制效果

将从发酵豆制品中分离出的枯草芽孢杆菌作为生防菌株,研究了该菌的菌悬液和培养液滤液对板栗采后黑斑病的抑制效果。结果表明,枯草芽孢杆菌菌悬液可以使板栗采后黑斑病的发病率降低约75百分点,其滤液也可以使板栗采后黑斑病的发病率降低约45百分点。这说明枯草芽孢杆菌可以显著降低板栗采后黑斑病的发病率,并且枯草芽孢杆菌的抑菌作用是通过菌体和代谢物质共同实现的,其代谢产物的抑菌效果比菌体强,起主要的抑菌作用。枯草芽孢杆菌可以作为一种新型的保鲜剂应用于板栗保鲜,对于减少板栗腐烂率、延长贮藏期、增加经济效益具有重要意义。     

枯草芽孢杆菌B_1、B_2发酵液生物表面活性剂初探

将枯草芽孢杆菌B1、B2发酵液在50～120℃分别热处理2h,B1、B2表面张力分别为28.34～30.12mN/m、28.34～31.53mN/m;pH在2.0～7.0之间,B1、B2表面张力分别为27.07-28.42mN/m、28.98-30.9mN/m;NaCl浓度在2.0×104～2.0×105mg/L内,B1、B2表面张力分别为27.45～30.88mN/m、29.02-36.97mN/m。表明,B1、B2产生的表面活性剂对热、酸性和盐具有较强的耐性;当B1、B2表面活性剂粗制品浓度为0.03、0.04和0.05g/L时,B1对立枯丝核菌(RhizoctoniasolniaKuhn)抑制率分别为19.29%、28.71%和45.65%,B2分别为20.14%、30.82%、57.18%。说明B1、B2表面活性剂对立枯丝核菌(R.solnia)具有较好的抑制作用;B1、B2发酵液经提取纯化所得的表面活性剂粗制品,通过TLC和IR方法鉴定,初步确定为脂肽类物质。     

芽孢杆菌B_1对“银帝”甜瓜主要采后病害的抑制

研究了芽孢杆菌B1原液、滤液、灭菌液和悬浮液对“银帝”甜瓜主要采后病害的抑制效果。结果表明,B1原液能显著的抑制损伤接种甜瓜果实的白霉病、粉霉病、软腐病和黑斑病,其抑制率分别为75.9 %、78.7 %、100 % 和99 %。B1滤液仅对白霉病病斑面积的扩展有所抑制,但对该病发病率及粉霉病的抑制效果不显著。B1杀菌液可有效降低黑斑病的发病率与病斑面积,减轻白霉病和粉霉病病斑面积的扩展,但对这两种病害的发病率影响不大。B1悬浮液仅能抑制粉霉病及白霉病病斑面积。     

枯草芽孢杆菌B_2种子液发酵条件的研究

采用单因子、双因子及正交试验,对枯草芽孢杆菌B2的培养液组成(碳源、氮源、酵母膏、pH值)及培养条件(装液量与转速)进行了研究,结果表明:以葡萄糖1%,牛肉胨0.8%,酵母膏0.5%及pH 8制成的培养液,装液量100 mL/250 mL锥形瓶,转速140 r/min,培养B236 h为最佳培养条件,在此条件下,活菌数可达2.97×1010cfu/mL,分别是D培养液和NB培养液的2.05倍和52.36倍.     

枯草芽孢杆菌D-29对采后梨褐腐病的抑制效果研究

为探究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)D-29对采后病害的抑制效果,本研究以梨为试验对象,以果生链核盘菌(Monilinia fructigena)为病原菌,通过在果实伤口上接种不同处理的D-29处理液测定其对采后梨褐腐病的抑制效果,监测D-29菌体在果实伤口上数量的动态变化。结果表明,D-29菌悬液可有效降低梨褐腐病的发病率,浓度越大,抑制效果越明显;先接种D-29菌悬液的处理组,果实的发病率明显低于先接种病原菌孢悬液的处理组,对病斑扩展的抑制率明显高于先接种病原菌孢悬液的处理组,且在先接种D-29菌悬液的处理组中,与接种病原菌孢悬液的时间间隔越长,抑菌效果越好;D-29+无菌水及D-29+病原菌孢悬液两种处理下,D-29菌体均能在短时间内在果实伤口上定殖。     

青霉素对枯草芽孢杆菌破壁效果研究

[目的]研究枯草芽孢杆菌生长期添加青霉素时的破壁效果。[方法]为使细菌释放出细胞内的有效活性物质,采用青霉素干扰微生物细胞壁形成的方法,研究不同的青霉素添加量对细胞的破壁效果。[结果]通过检测破壁前后菌体光密度变化值得出,在枯草芽孢杆菌的生长期,青霉素添加量对菌体光密度的变化有明显影响,青霉素添加量为25 mg/kg,作用时间4 h,温度30℃时,光密度变化值（ΔOD）最高,达0.695,说明此时破壁效果最佳。[结论]青霉素对细胞具有一定的破壁效果,推测根据需要可以适量添加青霉素,使细菌释放出细胞内的物质。     

枯草芽孢杆菌FR4对采后草莓的保鲜效果

研究了枯草芽孢杆菌FR4对草莓病原菌灰葡萄孢霉的抑制效果及贮藏品质的影响。在抑菌试验的基础上,分别采用活菌液、离心上清液和过滤液对新鲜草莓进行处理,处理后的草莓置于常温下(20±1℃),每隔24 h观察草莓的腐烂情况,并对草莓品质指标进行检测。结果表明:FR4活菌液和离心上清液对灰葡萄孢霉的抑制效果较好,过滤液次之,但均显著好于对照;不同处理可明显减少草莓腐烂率,降低失重率,减少还原糖含量和可滴定酸含量的损失,但对Vc含量没有显著影响,且活菌液和离心上清液处理优于过滤液。     

噻虫嗪对胶冻样类芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的拮抗作用

[目的]研究杀虫剂噻虫嗪对微生物菌剂主要功能菌株——胶冻样类芽孢杆菌(Patuibacillus mucilaginous,YH-001)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,YH-002)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis,YH-003)的拮抗作用。[方法]采用平板对峙法和梯度稀释法对以上3种主要功能菌株的拮抗作用进行研究。[结果]噻虫嗪浓度为0.005%、0.050%、0.100%、0.200%时对胶冻样类芽孢杆菌(YH-001)的抑制率分别达到10%、10%、60%和100%,噻虫嗪浓度在0.1%、0.2%、0.3%、0.4%浓度时对地衣芽孢杆菌(YH-003)的抑制率分别达到2.13%、10.59%、20.21%、30.85%,而噻虫嗪浓度在0.1%、0.2%、0.3%、0.4%浓度时对枯草芽孢杆菌(YH-002)抑制作用一般。[结论]杀虫剂噻虫嗪对微生物菌剂具有一定的抑制作用,为实际生产提供理论依据。     

枯草芽孢杆菌L1-21在柑橘上的定殖能力及其防治绿霉病效果

为明确枯草芽孢杆菌L1-21在柑橘叶片、果实内的定殖能力及其防治果实绿霉病的效果,通过向柑橘叶片喷施10~6 cfu/mL的L1-21菌株的绿色荧光标记菌(L1-21-GFP)发酵液,测定其在叶片内的定殖数量及传导能力;采用10~8 cfu/mL的菌液喷施和浸泡处理柑橘果实,检测其在果实内的定殖情况,用注射法接种Penicillium digitatum孢子并计算发病率,测定其对绿霉病的防控效果。结果显示,处理后10 min, L1-21-GFP在叶表及叶肉中的定殖量分别达到1.36×10~3和8.08×10~2cfu/cm~2,并呈现持续增长的趋势。处理后1 h, L1-21-GFP向下传导到叶表的菌含量为1.51×10~2 cfu/cm~2,并稳定存在于叶表中;处理后2 h,传导到叶肉的菌含量为5.67 cfu/cm~2,逐渐增加到30 h时的1.15×10~3 cfu/cm~2。L1-21-GFP能在果实内定殖,浸泡1 h果肉和果皮中的定殖量分别为9.51×10~3和3.51×10~4 cfu/g,但在不同柑橘品种果实间定殖能力有显著性差异,椪柑中定殖量最高。浸泡30 min后,L1-21对果实绿霉病防效第3天为100%,第5天为80.36%。以上结果表明,枯草芽孢杆菌L1-21能高效定殖于柑橘叶片及果实内,可以利用该菌株防治柑橘病害。     

大蒜汁对枯草芽孢杆菌芽孢形成和发芽的影响

采用新鲜大蒜汁,研究其对芽孢杆菌的典型代表———枯草芽孢杆菌的芽孢生长、发芽的影响;通过测定菌体浓度和2,6-吡啶二羧酸(DPA)含量来进行分析,结果表明:大蒜汁对枯草芽孢杆菌的芽孢和DPA形成有明显的抑制作用,主要是延缓了芽孢的形成过程;但对芽孢的发芽无抑制作用。     

Control of Postharvest Fusarium Rot and Trichothecium Rot in Harvested Muskmelon (cv. Yindi) by Harpin

Preharvest and postharvest application of Harpin was evaluated for its ability to induce resistance in muskmelon fruit and control rots. Preharvest treatments were 30 mg L-1, 60 mg L-1 Harpin or 1 mg L-1 Imazalil either 1 week or 1 day before harvest.The CK was untreated. Fruit were then inoculated with Fusarium semitectum or Trichothecium roseum 48 h after harvest,and stored at 23 ± 1℃, RH (relative humidity) 50-60% for 4 d. All treatments were effective in reducing the lesion area with 60 mg L-1 Harpin the most effectively. No treatments inhibited infection rate. Postharvest treatment was fruit dips of 30 mg L-1, 60 mg L-1 Harpin, 0.1 mg L-1 Imazalil. Fruit were inoculated with F. semitectum or T. roseum 24, 72, 120 or 168 h after treatment, and stored at 23 ± 1 ℃, RH 50-60% for 4 days. All treatments were effective in reducing the lesion area with 60 mg L-1 Harpin the most effectively. No treatments inhibited the infection rate. Postharvest Harpin treatment induced the peroxidase activity increase, peroxidase activity reached maximum after 8 d and the activation lasted at least 10 d.     

烟草赤星病菌与黑斑病菌生物学特性的比较

比较烟草赤星病菌和黑斑病菌基本生物学特性.结果表明:烟草赤星病菌和黑斑病菌的最适生长温度分别为25～ 30℃和20 ～ 25℃;pH6～9培养条件更有利于烟草赤星病菌的生长;烟草赤星病菌利用葡萄糖和蔗糖的能力明显大于黑斑病菌;两病原菌对硝酸铵、硫酸铵和干酪素的利用情况基本相同,利用能力大小依次为干酪素、硝酸铵、硫酸铵;...     

Harpin处理对苹果梨黑斑病的抑制及抗性酶的诱导

研究了采后Harpin真空渗透处理对苹果梨(Pyrus bretschneideri‘Pingguo’)损伤接种互隔交链孢(Alternar-ia alternata)的影响及部分机理.结果表明:用50、100和150 mg/L的Harpin处理均可明显抑制损伤接种果实的发病率,其中以50 mg/L Harpin的效果最好.此外,该浓度处理还明显降低损伤接种果实的病斑面积.苹果梨经50 mg/LHarpin处理再用(A.alternata)挑战后果实体内的过氧化物酶(POD)、几丁质酶(CHT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性明显升高,酚类物质的含量也显著积累.由此表明,Harpin对苹果梨黑斑病有效抑制与诱导果实体内这3种抗性酶的活性以及提高酚类物质含量密切相关.     

枯草芽孢杆菌同种相食现象及生防应用

枯草芽孢杆菌分泌的抗菌物质在植物病害防治方面具有重要作用。在芽孢形成初期阶段,枯草芽孢杆菌通过“同种相食”（Cannibalism）推迟芽孢形成：准备形成芽孢的细胞产生并释放细菌毒素skf和sdp,杀死未形成芽孢的同类细胞,死亡细胞释放的营养可供准备形成芽孢的细胞利用,导致芽孢形成推迟。细菌毒素skf和sdp具有广谱杀菌性。综述“同种相食”的基因调控机制,该过程中新型毒素的产生及免疫机制,“同种相食”生物意义及毒素skf、sdp在生物防治应用前景。对于枯草芽孢杆菌生物防治制剂开发具有实际意义。     

可可链霉菌182-2活性代谢产物对烟草赤星病菌的作用

【目的】明确可可链霉菌（Streptomyces cacaoi）182-2的活性代谢产物——KA08对烟草赤星病菌（Alternaria alternata）的抑菌活性及其机理,为后续农用抗生素产品开发和应用提供科学依据。【方法】采用菌丝湿重法和培养皿中萌发法,测定KA08对烟草赤星病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用;采用电导率法和紫外吸收法测定其对细胞膜渗透性、麦角甾醇含量、脂质过氧化程度、可溶性蛋白含量的影响。【结果】KA08对烟草赤星病菌菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用,同时,还可造成菌丝节间缩短、扭曲,芽管顶端膨大,并产生大量囊状膨大物。处理24 h时,对孢子萌发的抑菌中浓度为177.53 µg•mL-1。抑菌机理研究发现KA08能导致菌丝体内电解质泄漏,细胞膜上麦角甾醇含量显著降低,脂质过氧化产物—丙二醛含量明显升高,并显著抑制菌丝体内蛋白质含量。【结论】农抗KA08对烟草赤星病菌具有显著抑制作用,主要通过抑制菌丝细胞膜上麦角甾醇合成,引发细胞膜脂质过氧化而使病菌细胞膜受损、通透性增加,从而导致菌丝生长受阻。细胞膜是KA08的主要作用位点之一。     

我国苹果斑点落叶病菌携带dsRNA分析及一种dsRNA病毒的鉴定

【目的】苹果斑点落叶病在我国各苹果主产区均有发生,给苹果产业造成了严重的经济损失。苹果斑点落叶病是由链格孢苹果专化型（Alternaria alternata f. sp. mali）侵染引起的一种气传病害。本研究旨在探明我国苹果斑点落叶病菌携带dsRNA的情况,为田间防治斑点落叶病提供新的生防资源,并为病毒的多样性以及进化研究提供新的认识。【方法】从全国8个省份采集有典型症状的组织样本,通过组织分离和单孢分离法获得纯培养;通过dsRNA的提取及凝胶电泳明确我国苹果斑点落叶病菌携带dsRNA的情况;通过菌株培养特性、菌丝生长速率、在果实及叶片上的致病力测定揭示携带dsRNA病原菌的生物学性状;通过高通量测序技术、分子克隆技术对QY-2菌株携带的dsRNA病毒进行全基因组序列、基因组结构和系统进化分析。【结果】自我国苹果产区获得102株苹果斑点落叶病菌菌株的纯培养,通过dsRNA的提取及凝胶电泳明确了5个菌株带有明显的dsRNA条带,携带的dsRNA分为4种类型,类型I（菌株YT-3-7）dsRNA在8、2.5和1.5 kb左右;类型II（菌株SJZ-4）dsRNA在8 kb左右;类型III（菌株QY-2）dsRNA在3和0.8 kb左右;类型IV（菌株CL-2-6和SQ-1-1）dsRNA在2.5和1.5 kb左右。含有dsRNA的菌株培养性状多样,菌落特征、生长速率与dsRNA携带与否及类型没有明显的关系,含有dsRNA的菌株大多属于弱致病力菌株。QY-2在叶片和果实上的致病力均最弱,确定其携带的dsRNA病毒基因组包括5个dsRNA片段,分别为dsRNA1—dsRNA5,片段大小依次为3 665、3 054、2 824、2 819、831 nt,提交至GenBank,登录号分别为MK672910、MK672913、MK672912、MK672911、MK836314。编码蛋白的分子量依次为124、83、84、83、13 kD。经系统进化关系分析,与Alternaria alternata chrysovirus 1遗传关系最近,确定其为产黄青霉病毒科（Chrysoviridae）、β产黄青霉病毒属（Betachrysovirus）的Alternaria alternata chrysovirus,暂定命名为Alternaria alternata chrysovirus 2（AaCV2）。【结论】我国苹果斑点落叶病菌携带dsRNA群体多样,dsRNA的有无及类型与寄主病原菌培养性状没有明显相关性,携带dsRNA的菌株多为弱致病力菌株,致病力最低的QY-2菌株携带AaCV2。该菌株的弱致病力可能具有潜在的应用价值,可为苹果斑点落叶病提供新的生防资源。     

瓜类作物枯萎病生防菌BS-2000和JK-2的分子鉴定

采用生理生化和16SrDNA两种不同的方法对生防菌BS-2000和JK-2进行鉴定。生理生化鉴定显示,BS-2000属于地衣芽孢杆菌,JK-2属于短短芽孢杆菌；16S rDNA基因的测定与分析表明,BS-2000与B．licheniformis(地衣芽孢杆菌)的同源性达99.9％,JK-2与B．brevis(短短芽孢杆菌)的同源性达99.9％,故推定BS-2000属于地衣芽孢杆菌,JK-2属于短短芽孢杆菌。     

烟草赤星病菌代谢产物对烟草BY-2细胞ROS爆发和ATP损耗的诱导?

 【目的】本文以烟草BY-2细胞为实验材料,探讨赤星病菌代谢产物（metabolic products of Alternaria alternata,MP）对烟草BY-2细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）产生和ATP含量变化的影响以及产生这种影响的原因。【方法】用10% MP处理烟草BY-2细胞,用氧电极检测不同时间MP处理后,烟草BY-2细胞呼吸速率和呼吸途径的变化,同时分析BY-2细胞内H2O2产生和ATP含量等的变化。【结果】 MP处理导致了烟草BY-2细胞H2O2爆发和ATP含量下降,此外MP处理也导致了烟草BY-2细胞总呼吸速率、细胞色素途径（cytochrome pathway）和及交替氧化酶途径（AOX）的下降,并且造成线粒体渗透转换孔（permeability transition pore,PTP）开放和细胞色素c释放。【结论】 MP对BY-2细胞呼吸速率和细胞色素途径的抑制不可避免地导致胞内ATP含量下降,此外MP诱导的烟草BY-2细胞氧化磷酸化的解偶联作用是MP导致胞内ATP含量下降的另一重要原因。而MP对 AOX途径的抑制则是诱导胞内ROS爆发的重要原因。     

枯草芽孢杆菌B_2发酵工艺及其质量检测方法研究

研究了枯草芽孢杆菌B2从种子发酵液到发酵罐的放大培养,通过正交优化试验筛选枯草芽孢杆菌B2发酵的优化组合、种子罐和发酵罐的发酵时间及发酵液的质量检测方法.结果表明:枯草芽孢杆菌B2的最佳发酵组合为接种量10%,pH 7.5,通气量1 000 L.h-1,转速200 r.min-1;种子罐的发酵时间为20 h;发酵罐最适放罐时间为36 h.发酵液质量检测以活菌量为主要指标,辅助比浊法检测.