番茄‘黄樱桃-2号’再生体系研究

以番茄‘黄樱桃-2号’的子叶切段为外植体,研究不同激素组合对愈伤组织产生以及再生芽诱导的影响。结果表明,不同种类和浓度的激素诱导形成的‘黄樱桃-2号’愈伤组织和再生芽数目存在差异,最适培养基为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ IAA 0.2 mg/L,出愈率可达到95.08%,每个外植体再生芽数约为5。最适生根培养基为：1/2MS+ IAA 0.2 mg/L。通过观察头孢霉素和羧苄青霉素2种抗生素对子叶愈伤组织和再生芽诱导情况的影响,确定‘黄樱桃-2号’子叶的除菌培养基为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ IAA 0.2 mg/L+ 头孢霉素 200 mg/L+ 羧苄青霉素 200 mg/L。同时还对作为筛选剂的卡那霉素进行了浓度筛选,确定了卡那霉素对‘黄樱桃-2号’子叶的筛选浓度为50 mg/L。     

小豆子叶节遗传转化体系建立

以小豆品种‘京农6号’子叶节为外植体进行离体再生,旨在建立‘京农6号’子叶节再生遗传转化体系。本研究对农杆菌菌株EHA105侵染子叶节的时间、诱导愈伤生成的适宜6-BA浓度、诱导不定芽的激素浓度及配比及诱导不定根生长的IBA浓度等影响子叶节再生遗传转化体系的因素,结果发现农杆菌EHA105侵染的最佳时间为50 min,GUS阳性率为67.5%;诱导愈伤的适宜6-BA浓度为2.0 mg/L,诱导率为91.4%;诱导不定芽的最适激素是5.0 mg/L ZT,出芽率为62.0%;而0.1 mg/L IBA诱导不定根的效果最好,生根率可达100.0%。本研究建立了小豆‘京农6号’子叶节外植体的遗传转化体系,获得了再生植株,为小豆的CRISPR/Cas9基因编辑技术在小豆功能基因组学和育种中的应用提供了技术参考。     

‘黑珍珠’番茄植株再生体系的研究

为了研究‘黑珍珠’番茄植株再生,以‘黑珍珠’番茄幼嫩叶片为外植体诱导愈伤组织,通过愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、不定芽增殖培养、生根培养和试管苗移栽,建立高效快速的‘黑珍珠’番茄再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片愈伤组织的培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,叶片外植体愈伤组织诱导率最高可达98.2%;诱导出的愈伤组织在MS+ 1.5 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA培养基上能很好的分化出不定芽;MS+4.0 mg/L KT+ 0.01 mg/L IBA 培养基可实现不定芽芽增殖;最适宜的生根培养基为1/2MS+ (0.05~0.08) mg/L NAA,试管苗移栽成活率达92%。     

菊花‘金不凋’再生及遗传转化体系的构建

‘金不凋’属于典型的日中性菊花,可作为日中性菊花开花分子机理的理想研究材料,目前尚未建立‘金不凋’的再生及遗传转化体系。本研究以‘金不凋’叶片为外植体,分别对影响再生及转化体系的主要因素进行试验。结果表明‘:金不凋’叶盘愈伤组织的不定芽分化最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L,不定芽分化率为90.0%,平均再生不定芽数达5.5556个;相关性分析表明褐化率与愈伤诱导率以及平均再生愈伤组织数之间存在显著的负相关关系;试管苗最佳生根培养基为MS,生根率为100%。在‘金不凋’再生体系建立的基础上,初步建立了其遗传转化体系:‘金不凋’叶盘经过24 h预培养,在菌液浓度OD600=0.6的农杆菌中侵染10 min,共培养2 d,延迟培养5 d,叶片不定芽分化潮霉素临界浓度为2 mg/L,生根筛选潮霉素临界浓度为5 mg/L时,转化效率最高。通过潮霉素抗性筛选和PCR鉴定,获得3株PCR阳性菊花苗,转基因阳性苗频率为2.5%,本研究为‘金不凋’的基因工程育种提供了技术基础。     

大花绣球‘无尽夏’组培苗叶片再生植株的研究

为建立大花绣球‘无尽夏’规模化无性繁殖和高效遗传转化体系,以‘无尽夏’组培苗叶片为外植体,研究叶位、暗培养时间及不同激素组合等因素对叶片诱导形成愈伤及分化不定芽的影响。结果表明,‘无尽夏’组培苗植株中上部叶片的愈伤诱导效果好,适宜的外植体取样叶位为第3~6位叶片。初始暗培养有利于叶片形成愈伤,暗培养15~25天的效果最佳。诱导‘无尽夏’组培苗叶片形成愈伤的适宜培养基为MS+CPPU 3.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L,其愈伤诱导率达到98%以上;愈伤增殖与不定芽分化培养基为MS+6-BA 1.0~2.25 mg/L+IBA 0.1 mg/L。     

4个优良石榴品种叶片高频再生体系的建立

为提高石榴叶片再生率,增加再生芽数量及缩短再生周期,以‘泰山红’‘、泰山三白甜’‘、皮亚曼’‘、牡丹’4个石榴品种盆栽苗和无菌苗叶片为试材,研究培养基类型、生长调节剂配比、叶片来源和培养步骤对不定芽再生的影响。结果表明：MS是叶片再生最适培养基类型;无菌苗叶片比盆栽苗叶片更易再生不定芽;BA3.0mg/L+KT1.0mg/L+IBA0.3mg/L是叶片愈伤组织诱导、分化和不定芽形成过程中生长调节剂最佳配比;先在液体培养基上培养3~5天,再转至固体培养基比仅在固体培养基上效果更好,叶片再生率最高达98.47%,出芽数达7.51个。叶片不定芽的最佳单芽培养基和增殖培养基分别为B5+BA0.6mg/L+IBA0.5mg/L+椰汁100mL/L+PVP2.0g/L+GA31.0mg/L和B5+BA0.8mg/L+IBA0.5mg/L+椰汁100mL/L+PVP2.0g/L,增殖系数为5.56。适宜的生根培养基为B5+IBA1.0mg/L+椰汁100mL/L,生根率为89.63%。由此建立了石榴叶片高频再生体系。     

云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)无菌叶片高频再生体系的建立

本研究以云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)无菌苗叶片为材料,研究云南杜鹃叶片直接和间接再生植株的方法。结果表明:ZT是理想的云南杜鹃无菌叶片直接分化不定芽和愈伤组织分化不定芽的细胞分裂素,其中以WPM+ZT 4 mg/L+NAA 0.01 mg/L效果最好,叶片分化不定芽率达74%,平均分化不定芽数6.91个,愈伤组织分化不定芽率达76.67%;附加TDZ诱导出的愈伤组织状态好,体积大,疏松,适宜的叶片诱导愈伤组织的培养基为WPM+TDZ 0.5mg/L+2,4-D 1~2 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L,愈伤组织诱导率达91.33%以上,较好的生根培养基为1/2 WPM+IAA 1.5 mg/L,生根率达89.33%以上。研究结果为云南杜鹃遗传转化研究奠定了基础。     

热敏型生菜‘GRAND RAPIDS TBR’高效再生体系的建立

本试验以热敏型生菜‘GRAND RAPIDS TBR’为材料,分别探讨不同消毒试剂及时间对种子消毒的影响及不同生长调节剂对愈伤组织诱导、不定芽再生的影响,初步建立了高效的再生体系。结果表明：种子消毒的最适配比为75%的酒精45 s+3%的次氯酸钠12 min,种子成活率可达97.8%;愈伤组织诱导与不定芽分化的最适培养基为MS+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,愈伤组织诱导率100%,平均不定芽再生27.7个,且不定芽生长健壮;最适生根培养基为不添加NAA的纯MS培养基,生根率为97.8%;炼苗移栽后,植株成活率100%。本研究初步建立了‘GRAND RAPIDS TBR’的高效再生体系,为生菜基因功能研究和耐高温新品种培育提供基础。     

‘杂花’薰衣草再生体系的建立

为了获得高效稳定的薰衣草再生体系,本研究以‘杂花’薰衣草叶片为试材,研究了不同激素及浓度对愈伤组织诱导、不定芽分化及不定根形成的影响。结果表明：6-BA与NAA及6-BA与2,4-D组合均能诱导愈伤组织形成,最佳培养基配方分别为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L和MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,出愈率分别为95.2%、92%;6-BA与NAA组合诱导不定芽的效果显著优于6-BA与2,4-D的组合,适合诱导再生芽分化的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,分化率为68.1%;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,生根率为91.1%。本研究建立了‘杂花’薰衣草的再生体系,为利用转基因技术培育高产优质的薰衣草新品种提供技术支持。     

海州常山组培再生体系的建立

为建立高效的海州常山组培再生体系,以海州常山扦插苗的叶片为外植体,对叶片愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、壮苗培养及生根培养过程的主要因素进行探讨。研究结果表明,叶片愈伤组织诱导和分化的最适培养基为1/2MS+0.5 mg/L TDZ+0.05 mg/L NAA,诱导率为86.67%,不定芽增殖系数为2.34,苗高增长量为1.41。壮苗的最适培养基为1/2MS+0.2 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA,不定芽增殖系数为1.84,苗高增长量为1.82;诱导试管苗生根的最适培养基为：1/2MS+1.6 mg/L IBA,生根率为100.00%,平均每株试管苗生根7.86条,平均根长2.22 cm,并且植株生长良好,利于后期栽培。     

‘凤丹’牡丹胚芽愈伤诱导及不定芽的分化

为提高‘凤丹’牡丹胚芽愈伤组织的诱导率及不定芽的分化效率,本研究以‘凤丹’牡丹种子为试验材料,对种胚愈伤诱导及不定芽分化的培养基配方进行添加与不添加2,4-D的对比试验。结果显示,诱导胚愈伤的最佳培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,诱导率达33.33%;诱导不定芽分化的最佳培养基为MS+0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,诱导率达65.33%,表明在没有2,4-D添加的培养基中能获得更高的‘凤丹’牡丹胚芽愈伤诱导率及更多的不定芽。本研究结果可为‘凤丹’牡丹的组培和快繁技术提供一定的技术指导。     

深山草莓花瓣离体诱导变异株系及其品种特性

应用均匀设计法研究了影响深山草莓花瓣愈伤组织诱导及愈伤组织再分化变异植株的主要因子和水平。深山草莓花瓣愈伤组织诱导率超过65.0%以上的适宜培养基共有11个,经过组合优化后可知,培养基LS+TDZ2.06mg/L+2,4-D0.60mg/L对深山草莓花瓣愈伤组织诱导效果最好,诱导率为98.0%;其中,以培养基LS+TDZ2.20mg/L+2,4-D0.40mg/L诱导形成的愈伤组织在10个适宜的分化培养基中培养均分化出再生芽苗,优化后的最佳再分化培养基为1/2LS+TDZ2.30mg/L+KT1.38mg/L,分化率为96.3%,田间试验发现变异率高达2.77%。对10个含有不同激素和浓度配比及1个优化后的培养基诱导形成的再生芽苗生根后经5年的田间栽培观察可知,有6个性状稳定的优良变异株系。这说明深山草莓花瓣在适当激素和浓度配比的条件下可产生变异植株,并能趋向稳定性状变异。     

不同品系橡胶树花药愈伤诱导和体胚发生研究

为建立橡胶树不同品系的体胚发生和植株再生体系,为不同品系橡胶树良种生产奠定基础。以橡胶树优良品系‘热研106’、‘热试59’、‘热试62’的花药为材料,采用正交设计,对不同品系、不同植物生长调节剂配比培养基的花药愈伤和体胚诱导效果进行了研究。[结果]结果表明：3个品系的愈伤诱导率和体胚诱导效率差异明显,同一品系不同培养基的愈伤诱导率和体胚诱导效率差异明显;愈伤诱导培养基中的植物生长调节剂对下一阶段的体胚诱导有明显影响。根据本研究,‘热研106’的花药愈伤诱导最佳浓度组合为2,4-D 1 mg/L+NAA 2 mg/L+KT 1 mg/L,‘热试59’的花药愈伤组织诱导最佳浓度组合为2,4-D 0.5mg/L+NAA 1 mg/L+KT 1 mg/L,‘热试62’的花药愈伤组织诱导最佳浓度组合为2,4-D 1 mg/L+NAA 1 mg/L+KT 1 mg/L。‘热试62’的体胚发生最佳浓度组合为KT 3 mg/L+NAA 0.05 mg/L+GA3 0.05 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。[结论]本研究获得了不同品系的愈伤诱导和体胚发生最佳培养基组合,为多品系橡胶树花药植株再生体系的建立奠定了基础。     

红颜草莓叶片再生体系的建立

摘要：以红颜草莓 ( Fragaria ×ananassa Duch ‘Benihoppe’)组培苗为材料进行叶片离体再生研究,建立了一个高效的叶片再生体系。结果表明：暗培养10 d是叶片诱导愈伤组织最适合的暗培养时间。适宜的叶片诱导愈伤培养基为MS+TDZ 2.0mg/L +NAA 0.1mg/L,出愈率95.0%;适宜的愈伤诱导分化培养基为MS+TDZ 1.0mg/L +NAA 0.1mg/L,分化率90.0%;最适宜的生根培养基为1/2 MS,生根率为100%。     

降香黄檀愈伤组织培养与植株再生研究

为了实现降香黄檀工厂化快速繁殖和扩大栽培,并为降香黄檀抗寒基因导入打下一定的基础,以降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖为外植体,MS为基本培养基,对各器官愈伤组织诱导与分化的最适培养基成分进行了研究。结果表明,可从降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖成功地进行愈伤组织培养和植株再生。茎段、叶片、根尖诱导愈伤组织的最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L、1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L和1/4MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;茎段、叶片、根尖的愈伤组织诱导丛生芽最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 4.0 mg/L、1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L和1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L;茎段、叶片、根尖来源的单芽,其最佳生根培养基分别为MS+NAA 1.5 mg/L、MS+NAA 1.0 mg/L和MS+NAA 2.0 mg/L。比较茎段、叶片与根尖的愈伤组织诱导率、丛生芽诱导率和单芽生根率,得出以无菌实生苗根尖作为外植体是降香黄檀愈伤组织培养和植株再生的最佳选择。     

红花檵木叶片再生不定芽的研究

为了建立红花檵木叶片高效的离体再生体系,解决其基因工程育种的问题,以红花檵木叶片为外植体,探讨了品种、光照条件、激素等因素对叶片离体再生的影响。结果表明：不同品种叶片再生不定芽能力不同,‘玫红细叶青’再生能力最强,其次是‘长叶玫红’,‘花叶2号’叶片再生最难。白光和红光有利于叶片再生,70天后都有不定芽出现。其中白光下的诱导率达50%,红光下诱导率达25%。叶片近轴面接触培养基,再生效率高。适合诱导‘玫红细叶青’再生不定芽适宜培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L其不定芽分化率为41.6%,适合‘长叶玫红’不定芽分化的组合是MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L其不定芽分化率为33.3%。     

薄壳山核桃愈伤组织诱导的优化

本研究以薄壳山核桃品种苗‘波尼’幼嫩叶片为外植体,设置不同消毒方法、不同蔗糖浓度、不同褐化抑制剂及不同植物生长调节剂浓度及配比,研究其对叶片诱导愈伤组织形成的影响。结果表明,不同消毒方法对薄壳山核桃叶片愈伤组织形成影响显著,以0.1%HgCl_2消毒2 min效果最好,污染率为15.6%,且愈伤组织生长状态最好;不同蔗糖浓度对叶片愈伤组织形成的影响以30 g/L效果好,愈伤诱导率达75.6%;不同褐化抑制剂对叶片愈伤组织影响较小,其中以0.2 g/L PVP效果最好,不仅褐化率低且愈伤诱导率高;不同植物生长调节剂浓度及配比对薄壳山核桃叶片愈伤组织形成影响显著,以4/5MS+0.75 mg/L TDZ+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA培养基与改良DKW+0.4 mg/L TDZ+0.4 mg/L IBA培养基诱导效果最好,研究发现低浓度的TDZ (0.2～0.4 mg/L)促进愈伤组织形成,高浓度的TDZ (0.8～2.0 mg/L)抑制愈伤组织形成。本研究可筛选出诱导叶片愈伤组织的最佳方法,为后期愈伤组织诱导不定芽提供科学依据。     

苎麻体细胞植株再生体系优化研究

旨在探索苎麻体细胞植株再生体系的优化方案,为苎麻组织培养及品种改良提供理论与技术依据。本试验以‘湘苎3号’为试材,优化苎麻愈伤诱导植株再生体系,再将此优化的再生体系应用于其他4个种质材料,得出5个种质的愈伤诱导率、芽诱导率、再生苗生根率,来比较不同基因型之间的体细胞植株再生率差异。结果表明,‘湘苎3号’最佳愈伤诱导培养基为附加2,4-D (0.1 mg/L)和6-BA (2.5 mg/L)的MS培养基;‘湘苎3号’、‘咸丰大叶绿’、‘A’、‘B’、‘中苎1号’的愈伤诱导率分别是：83.3%、80.0%、76.7%、70.0%、53.3%。‘湘苎3号’最佳芽诱导培养基为附加TDZ (0.5 mg/L）、2,4-D (0.02 mg/L)和IAA (0.03 mg/L)的1/2MS培养基,‘湘苎3号’、‘咸丰大叶绿’、‘A’、‘B’、‘中苎1号’的芽诱导率分别是：28.4%、21.2%、12.8%、8.9%、4.9%。‘湘苎3号’最佳生根培养基为附加TDZ (0.02 mg/L)+NAA (0.05 mg/L)+IAA (0.02 mg/L)的MS培养基,‘湘苎3号’、‘咸丰大叶绿’、‘A’、‘B’、‘中苎1号’的生根率都是100%。     

油梨愈伤组织诱导及分化研究

摘要：[目的]研究不同激素及外植体类型对‘哈斯’油梨（Persea Americana Mill.cv.Hass）愈伤组织诱导及分化的影响,筛选最佳诱导条件和外植体。[方法]通过间接器官发生途径。主要探讨（1）单一激素萘乙酸（1-Naphthylacetic acid,NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxy acetic acid,2,4-D）;6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine,6-BA）分别与2,4-D和NAA 结合时对‘哈斯’油梨叶片愈伤组织的诱导效应。（2）不同外植体（叶片、叶柄、茎尖、茎段）在相同条件下（基本培养基：MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.1NAA mg/L）的愈伤组织诱导效应。（3）单一激素 6-BA（或与NAA结合）对油梨愈伤组织芽分化的效应。[结果]结果表明：以MS为基本培养基,（1）添加1.0 mg/L 2,4-D/NAA,其诱导效果最佳,诱导率分别为45.3%和20.2%;但NAA诱导的愈伤质地较佳。（2）1 mg/L NAA与1.0 mg/L 6-BA结合,诱导效果较好,其诱导率最高可达84%。（3）诱导愈伤组织的最适外植体为茎段,其诱导率≥72.8%。叶柄次之,叶片和茎尖较差。[结论]综上,不同激素种类及其浓度和外植体类型对‘哈斯’油梨愈伤组织诱导影响显著。最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂。愈伤组织诱导最佳外植体为茎段,但诱导形成的愈伤组织难以分化出芽。     

大葱成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

为了建立大葱组培高频再生体系,以‘铁杆大葱’的成熟胚为材料,探讨培养基种类、植物生长调节剂浓度等因素对大葱成熟胚愈伤组织诱导及再生的影响。结果表明,MS培养基适合大葱成熟胚愈伤组织诱导,大葱成熟胚愈伤组织诱导最适宜的培养基为MS+2,4-D (2~3 mg/L)。大葱成熟胚愈伤组织分化培养最适培养基为MS+6-BA (1.0 mg/L)+KT (1.0 mg/L)+NAA (0.1 mg/L),分化率达90%;对分化的再生苗移植于1/2 MS培养基上进行生根及壮苗培养,生根率达到100%,炼苗移栽后小苗的成活率达到90%以上。本研究为进一步优化大葱再生体系提供了依据,为后续大葱的遗传转化的研究起了推动作用。