中药抗体复合制剂防治仔猪腹泻试验

选择待开产未经大肠杆菌免疫来航蛋鸡150只,用ETEC K88+菌株C83907进行免疫后,收集高免蛋制备卵黄抗体粉。将中药提取物、卵黄抗体粉与载体按比例混合制成中药抗体复合制剂。分别选择3日龄和21日龄的杜×长×大三元杂交早期断奶仔猪18只和40只,人工感染C83907大肠杆菌后,口服含制备的中药抗体复合制剂进行被动免疫试验。结果表明:3日龄仔猪服用抗ETEC中药抗体复合制剂后,平均增重接近对照组(p>0.05),仔猪死亡率显著小于对照组(p<0.01)。21日龄服用中药抗体复合制剂组的仔猪增重高于卵黄抗体组(p<0.05)。研究结果表明,喂以6 g和10 g抗ETEC卵黄粉组的治愈率与抗生素治疗组差异不显著(p>0.05),比单一使用纯中药和卵黄抗体使用效果好(p<0.01)。     

大口黑鲈弹状病毒的分离培养及其卵黄抗体的制备

本研究从爆发性死亡的大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼苗病样中分离培养1株大口黑鲈弹状病毒(M.salmoides rhabdovirus,MSRV)毒株,采用甲醛灭活大口黑鲈弹状病毒,制备佐剂灭活疫苗,免疫产蛋鸡,收集高免蛋,制备MSRV卵黄抗体,测定其效价、中和效果及对病毒复制和宿主细胞内凝集素基因(intelectin)表达的影响。结果显示,成功利用草鱼(Ctenopharyngodon idellus)卵巢细胞株CO细胞分离培养大口黑鲈鱼弹状病毒,并用于佐剂灭活疫苗的制备;MSRV佐剂灭活疫苗免疫蛋鸡,成功获得MRSV的卵黄抗体,效价为1∶256,稀释度为1∶64时的中和病毒的作用最为明显,中和作用率达38.29%以上,病毒核酸拷贝数明显降低。同时,还可上调细胞内凝集素的表达。研究表明,特异性卵黄抗体对大口黑鲈弹状病毒具有明显的中和效果,为后续卵黄抗体作为免疫制剂的应用奠定了基础。     

抗鲤疱疹Ⅱ型病毒卵黄抗体制备及其功能鉴定

为制备抗鲤疱疹Ⅱ型病毒(CyHV-2)的卵黄抗体,探索防治异育银鲫(Carassius auratus gibelio)鳃出血病的新方法和途径,本研究利用原核表达系统产生具免疫原性的重组CyHV-2-ORF72衣壳蛋白,纯化后免疫蛋鸡;二次免疫后采用间接ELISA法抽检免疫蛋的特异性卵黄抗体(IgY)含量,收集抗体效价...     

抗大口黑鲈蛙虹彩病毒卵黄抗体的制备及其间接ELISA检测方法的建立

大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus, LMBV)是我国大口黑鲈养殖中的常发病原,主要引起大口黑鲈病毒性溃疡病,制约其养殖业的健康发展。为探究卵黄抗体在防控LMBV中的潜在作用,利用LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡,制备了抗LMBV卵黄抗体;通过筛选捕获物浓度、包被条件和封闭条件,建立了抗LMBV卵黄抗体的间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法;使用构建的方法,评估了LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后卵黄抗体的效价消减规律。结果表明,1‰(φ) β-丙内酯4℃作用72 h可完全灭活LMBV。间接ELISA反应中,每孔包被105 TCID50灭活病毒,37℃孵育2 h后,使用5%(φ)牛血清白蛋白37℃封闭2 h,可有效降低阴性对照组卵黄抗体的背景值;此外,所建立的检测方法与杂交醴弹状病毒卵黄抗体、未免疫的蛋黄提取物和空白细胞不存在交叉反应,特异性较高。LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡约48 d可产生特异性卵黄抗体,免疫后58 d效价升高至峰值(1∶12 800),峰值水平可持续至免疫后128 d。所构建的LMBV卵黄抗体检测方...     

相关链接 卵黄抗体添加剂及其应用

Williams等(1962)发现用某种抗原免疫产蛋母鸡,鸡血清中可产生相应抗体,产蛋母鸡又能以产蛋方式将血清免疫球蛋白有效地转移到卵黄中(Rose和Orlans,1981).鸡血液中能转移到卵黄中的免疫球蛋白只有免疫球蛋白G(IgG),至今尚未发现卵黄中存在免疫球蛋白A和M(IgA和IgM)(胡清林等,1997).因此卵黄中的IgG又称为卵黄抗体或卵黄免疫球蛋白(简称1gG)(Leslie和Clem,1969).与哺乳动物的免疫球蛋白相比,鸡蛋的卵黄抗体具有取材方便、提取方法比较简单、产量高等优点.     

精制禽流感高免卵黄抗体的研究

用禽流感油乳剂灭活苗按一定的免疫程序免疫SPF蛋鸡,制备高免卵黄抗体,用改良的水稀释法对IgY进行纯化,经过抗体效价检测、无菌检验、安全试验、动物试验,该卵黄抗体可以用于田间试验。保存期试验证明:精制禽流感高免卵黄抗体室温条件下可保存10个月,4℃条件下保存15个月,-20℃条件下保存18个月。     

ND高免蛋黄注射液的制备和应用试验

鸡新城疫(以下简称ND),俗称鸡瘟,是由新城疫病毒引起的烈性传染病,是目前危害我国养鸡业的头号传染病。目前虽有疫苗用于预防,但因种种原因,如疫苗失控、操作技术不当、免疫时间问题等,防疫失败的可能性随时存在,在农村散养的情况下,免疫空白经常出现。机体接种活菌、死菌或者类毒素等,可以产生抗体,机体依靠自身的力量获得免疫力,即所谓主动免疫;相反地,机体得到了由其它机体所产生的抗体后,可使自己处于免疫状态,即所谓的被动免疫。根据这一免疫学原理,产蛋母鸡用ND抗原反复数次免疫后,体内可产生较高滴度的特异性抗体,同时储存于卵黄中…     

刺参饲料中添加免疫球蛋白的研究

卵黄免疫球蛋白（Immunoglobulin of Yolk,IgV）,又称卵黄抗体。当用特定抗原免疫产蛋母鸡后,鸡血清可产生大量相应的特异性多隆抗体IgY,并迅速转移和积累（15天左右）于卵黄。IgY分子结构独特,性质稳定,功能多样。目前被广泛应用于生化检测、免疫检测以及食品（主要是婴儿食品）和化妆品等领域。     

利用卵黄监测鳖群中病原菌感染

用从病鳖体内分离的四种病原菌制备诊断抗原, 采用微量凝集试验检测104 份卵黄样品中抗菌卵黄抗体。结果共检出86 份阳性样品, 其中以气单胞菌卵黄抗体阳性样品最多, 阳性检出率为50-96 % 且抗体水平较高, 可达1∶32 。变形杆菌卵黄抗体和不动杆菌卵黄抗体的阳性检出率分别为22-12 % 和9-62 % 。表明鳖场鳖群中有气单胞菌、变形杆菌和不动杆菌感染, 但以气单胞菌感染的范围及强度最高。     

抗哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌三联卵黄抗体的制备及体外抑菌效果的研究

为研究三联特异性卵黄抗体对哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌的体外抑菌效果,通过制备哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血弧菌三联灭活疫苗,免疫蛋鸡。收集鸡蛋制备卵黄抗体并检测其效价、纯度和特异性。通过免疫荧光、扫描电镜和体外抑菌实验初步探究其制备的三联特异性卵黄抗体对三种弧菌的体外抑菌效果。结果显示,ELISA检测特异性卵黄抗体效价高达1:51200,并维持5周;SDS-PAGE对分离纯化的卵黄抗体分析显示,随着纯化步骤的进行,卵黄抗体中的蛋白杂带逐渐减少,纯度变高。免疫荧光和免疫印迹实验表明,特异性卵黄抗体与抗原的结合具有较高的特异性。扫描电镜进一步观察发现,相比非特异性卵黄抗体,特异性卵黄抗体处理过的弧菌,菌体互相黏附在一起,菌体细胞表面粗糙,细胞壁破损。在体外抑菌实验中,特异性卵黄抗体对弧菌具有明显的抑制效果,且抑制作用呈现剂量依赖性。综上所述,本研究制备的三联特异性卵黄抗体能够与哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血弧菌发生特异性结合,通过体外实验发现,卵黄抗体通过凝集和黏附,破坏菌体细胞的完整性,从而发挥抑菌作用。     

卵黄抗体对凡纳滨对虾生长、免疫及抗VpAHPND感染的影响

为探讨特异性卵黄抗体抗致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌 (Vibrio parahaemolyticus associated with acute hepatopancreatic necrosis disease, VpAHPND) 感染的效果及其机制,防控对虾急性肝胰腺坏死病 (Acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND),本研究以添加不同剂量VpAHPND卵黄抗体制剂 (0、0.2%和0.5%) 的饲料投喂凡纳滨对虾幼虾,测定对虾的生长率和存活率、对虾肝胰腺免疫酶活力和免疫基因相对表达水平,通过浸浴感染实验测定免疫对虾抗VpAHPND感染的能力。生长实验结果显示,免疫28 d后,免疫组与未添加卵黄抗体制剂的对照组对虾在平均生长率、特定生长率和存活率方面均无显著性差异。免疫功能实验结果显示,免疫14 d后,与对照组相比,0.2%免疫组对虾肝胰腺的酚氧化酶 (PO)、超氧化物歧化酶 (SOD)、溶菌酶 (LZM) 活力显著升高,抗菌肽 (Crustin) 基因的相对表达水平也显著升高,而β-1,3-葡聚糖结合蛋白-脂蛋白 (β-GBP-HDL) 基因的相对表达水平则显著降低。浸浴感染实验结果显示,0.2%免疫组对虾的存活率显著高于对照组;0.2% VpAHPND卵黄抗体制剂对凡纳滨对虾的相对免疫保护率为63.77%。研究表明,口服卵黄抗体不会对凡纳滨对虾的生长和存活产生不良影响,0.2%的VpAHPND卵黄抗体制剂通过提升凡纳滨对虾的PO、SOD、LZM活力和Crustin基因表达水平,增强凡纳滨对虾的免疫功能,从而提高对虾抗VpAHPND感染的能力,具有很强的应用潜力。本研究为使用特异性卵黄抗体防控AHPND提供了依据,也为其作用机制研究提供了参考。     

口服特异性卵黄抗体对凡纳滨对虾抗WSSV感染的免疫保护效果

为探讨特异性卵黄抗体对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)的免疫保护机制及效果,本研究以添加不同剂量WSSV卵黄抗体制剂(0、0.2%和0.5%)的饲料投喂凡纳滨对虾幼虾,免疫28 d后使用WSSV进行人工感染,测定感染对虾的肝胰腺免疫酶活力和免疫基因表达水平,以及感染后14 d内对虾的存活率。结果显示,WSSV感染3 d后,与未添加卵黄抗体制剂的对照组相比,0.2%免疫组对虾肝胰腺的超氧化物歧化酶(SOD)和酚氧化酶(PO)活力显著升高,酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活力显著降低,热休克蛋白70基因(Hsp70)表达水平显著升高,凝集素基因(lectin)和β-1,3-葡聚糖结合蛋白–脂蛋白基因(β-GBP-HDL)表达水平显著降低;0.5%免疫组对虾肝胰腺的SOD活力显著升高,ACP和AKP活力显著降低,Hsp70基因表达水平显著升高,β-GBP-HDL基因表达水平显著降低。人工感染实验结果显示,WSSV感染14 d后,0.2%和0.5%免疫组对虾的存活率分别为48.89%和87.78%,均显著高于对照组(存活率为0),且0.5%免疫组对虾存活率显著高于0.2%免疫组。特异性卵黄抗体制剂能在一定程度上改变发病的进程,延迟对虾的发病和死亡时间,提高同期存活率。研究表明,口服特异性卵黄抗体制剂可以调节对虾肝胰腺免疫酶活力和免疫基因表达水平,显著提高凡纳滨对虾抗WSSV感染的能力。本研究为卵黄抗体抗WSSV感染机制的研究提供了参考,也为在生产上使用卵黄抗体防控WSSV感染提供了科学依据。     

一起鸡新城疫的诊断与治疗

鸡新城疫也称亚洲鸡瘟、伪鸡瘟或非典型鸡瘟，是由新城疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触的传染病。在兽医临床上，用卵黄抗体治疗鸡传染性法氏囊病比较常见，效果也很好，但用卵黄抗体治疗鸡新城疫的报道却很少。笔者于2003年12月份用卵黄抗体成功地治疗了一起鸡新城疫，现将诊断及治疗经过报告如下：     

中草药对雏鸭病毒性肝炎的防治研究

自制中药“鸭肝灵”散剂防治雏鸭病毒性肝炎试验结果显示:实验室对试验雏鸭攻毒试验中,预防保护率为85%,治疗保护率为80%;临床试验中,预防保护率为83.8%,治疗保护率为80.7%,仅次于鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的防治水平。试验结果表明:用中药散剂“鸭肝灵”防治雏鸭病毒性肝炎具有临床推广应用价值。     

抗犬瘟热高免卵黄抗体IHA检测方法的建立

目前检测卵黄抗体的方法很多,但IHA方法具有简便快速的优点,本研究的目的是为了建立抗犬瘟热高免卵黄抗体检测方法。采用犬瘟热病毒和犬细小病毒二联疫苗处理作为疫苗抗原,用犬瘟热病死犬的肝脏部分处理后作为组织抗原,制备敏化绵羊红细胞,用IHA方法确定了犬二联疫苗抗原和犬瘟热病毒组织抗原的最适含量。二联疫苗提取抗原的含量为0.7 mg/mL致敏红细胞时,与犬瘟热单克隆抗体反应显著,抗体效价为1∶256;而患犬瘟热松狮犬的肝脏组织抗原蛋白浓度为0.5mg/mL,与犬瘟热单克隆抗体反应显著,抗体效价为1∶128。经过IHA验证,制备的松狮犬瘟热肝组织抗原,蛋白含量0.5 mg/mL 1%致敏红细胞,对应的单抗、鸡血清均出现了凝集,阳性对照也出现凝集,阴性对照未出现凝集。建立的IHA抗体检测方法,为准确检测制备抗犬瘟热高免卵黄抗体的效价奠定了基础。     

鸡新城疫与传染性法氏囊病混合感染的诊治

1999年3月成都市郊某种鸡场从西安海兰祖代鸡场购进3000套海兰父母代蛋鸡,7日龄用Ⅱ系+传支二联苗滴鼻,肾传油乳剂苗肌注,14日龄法氏囊饮水首免,21日龄二免时,鸡群发生传染性法氏囊病,经传染性法氏囊卵黄抗体肌注,很快得到控制,死亡5只.45日龄用新城疫+肾型传支油乳苗肌注,鸡痘刺种,转入中鸡笼,当晚刮大风,未引起管理人员重视,导致鸡群感冒,暴发新城疫与传染性法氏囊病混合感染,用法氏囊卵黄抗体肌注,新城疫Ⅳ系苗4倍肌注,病情得到控制,死亡率21%.     

高免卵黄抗体的使用

鸡传染性法氏囊病(IBD)和鸡新城疫(ND)是当前养鸡业中危害最为严重的两大病毒性疾病,而且往往合并发生。目前对这两种病尚缺乏有效的治疗药物,而单靠疫苗预防,往往又受病毒毒株不符,接种时间不准等多种因素影响,而使免疫效果不理想。近几年来,随着养鸡业的快速发展,高免卵黄抗体在生产实践中得到了广泛的推广和应用,它对控制鸡传染性法氏囊病和鸡新城疫这两种疾病取得了良好的效果,但在实际应用时,还应注意以下一些问题:     

卵黄抗体及其在动物疾病中的应用

卵黄抗体(Egg yolk antibody)又称卵黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin,IgY)指用特定抗原对产蛋禽进行免疫,机体刺激法氏囊B细胞分化成浆细胞,分泌特异性的抗体进入血液,血液流经卵巢时特异性抗体主要是IgY在卵细胞中逐渐累积,为胚胎和幼雏提供被动免疫保护。卵黄抗体效价稳定、提取工艺简单方便、成本低、安全高效,在动物疾病防治中有广阔的应用前景。     

褪黑激素主动免疫对蛋鸡产蛋率的影响

实验采用褪黑激素(MLT)抗原主动免疫研究对蛋鸡产蛋性能的影响。结果表明:产蛋高峰期(195日龄)用褪黑激素主动免疫时采用首免0.8mL和首免0.6mL时的产蛋量与对照组相比都有显著提高(P<0.05),特别是第二组的产蛋量比对照组增加1.11kg,提高13.96%。3次主动免疫后通过中和蛋鸡体内的MLT,与对照组相比,每次免疫都可显著提高雌二醇(E2)水平,对孕酮(P)的影响虽不显著,但也有所提高,从而提高MLT主动免疫可增强蛋鸡生殖内分泌功能。     

小体鲟卵黄雌性蛋白分离纯化及抗血清的研制

采用凝胶柱层析法,对小体鲟(Acipenser ruthenusLinnaeus)卵黄蛋白粗提液进行分离纯化。小体鲟卵黄蛋白粗提液的质量浓度为25.04 mg/mL,经Sephadex G-200层析后出现3个蛋白峰。用聚丙烯凝胶电泳、免疫印迹(Western-blotting)和免疫扩散等方法研究表明,小体鲟卵黄蛋白由分子量分别为132.1 kD、97.4 kD、85.9 kD、67.0 kD、59.2 kD、47.6 kD、30 kD、14.3 kD和12.8 kD的9个亚基组成;层析后峰B蛋白为卵黄雌性特异蛋白(yolk female specific protein,YFSP),是一种糖脂磷蛋白,具有雌性特异性和组织特异性,抗体具有种属特异性。Western-blotting结果表明,卵黄雌性特异蛋白(YFSP)与血清雌性蛋白(FSSP)免疫印迹图谱上都显示分子量为97.4 kD和30 kD的2条杂交带,可见两种蛋白在免疫原性上具有相似性,可以用卵黄雌性蛋白抗血清代替卵黄蛋白原抗血清对卵黄蛋白原进行检测