球孢白僵菌植物内生性及其应用特性研究进展

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种广泛应用于农林业害虫防治的昆虫病原真菌,亦有研究证实其对某些植物病原菌存在拮抗作用,是一种双重生防真菌。最新研究表明,球孢白僵菌还可以在自然条件下或通过人工接种定殖于植物体内,其显著的病虫害防治效果和较长的内生持续期为高效生物防治研究提供了新思路。此外,诸多研究表明内生球孢白僵菌可通过以提高植物对营养物质的吸收或引起相关激素的变化促进植物生长、增强植物在生物和非生物胁迫下的抗逆性,还可以与其他有益微生物协作对植物生长与抵御病虫害过程产生积极影响。基于国际最新研究成果,在综述球孢白僵菌内生性生物学机制基础上,总结其作为双重生防真菌在病虫害防治以及促进植物生长中的作用机制,探讨内生球孢白僵菌-其他内生菌-植物之间的互作效应,以期为利用昆虫病原真菌内生特性所展开的深入研究和应用提供理论参考。     

球孢白僵菌防治水稻稻飞虱效果研究

球孢白僵菌防治水稻稻飞虱效果研究表明,400亿孢子/g球孢白僵菌(天定)300 g/hm2防治水稻稻飞虱效果显著,在高密度的虫量下,药后4 d平均防效为90.8%~92.2%,药后12 d平均防效依然达到97.9%~99.0%。可以看出,其速效性好,且持效期长,很好地解决了一般生物农药速效性差、持效期短的缺点。同时,由于其对环境安全,因此该农药是一种高效、低毒、安全、环保的友好型农药,完全可以作为防治水稻稻飞虱的有效药剂,替代甲胺磷等高毒农药进行推广使用。     

球孢白僵菌制剂载体的筛选

通过将１５种不同的供试载体与球孢白僵菌孢子粉以１;１混合,放置５ｄ后,测定混合物中孢子的萌发率。将种种上载体以５％的比例加徼ＰＤＡ培养基,接种培养７ｄ后,分别测定其产孢量和菌落生长速度,通过系统聚类和方差分析,以孢子粉作对照。筛选出高岭土,、滑石粉、铁红、凹凸棒土和硅藻土５种适宜作为白僵菌制剂的载体。     

球孢白僵菌不同菌株分生孢子的耐热能力

    为筛选获得适应我国南方夏季高温的生防菌株,将不同寄主和产地的12株球孢白僵菌(Beauveria bassiana)分生孢子分别悬浮于1 mL萌发液中,接受48℃恒温水浴的热胁迫以逻辑斯蒂方程拟合孢子萌发率随热胁迫时间的衰变过程,将孢子活力丧失一半所需的时间(LT50)作为各菌株对热胁迫反应的特征指标结果表明,对所有测试的球孢白僵菌株,孢子的残存指数均随胁迫时间延长而降低,且供试菌株之间差异显著所测菌株孢子的LT50平均值为126 min(67～212 min),仅1株的LT50高于20min,有4株的LT50低于10 min由此建立的技术体系可用于客观评价各种生防真菌的孢子耐热力     

球孢白僵菌分子生物学研究进展

目前,球孢白僵菌已被广泛应用于农林害虫的生物防治,但球孢白僵菌及其制剂存在击倒害虫时间长、受环境影响较大和防效不稳定等弊端.分别从球孢白僵菌入侵害虫过程中相关酶类(蛋白酶、几丁质酶)基因的克隆与功能分析、转基因菌株构建、抗逆分子生物学等方面对球孢白僵菌的分子生物学最新研究进展进行了阐述,并对其未来发展进行了展望.     

球孢白僵菌防治稻纵卷叶螟效果研究

150亿孢子/g球孢白僵菌可湿性粉剂防治稻纵卷叶螟效果试验表明,生物农药150亿孢子/g球孢白僵菌可湿性粉剂防治水稻稻纵卷叶螟药效显著,施药14d的防效达80%以上,持效期长,且对水稻和有益生物安全,值得大面积推广。     

亚洲玉米螟对球孢白僵菌的细胞免疫作用

本文研究了球孢白僵菌对亚洲玉米螟血细胞免疫系统的影响。结果表明,血细胞主要有原血细胞(PR)、浆血细胞(PL)、颗粒血细胞(GR)、珠血细胞(SP)、类绛色细胞(OE)、囊血细胞(CY)。亚洲玉米螟的幼虫对注射的球孢白僵菌芽生孢子具有强烈的细胞防御能力,表现为包囊作用并伴随对球孢白僵菌的防御反应。总血细胞数(THC)、PL数量、GR数量在短时有一下降,随后数量上升至正常水平的2倍,之后随着时间的延长血细胞数量逐渐下降。包囊还可以将被吞噬或包被的芽生孢子黑化、分解、灭活。     

继代培养对球孢白僵菌抗旱力的影响

检测了球孢白僵菌继代培养中菌落局变产生的分离株在不同湿度下分生孢子的发芽率,结果显示继代培养能增强菌株的抗旱力,但菌株生活力减弱。     

氮素对球孢白僵菌的影响

通过白僵菌发酵与杀虫实验表明氮素对球孢白僵菌的生长、孢子萌发、固体发酵产孢量和毒力均有一定的影响。其中硝态氮对白僵菌的生长和固体发酵产孢量有较大的促进作用,对孢子萌发的影响不大。营养条件不同白僵菌的侵染能力不同。     

球孢白僵菌菌丝体成分及抗氧化活性研究

[目的]研究球孢白僵菌菌丝体的化学成分及抗氧化活性。[方法]利用直接灰分法、苯酚-硫酸法、3-5二硝基水杨酸法、索氏抽提法、酸解法对球孢白僵菌菌丝体的灰分、总糖、还原糖、粗脂肪及氨基酸进行分析。采用水提醇沉法提取了球孢白僵菌菌丝体中的粗多糖,通过构建铁离子螯合能力、DPPH自由基清除活性、还原力3个抗氧化模型,研究菌丝体粗多糖的抗氧化活性。[结果]球孢白僵菌菌丝体样品的灰分、总糖、还原糖、粗脂肪含量分别为6.61%、2.44%、0.90%、5.23%,菌丝体中含有7种必需氨基酸,占所测定的18种氨基酸总量的39.94%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为66.50%。同时,菌丝体粗多糖显示了一定的抗氧化活性。[结论]球孢白僵菌菌丝体中营养成分较全面,并具有一定的抗氧化活性。     

球孢白僵菌在牛蒡苗期的定殖研究

为研究球孢白僵菌在牛蒡苗中的定殖情况,采用浸种法、灌根法处理牛蒡种子,种植后每隔7d取牛蒡苗采用组织研磨涂布法检测球孢白僵菌在牛蒡苗中的定殖情况,研究球孢白僵菌在牛蒡苗不同组织中的分布状况与定殖规律.结果表明,灌根和浸种法均能将球孢白僵菌成功定殖于牛蒡苗中,但浸种法优于灌根法.灌根处理7 d时,牛蒡苗中未检测出球孢白僵菌,14 d时牛蒡苗根、茎、叶中球孢白僵菌定殖量达最大值,随后随着时间的延长定殖量逐渐降低;浸种处理组在出苗第7天时即有球孢白僵菌定殖,随后定殖量下降,在第28天时定殖量又升高;牛蒡种子浸种72 h处理后种植,球孢白僵菌定殖效果优于浸种48 h处理,第28天时72 h浸种组牛蒡苗根、茎、叶中球孢白僵菌定殖量较48 h浸种组分别高34.18％、51.79％和29.66％.     

球孢白僵菌定殖对牛蒡苗生长特性的影响

[目的]研究球孢白僵菌定殖对牛蒡苗生长特性的影响.[方法]采用浸种法将球孢白僵菌定殖牛蒡苗,通过测定牛蒡苗的幼苗生长势、叶面积、生物量等分析了球孢白僵菌定殖对牛蒡苗生长指标的影响,同时通过测定牛蒡苗中PPO、PAL、SOD、CAT、POD的活性考察球孢白僵菌定殖对牛蒡苗抗性的影响.[结果]球孢白僵菌定殖能够显著促进牛蒡幼苗的生长能力并提高根、茎、叶组织中常见防御酶的活性.浸种48和72 h组牛蒡的生长势、叶面积、苗鲜重和生物量均高于对照组,浸种72 h组又优于浸种48 h组,在出苗第28天时,牛蒡苗株高、叶面积、苗鲜重和生物量分别比浸种48 h组提高了2.19％、6.40％、12.08％和9.02％;球孢白僵菌定殖同样提高了牛蒡苗中相关的抗性防御酶活性,浸种48和72 h组牛蒡苗中各种酶活性均显著高于对照组,浸种72 h组牛蒡苗根中酶活性均显著高于浸种48 h组,但茎中PPO、POD、PAL、SOD活性显著高于浸种48 h组,但CAT活性显著低于浸种48 h,叶中PAL、SOD、CAT活性显著高于浸种48 h组,但PPO、POD活性差异不显著.[结论]球孢白僵菌定殖牛蒡苗可促进牛蒡的生长并增强牛蒡的抗性.     

10种白僵菌菌株发酵液对植物线虫和昆虫病原线虫的生物活性

为了获得高效的杀线虫生防菌资源,以山药短体线虫(Pralylenchus sp.)、黄瓜根结线虫(Meloidogyne sp.)为靶标,对10种白僵菌菌株发酵液的杀线虫活性进行测定,同时测定了白僵菌菌株发酵液对昆虫病原线虫小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae All)的生物活性。结果表明,菌株BD-B173、BD-B180、BD-B061-3和BD-B315对山药短体线虫具有高毒力,24 h校正死亡率分别为97.20%、96.50%、91.16%、90.32%;48 h校正死亡率分别为97.30%、97.67%、92.45%、94.40%。菌株BD-B061-3、BD-B198、BD-B118和BD-B173对黄瓜根结线虫具有高毒力,24 h校正死亡率分别为97.47%、91.65%、81.37%、68.92%;48 h校正死亡率分别为98.73%、95.27%、87.53%、96.53%。10种白僵菌菌株发酵液对小卷蛾斯氏线虫24 h及48 h的校正死亡率均不超过10%。说明10种白僵菌菌株发酵液对2种植物线虫的杀虫活性具有特异性,且对昆虫病原线虫小卷蛾斯氏线虫的毒力均较弱。     

球孢白僵菌和布氏白僵菌对甜菜夜蛾的室内毒力测定

采用浸虫法测定球孢白僵菌(ACCC30111)和布氏白僵菌(ACCC30290)在不同浓度下对甜菜夜蛾的室内毒力。结果表明:105~109个/ml孢子浓度的球孢白僵菌和布氏白僵菌孢子悬浮液对甜菜夜蛾均有杀伤作用,相同浓度下球孢白僵菌杀伤力强于布氏白僵菌,其中109个/ml孢子球孢白僵菌处理的甜菜夜蛾在第8 d校正死亡率就达到了100%,其LT50为1.70 d;球孢白僵菌和布氏白僵菌对甜菜夜蛾第3 d的LD50对数剂量分别为8.2955、14.0898,第5 d的LD90对数剂量分别为8.7598、14.6219;经LD比率测定,球孢白僵菌对甜菜夜蛾的毒力明显大于布氏白僵菌。     

植物内生真菌次生代谢产物的多样性及潜在应用价值

近些年来,植物内生真菌由于能够产生丰富多样的具有多种生物活性的次生代谢产物,在自然界中具有重要的生态学作用,受到了全世界的广泛关注并取得了极大进展。本文主要从生物活性角度综述了植物内生真菌次生代谢产物的主要类型,包括植物生长调节(赤霉素等)、杀虫(黑麦草碱)、抑菌(环已烷类等)、抗肿瘤活性物质(紫杉醇等),侧重介绍了一些产活性物质的植物(如红豆杉、长春花、雷公藤、苦皮藤等)内生真菌,并就植物内生真菌次生代谢产物生成的机理"内生共生理论"进行了分析。最后,还对他们在新医药和新农药等药物开发应用中的潜在价值作了探讨。     

球孢白僵菌HsbA蛋白的原核表达及免疫定位

【目的】明确虫生真菌球孢白僵菌（Beauveria bassiana）疏水表面结合蛋白HsbA（hydrophobic surface binding protein A）的致病过程。【方法】对HsbA进行克隆、亚克隆和原核表达,根据纯化后的蛋白制备多克隆抗体并进行抗原性分析,利用免疫电镜对HsbA蛋白进行定位观察。【结果】原核表达系统成功诱导了白僵菌的HsbA融合蛋白,制备多克隆抗体经Western杂交分析表明,该多抗能特异性识别目的蛋白。免疫电镜结果显示,HsbA蛋白在孢子和菌丝中呈随机分布。正常生长状态下,菌丝中的HsbA蛋白数量要明显多于孢子中被标记的数目,此外,孢子在侵染状态和正常生长状态下的HsbA蛋白数量也有显著差异,侵染状态下孢子的HsbA蛋白表达量更高,但菌丝在这2种状态下均呈现高表达。感染虫体中HsbA蛋白被标记的部位集中在体壁。【结论】原核表达实现了HsbA蛋白的高效表达,且制备的多克隆抗体具有较好的免疫原性。此外,免疫定位表明HsbA蛋白与菌丝的生长有关,并在白僵菌致病过程中参与了吸附作用,其作用部位位于昆虫体壁。     

10株白僵菌菌株形态学与分子鉴定

对10株白僵菌属菌株的菌落形态、产孢结构和分生孢子形状、大小作了观察与测量,形态学鉴定为球孢白僵菌。同时对此10株球孢白僵菌核糖体DNA-ITS进行了测序分析,与NCBI数据库中的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)多个菌株的同源性达99.10%～99.64%。依此,10株白僵菌菌株分子鉴定结果为球孢白僵菌(Beauveria bassiana)。     

球孢白僵菌原生质体获得和再生恢复培养条件的研究

对球孢白僵菌菌龄、β-巯基乙醇、溶壁酶、渗透压稳定剂和琼脂粉含量等条件对球孢白僵菌原生质体的获得和再生恢复培养的影响进行了研究,建立了球孢白僵菌原生质体获得和再生恢复培养的最佳体系。原生质体获得的最佳菌龄为培养24~28 h的菌丝体,最佳β-巯基乙醇浓度为0.01 mol/L,最佳酶为真菌溶壁酶,最佳渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl,原生质体获得频率高达99%;原生质体再生恢复时培养基中最佳渗透压稳定剂为0.7 mol/L葡萄糖,最佳琼脂粉质量分数为0.75%,再生频率达57%。     

内生固氮菌HAUM10对水稻的侵染定殖规律及促生效应

试验以从表面灭菌的稗草中分离到的一株内生固氮菌HAUM10为对象,研究发现该菌具有较强的产固氮酶和吲哚乙酸能力.乙炔还原法测定其所产固氮酶的活性为0.824 μmol C2H4/(mL·h),液相色谱法测定其产吲哚乙酸量为15.44 μg/mL.将HAUM10用gfp基因标记后接种水稻,观察其在水稻中的侵染定殖规律,发现在接种后第7天,gfp标记的HAUM10主要定殖于根内通气组织和韧皮部细胞,少量定殖在叶鞘中.盆栽试验表明,HAUM10促进水稻叶绿素合成,有利于光合作用,在水稻生长后期促进氮、磷元素由叶向穗转移.