基因打靶技术及其影响因素

基因打靶是20世纪80年代发展起来的一项新的基因操作技术，本文综述了近年来基因打靶和筛选的几种常用策略及影响基因打靶的一些主要因素。基因打靶在基因动能研究、家畜遗传改良、医学病理模型建立和基因治疗方面应用前景很广。     

基因打靶制备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上，可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器，克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。     

体细胞多位点基因打靶技术的研究

利用多拷贝序列作为靶位点进行多位基因打靶技术的研究，通过显微切割，菌落杂交，Southern杂交等方法获得人类D、G组染色体短臂多拷贝序列（DGMS），然后利用DGMS的构建含Neo/TK基因正负选择系统的基因打靶载体，采用电穿孔，G418和GCV筛选进行Neo基因的基因打靶，并经PCR、FISH定位，Neo基因表达等证实Neo基因定点整合到D、G组染色体短臂且表达，最终建立了一种有效的，多个安全位点的基因打靶技术，该技术可应于体外细胞和动动植物的转基因，甚至人类的基因治疗。     

基因打靶技术的应用研究

简要阐述了基因打靶的概念和基本环节,系统介绍了筛选方法和基因打靶的策略.基因打靶在基因功能研究、家畜遗传改良、人类疾病动物模型的建立和基因治疗等方面有着广阔的应用前景.     

基因打靶备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上,可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。     

基因打靶克隆山羊制备中影响受体妊娠的若干因素

在基因打靶克隆山羊制备过程中，重构胚的制备须经去核、移核、融合、激活、体内培养，发育成桑椹或囊胚回收等过程，重构胚移人受体后是决定最终能否产生克隆后代和提高生产效率的关键步骤。而在非牧区开展山羊基因打靶克隆羊的研制工作中受到场所、环境、羊群体等因素的限制，不可能在质量和数量上得到任意选用的保证。基因打靶体细胞作供核产生的重构胚是十分珍贵的，在移植时如何保证每天     

绵羊FecB基因打靶载体构建

利用peGFP-C1,pRET.IL.PGK-TK和pMD19-T Simple等基本质粒,构建绵羊FecB基因打靶载体。以克隆载体pMD19-T Simple为载体骨架,插入一个正选择标记eGFP基因、一个负选择标记基因HSV-tk基因,并在eGFP基因两侧各添加一个同源长臂和同源短臂,从而构建绵羊FecB基因打靶载体。结果:经多个限制性内切核酸酶酶切鉴定和测序证实,所构建的基因打靶载体符合设计要求,表明成功构建了绵羊FecB基因打靶载体。     

家蚕条件基因打靶技术的建立及应用研究进展

条件基因打靶技术是通过借助位点特异性重组酶和预先引入宿主基因组的重组酶特异识别位点,在宿主特定发育阶段的组织或细胞中实现目标基因时空特异性定点插入、删除、替换和倒位等突变操作的技术。目前条件基因打靶技术已被广泛应用于拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa)、小鼠(Mus musculus)和果蝇(Drosophila melanogaster)等高等真核模式生物的功能基因研究,并逐渐成为转基因动植物研究领域进行基因操作的强有力工具。近年来,国内外多个研究机构系统地开展了家蚕(Bombyx mori)条件基因打靶技术的开发研究,目前已经建立了较为完善的基于多种不同位点特异性重组系统的家蚕条件基因打靶技术平台。本文较为全面地介绍目前最为常用的位点特异性重组系统的组成和作用原理,系统概述基于位点特异性重组系统的家蚕条件基因打靶策略及其应用,并对家蚕条件基因打靶技术存在的主要问题和发展趋势进行讨论。     

基因打靶技术与畜牧业分子育种

本文对基因打靶技术的原理、操作程序以及畜牧业转基因育种进行了综述,并对基因打靶技术在畜牧业育种中的应用进行了初步探讨。     

家畜基因打靶研究进展

将一段DNA片段导入哺乳动物细胞中后，能够定位并且与内源的同源序列重组，这种类型的同源重组叫做基因打靶(gene targting)。基因打靶技术可以用来生产转基因动物。在小鼠胚胎干细胞中应用这一技术已生产出各种不同基因位点的突变体，可对小鼠中特异性基因的表型进行评价。基因打靶技术不只是一种使基因失活的手段，而且可作为一种用来改变基因活性的方法。     

现代猪分子育种技术

简要介绍了影响猪主要经济性状的主效基因和QTL,阐述了标记辅助选择和基因打靶技术的基本方法，探讨了分子育种技术在猪品种繁育中的应用。     

转基因动物制作、鉴定和应用研究新进展

近年来，一些研究者在原有的转基因动物制作方法基础上作了改进，如逆转录病毒注射MⅡ期的卵母细胞，体细胞核移植技术法，精子与外源基因合并注射卵母细胞作为载体法以及基因打靶法等，此外转基因动物鉴定和应用也取得了突破性进展。     

转基因动物研究新进展

近年来，一些研究者在原有的转基因动物制作方法基础上作了改进，获得了一些新的方法，如逆转录病毒注射MII期的卵母细胞，体细胞核移植技术法，精子与外源基因合并注射卵母细胞作为核体法以及基因打靶法等。此外转基因动物鉴定和应用也取得了突破性进展。     

基因打靶技术的研究进展

基因打靶技术是通过外源基因与受体细胞染色体基因组上的序列之间发生同源重组,将外源基因整合到某一特定位点上,从而实现外源基因的定点整合、修饰和改造受体细胞遗传特性的技术。作者简要介绍基因打靶技术的基本原理、产生、筛选策略及该技术的应用等研究进展。     

基因打靶技术及其应用

基因打靶技术是通过将外源DNA的同源序列和活细胞内的染色体DNA发生同源重组，达到定点修饰染色体上某一特定基因的一种分子生物学技术。它与克隆技术的结合发展为畜牧生产中的动物育种工作开辟了广阔的前景，为人类带来更多、更好的食物和药物，人类健康将获得更好的保障。     

世界首例内源性基因敲除猪诞生

近日，从中科院广州生物医药与健康研究院获悉，该院研究员赖良学研究团队与美国密歇根大学心血管研究中心陈育庆团队合作，首次将锌指核酸酶基因打靶技术应用于猪内源性基因敲除研究，成功敲除了猪内源性PPARγ／基因。这项研究在世界上首次建立了PPARγ／基因敲除猪模型，对糖尿病和心血管并发症的研究有重要应用价值。     

基于同源重组的产绿色荧光蚕丝转基因家蚕的制备

采用基因打靶技术对家蚕丝素蛋白基因(fib)进行分子设计与遗传改造,探讨从基因水平改良蚕丝性能的可行性。以家蚕丝素轻链基因(fib-L)终止密码子TAA上游1.2 kb(fib-LL)和下游0.5 kb(fib-LR)片段作为基因打靶载体的左右同源臂,将绿色荧光蛋白基因(gfp)插入到两同源臂的中间,并使其与fib-L基因处于同一读码框,构建基因打靶载体pSK-FibL-L-GFP-FibL-R。将该载体质粒转染BmN细胞后,荧光显微镜下观察细胞呈现绿色荧光,表明载体构建成功。将该载体质粒通过精子介导法导入家蚕品种高白的卵,在G0代筛选出茧呈绿色荧光的家蚕,并通过PCR检测证实其为转基因家蚕;用GFP抗体对G3代转基因家蚕幼虫后部丝腺组织进行Western blotting检测,有分子质量为65 kD的Fib-L-GFP融合蛋白特异性条带呈现。转基因家蚕所产蚕丝在蓝光的激发下发出绿色荧光,表明通过基因打靶将gfp导入了家蚕丝素轻链基因中,并成功实现融合表达。     

动物乳腺生物反应器研究进展

乳腺生物反应器在生产基因工程药物、营养保健品、改变奶成份和基因功能鉴定等方面具有广阔的应用前景，然而，乳腺生物反应器技术还存在诸如基因定点整合率低、动物扩群慢、成本高等不足，与动物克隆和基因打靶等高新生物技术的结合，有望进一步完善和提高该技术。促使其大规模的应用。     

分子营养与动物育种

分子育种是动物育种的一种重要方式，本文介绍了肥胖基因（ob)，肌肉抑制素（Mstn)基因的分离，克隆及其表达，结合基因转移和基因打靶技术进行动物定向育种，并且探讨了近年来研究对动物体磷吸收起关键作用的植酸酶（phyA-as)基因的分离，克隆及其在微生物体内的表达，以期从分子水平把一些营养基因与人类的需要紧密的结合在一起。     

世界首例内源性基因敲除猪诞生

我国科学家首次将锌指核酸酶基因打靶技术应用于猪内源性基因敲除研究,成功敲除了猪内源性PPARγ基因。近日,从中科院广州生物医药与健康研究院获悉,该院研究员赖良学研究团队与美国密歇根大学心血管研究中心陈育庆团队合作,首次将锌指核酸酶基因打靶技术应用于猪内源性基因敲除研究,成功敲除了猪内源性PPARγ基因。