抗禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的研究——禽脑脊髓炎病毒抗原的培养和纯化

为获得用于制备AEV单克隆抗体的抗原，将禽脑脊髓炎病毒（AEV VR）接种于鸡胚成纤维细胞（CEF）盲传，通过间接免疫荧光试验（IFA）监测AEV增殖情况，以第六代CEF培养物作为种毒扩大培养，将其培养物经差速率心后的半提纯物接种6日龄SPF鸡胚、1日龄SPF鸡，再将半提纯物经密度梯度离心后进行PAGE－SDS电泳，电镜观察。结果证实，AEV VR在CEF上增殖成功。     

鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒（DPV34）经12日龄鸭胚连续传2代，收获的尿囊液DPV34F2作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞，连续传代5次。结果，从第2代开始，接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变，随首代次的增加，细胞病变愈加明显。经电镜观察，第5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子；将第5代培养物接种鸭胚，出现典型鸭瘟病变；用PCR方法检测培养物，也出现DPV的特征DNA带。     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶＶａｎＲｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚神经胶质细胞（ＣＥＢ）传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ、ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１∶１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释度１∶１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ、ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＩＶ、Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

禽脑脊髓炎病毒感染鸡胚的病理学研究

６日龄ＳＰＦ鸡胚经卵黄囊分别接种禽脑脊髓炎病毒ＶａｎＲｏｅｋｅｌ株、１１４３株和ＮＨ９３７株，１０日后剖杀。鸡胚主要病变：眼观活动减弱，发育不良，体重减轻，皮下和脑部出血，脑积水和萎缩，脑重量明显减轻；光镜下见中枢神经组织非化脓性脑脊髓炎，腺胃、十二指肠、肝、胰、肾淋巴细胞浸润，骨骼肌萎缩、肌间水肿，其中神经细胞中央染色质溶解具有证病意义；电镜下脑神经细胞胞核淡染，胞浆内近核处粗面内质网崩解，十二指肠上皮细胞、胰岛细胞胞浆内含有约２５～３０ｎｍ密集或散在的病毒颗粒。     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶ Ｖａｎ Ｒｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞和鸡胚神经胶质细胞传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ,ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１：１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释率１：１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ,ＭＤＶ,ＩＢＤＶ,ＡＩＶ,Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特性强且简单,方便经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒

用丹麦产ＮＵＮＣ一次性细胞培养瓶,１９９培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞,结果显示,细胞生长快,贴壁良好,２４ｈ单层细胞即长满瓶底,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞,４ｄ后细胞出现预期的典型病变,并且可见大量多核巨细胞形成,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能,而且说明,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜,形     

用鸡胚敏感试验监测蛋鸡群禽脑脊髓炎

通过鸡胚敏感试验监测了哈尔滨地区１７个蛋鸡群，其中１１／１７（占６４．７％群有免疫力；５／１７（占２９．４％）群最近或过去曾发生本病，但抵抗力已降低；１／１７（占５．９％）群对禽脑脊髓炎病毒攻击易感，１７个蛋鸡群总的阳性率为９５．１％，说明哈尔滨市产蛋鸡群中ＡＥＶ感染是十分广泛的。     

禽脑脊髓炎病毒的分离与初步鉴定研究

通过SPF鸡胚连续快速传代,从自然发病雏鸡脑组织中分离出一株食脑脊髓炎病毒（AEV）,经鸡胚接种,雏鸡接种、琼脂扩散试验和电镜观察,初步鉴定该株病毒为AEV,暂命名为AEV-SD961株。     

利用不同方法培养鸡胚成纤维细胞的研究

采用胰酶消化法和组织块培养法培养了大量优质的鸡胚成纤维细胞,并对培养的细胞进行了冻存和复苏,建立了一套较完备、快速的鸡胚胎成纤维细胞的培养模式。并探讨这两种培养方法的优缺点。     

禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体制备

禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）在患鸡体内含量很低,且细胞培养的复制水平也很低,故对该病毒的研究一直不够深入,国外有关ＡＥＶ单克隆抗体的报告首见于１９９４年［１］。本研究制备了３株抗ＡＥＶ单克隆抗体,为ＡＥＶ的实验室诊断提供了一种简单、快速、可靠的方法,同时...     

10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响

将鸡胚成纤维细胞(CEF)分别与当归多糖(CAPS)、黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪黄酮(AF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙(GS)等10种中药成分一起加入到96孔细胞培养板中培养，分别在培养24、36、48、60、72h时用MTT法测定中药成分对CEF增殖的影响。结果表明，所有中药成分均能显著促进CEF增殖，并有一定的量效和时效关系。     

禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备与初步应用

利用提纯的禽脑脊髓炎病毒（AEV）Van Roekel株作为免疫原，免疫6周龄BALB／c小鼠，采取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA法筛选，间接免疫荧光法（IFA）和免疫组织化学法鉴定，经3次亚克隆得到了稳定分泌抗AEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株F11和G2，制备了腹水，并利用该单克隆抗体初步建立了Dot—ELISA、间接ELISA和IFA等特异性检测AEV抗原的方法。     

几种天然药物成分在体外CEF中最大安全浓度的测定

采用组织细胞培养方法，测试了板蓝根多糖、当归多糖、黄芪多糖、黄芪皂甙、人参皂、淫羊藿多糖、蜂胶多糖、蜂胶黄酮、黄芪黄酮、羊藿黄酮共10种天然药物成分在鸡胚成纤维细胞（CEF）体外培养中的最大安全浓度。结果表明：黄芪多糖、当归多糖对鸡胚成纤维细胞毒性最低，最大安全达1562.5μg/mL，其后依次是板蓝根多糖、人参皂甙、黄芪黄酮、黄芪皂甙、蜂胶黄酮的毒性最大，其最大安全浓度仅4.883μg/mL。多糖成分的毒性较黄酮成分小。     

中草药在鸡胚成纤维细胞(CEF)上对新城疫病毒的作用研究

分离并培养鸡胚成纤维细胞(CEF),并感染新城疫病毒(NDV),通过观察细胞病变,检测在CEF上,复方中草药对NDV的影响。结果表明,中草药对新城疫病毒的中和、预防、治疗作用的最小抗病毒浓度分别是0.061mg/ml、0.244mg/ml、0.976mg/ml。     

Detection of avian encephalomyelitis virus

Methods for the detection of two strains of avian encephalomyelitis virus (AEV) in chick embryo brain cell cultures and chickens were compared. It was found that the agar gel precipitin test (AGPT) and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) carried out on the serum of inoculated chickens were more sensitive than either the indirect fluorescent antibody test in cell cultures or the detection of clinical signs in chicks. On the basis of results obtained in this experiment the effects were then determined of routes and time of inoculation of chickens on the detection of AEV. It was found that birds infected at two weeks old produced higher antibody titres than one-day-old birds and the AGPT and ELISA detected comparable levels of antibody in them. It was recommended that the tests to detect the presence of AEV as a contaminant of vaccines be replaced by a serological test carried out on chicks inoculated intramuscularly at two weeks old.     

鸡病毒性关节炎病毒C-98分离株S1基因的克隆与序列分析

提取鸡病毒性关节炎病毒（AVAV）内蒙古分离株（C-98株）总RNA，参考GenBank中禽呼肠孤病毒（ARV）S1133株S1基因序列设计了2对引物，应用RT—PCR技术扩增了病毒S1基因，将S1基因cDNA克隆到pGEM—T Easy载体后测序。将测定序列拼接后与参考毒株ARV-176、ARV-138、ARV-S1133、MDRV—YJL的S1基因序列进行了比较。结果显示，AVAV C-98分离株的S1基因与强毒株ARV-176株的同源性最高，达99．9％；与MDRV—YJL的同源性为99．3％，与弱毒疫苗株ARV—S1133的同源性也达97．9％；与ARV-138株的同源性最低，为81．2％。表明，AVAVC-98株与参考毒株的差异较小，与疫苗株ARV-S1133有很高的同源性。     

禽脑脊髓炎活疫苗免疫持续期试验

将200009批疫苗分三个剂量组（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ），病毒含量分别为每羽份合500、1000、1500EID50，口服免疫13周龄SPF鸡，同时设进口同类疫苗组（Ⅳ）和未接种空白组（Ⅴ）作为对照。，分别于免疫后7d、14d、17d、21d、28d、42d、56d、70d、84d、105d、126d、149d、169dR血，分离血清，采用IDEXX禽脑脊髓炎抗体检测ELISA试剂盒检测血清中AEV抗体水平，并通过鸡胚易感试验和后代雏鸡试验评价产蛋后鸡群的免疫状态。结果表明，疫苗接种后14d，免疫鸡血清已全部阳转，免后42d时抗体出现第一个峰值，此后一直保持较高水平，并且抗体水平的高低与接种疫苗的病毒含量呈正相关关系。用AEVVR强毒进行的鸡胚易感试验，免后6～55周免疫组鸡胚的感染率在35％以下；后代雏鸡攻毒保护率在92．9％以上。