一种经济快速高效的DNA指纹新技术——TE—AFLP评介

TE－AFLP（Three endonuclease amplified fragment length polymorphism）是由荷兰科学院van der Wurff等于2000年在AFLP基础上发展的一种新的DNA指纹技术。它比常规的AFLP更经济、更快、操作更简单方便，同时更适合于基因组大而复杂的生物。本文介绍和评述TE－AFLP的基本原理、反应程序、操作注意事项和应用前景以及该方法本身优缺点。     

苹果M系矮化砧木AFLP指纹图谱的构建与分析

以我国苹果生产主要使用的５个Ｍ、ＭＭ系矮化砧木基因型为试材,建立了ＡＦＬＰ（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）分析技术体系。从４２对ＡＦＬＰ引物中筛选出了５对多态性高、分辨能力强的引物（即Ｐ４４Ｍ６４、Ｐ５０Ｍ４１、Ｐ６６Ｍ５３、Ｐ６９Ｍ４６和Ｐ８１Ｍ６５）。依据引物Ｐ４４Ｍ６４构建的指纹图谱,区分了供试的５个矮化砧木基因型。根据１３对ＡＦＬＰ引物的扩增     

利用AFLP指纹技术鉴定桑树品种

传统的桑树品种鉴定是以形态学标记为依据，大多数性状易受环境条件的影响，而且，形态学性状常常局限于某一生命时期，给品种鉴定造成了一定的限制。AFLP分析的基本原理是选择性扩增基因组DNA酶切片段。由于不同基因组DNA的酶切位点存在差异，因而产生了扩增片段长度的多态性(Vos et al．，1995)。它既有RFLP的可靠性，又有RAPD的方便性，     

12个地方鸡种遗传多态性的AFLP指纹分析

利用6对AFLP引物组合对中国12个地方鸡种进行了遗传检测，构建了各个品种的AFLP DNA指纹图谱，根据AFLP分析结果, 统计了每个引物组合在各个品种中检测到的多态性条带和特异性条带，计算了12个地方鸡种的遗传相似系数和遗传距离，并据此构建了UPGMA聚类关系图，分析了所研究鸡种的遗传关系。结果表明：6对AFLP引物组合在12个地方鸡种中共检测到279条多态性条带，平均每个引物组合产生46.5条多态性标记，同时在每个品种群体中还检测到了数量不等的特异性条带，其中寿光鸡和东乡黑鸡最多，为9条，旧院黑鸡和兴义矮脚鸡最少，为1条。12 个鸡种聚为3类，鸡种间的遗传相似系数及聚类结果与所保存的地方鸡种的地理分布、现实状况是相吻合的。从而表明AFLP指纹用于我国地方鸡种遗传多态性分析、品种的鉴定及品种间的亲缘关系分析是可行的。     

离子束介导玉米DNA的水稻变异后代AFLP分析

利用离子束介导法将玉米（郑单14）DNA片段转入水稻豫粳6号,经过5年的筛选得到了基本稳定遗传的变异株系。本研究通过对64对AFLP选扩引物的筛选,优选出了18对选扩引物,它们能同时在2个变异株系中扩增出大量的DNA指纹条带,并且同时能扩增出差异带以及“目的带”。用AFLP分子标记初步分析了2个变异株系与对照间的差异,变异株系中出现了新带、缺失带和“目的带”等几种情况,这些DNA水平上的差异,表明离子束介导玉米DNA育成的水稻材料可能已经插入了玉米的DNA。     

水稻三系及其杂种的RAPD指纹图谱分析

从三套三系及它们的杂种共１０个水稻材料无菌苗叶片提取ＤＮＡ，用随机的ＤＮＡ引物分别做ＰＣＲ扩增（ＲＡＰＤ）。扩增产物在琼脂糖胶上电泳产生可重复的指纹图谱。４７％的引物产生的图谱可以把不育系和恢复系区别开来，它们各自的特异带可以作为品种鉴定的分子标记，同时这种标记能够用来检测亲本系间的遗传距离，从而为强优势组合的亲本选配提供分子水平的依据。     

鹌鹑品种（系）的随机扩增多态性DNA指纹分析

本研究以ＧＣ、Ｄ２０、Ｄ１４、Ｆ０７和Ｌ０１为随机引物，分析了五个鹌鹑品种（系）的随机扩增多态性ＤＮＡ指纹，共得到５２条带，其中４０条带（７３％）具有多态性。计算了鹌鹑品种（系）间的遗传距离和群内遗传距离，构建了这些品种亲缘关系的树状图。结果表明：日本鹌鹑和法国Ｓ系的遗传距离最远，鹌鹑品种（系）内的遗传变异较大。     

利用核心简单重复序列(SSR)标记分析无籽西瓜品种的DNA指纹及遗传多样性

为构建无籽西瓜品种的DNA指纹,实现无籽西瓜品种的快速准确鉴定,客观评价品种的遗传多样性,本研究利用核心SSR标记对我国54份无籽西瓜(Citrullus lanatus)主栽品种进行了分析。结果显示,23对多态性引物共扩增出63种基因型,基因型数2～5个不等,平均2.74个;平均多态性信息量(PIC)为0.39,变化范围为0.04～0.67,有5个品种具有特征谱带;54个品种遗传相似系数变化范围为0.643 9～1.0,平均0.859 3,参试品种具有较高的遗传相似性;组合23对引物,除无法区分雪峰花皮无籽与郑抗无籽1号、郑抗新1号与广西3号、黒宝无籽与桂冠1号,其余品种均能一一区分开,利用PIC0.4的10对引物构建了5份主要参试品种的DNA标准指纹图谱;采用类平均法进行聚类分析,在相似系数0.82处,可将54个品种分为7大类。本研究建立了参试品种的标准DNA指纹图谱,为我国无籽西瓜品种的真实性鉴定和知识产权保护提供了技术基础。     

指纹图谱技术在品种鉴定和纯度分析上的应用（综述）

品种鉴定和品种纯度分析与我国粮食生产有密切的关系,采用与推广新技术－指纹图谱技术,不仅有利于防止劣种,假种而且还可以进行杂交亲本鉴定,选配亲本,提高产量。本文综述了指纹图谱技术在品种鉴定和纯度分析上的研究进展,并对指纹图谱技术的应用前景进行了探讨。     

不同环境条件下水稻结实率的QTL定位分析

摘要：为了揭示水稻结实率的遗传机理并为优良基因的利用以及分子标记辅助选择提供理论依据，本研究以环境敏感的籼稻品种T219和不敏感的籼稻品种T226为亲本构建的202个株系的重组自交系(RILs)为作图群体，利用8种不同环境条件的试验结果，对RIL的结实率进行了基因型与环境互作分析和QTL的定位分析。结果表明：水稻结实率受环境的影响很大，存在着显著的基因型与环境互作效应；同时，8种环境共检测到分布在9条染色体上的17个QTL，贡献率变幅为4.6~35.7%。其中大部分QTL均只在一个或两个特定的环境中发现，表现为QTL与环境的互作、贡献率较小，且它们的增效等位基因大都来自T226。而位于第3染色体MRG5959-MRG2180区间的qSS3-1，共在6个环境中一致检测到，贡献率分别在各环境中均为最大（15.6~35.7%）、其增效的等位基因来源于亲本T226。另外位于第5染色体上的RM592-RM169区间的qSS5-3，也在同一年份的5个不同的试验条件下同时发现，贡献率为6.9~17.9%，其增效的等位基因来源于亲本T219。     

Identification of Disulfide Proteins in the Salt Soluble Fraction of Rice (Oryza sativa) Seed

Evidence has been accumulating to suggest that disulfide bonding is one of the key causes of allergenicity. Recently we developed the “disulfide proteome”, a technique for the comprehensive analysis of disulfide bonding of proteins. We applied this new technique to the rice seed's salt‐soluble fraction, which has long been known to be allergenic. Most proteins in the fraction, including α‐amylase/trypsin inhibsitor, α‐ globulin, and glutelin fragments, have formed intramolecular disulfide bonds. Also, unknown proteins, including one sharing similarities with known allergens, had disulfide bonds, from which we can infer possible allergenicity. This is a preliminary study to screen allergens from the basis of disulfide bonding.     

籽粒黄熟度对杂交水稻种子活力的影响

为明确籽粒黄熟度对杂交水稻种子活力的影响,探究杂交水稻高活力种子适宜收获期的感官指标,于2016-2017年以深两优1813、隆两优1813、Y两优1128、创两优华占和Ⅱ优838为材料进行杂交水稻制种,通过不同收获时期形成籽粒黄熟度不同的群体,系统分析了不同籽粒黄熟度群体间种子活力、水分、千粒重及内含物的差异。结果表明,在不同品种间,籽粒黄熟度的增加速率存在明显差异。随着籽粒黄熟度的增加,种子活力先增加后趋于稳定;种子水分先降低后趋于稳定;种子千粒重逐渐增加,但差异不显著;种子的直链淀粉、总淀粉、蛋白质及可溶性糖含量均先增加后趋于稳定。当籽粒的黄熟度为75%～90%时,种子发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数均处于高值水平,且差异不显著;种子水分和千粒重均未达到显著差异。相关性分析表明,籽粒黄熟度与种子发芽率、活力指数呈极显著正相关,相关系数分别为0.870 3^**和0.664 0^**;与种子水分呈极显著负相关(R²=-0.842 4^**),与种子千粒重相关性不显著(R²=0....     

一个水稻木质素单体合成突变体的鉴定及分析

在粳稻品种浙粳88经60Co-γ射线辐照产生的后代中,获得1个茎秆脆弱的水稻突变体浙粳88GH。利用m(a)ule试剂测定木质素成分,与野生型浙粳88相比,浙粳88GH的皮层和维管束木质素单体成分改变。在基因初定位基础上,利用PCR扩增和基因测序对第2条染色体90kb目标区域中候选基因进行分析,证明LOC_Os02g09490基因第1个外显子191位碱基由C突变为G。通过生物信息学方法对到LOC_Os02g09490基因的家族谱、蛋白质三维结构进行分析,并通过qRT-PCR方法检测到LOC_Os02g09490基因在浙粳88根、茎、叶中的组成型表达和在浙粳88GH中极低水平表达。构建2个亚细胞定位载体并通过农杆菌介导的方法在烟草中瞬时表达,第1次试验证明LOC_Os02g09490蛋白定位在细胞核与细胞膜。     

不同粮仓中稻谷优势霉菌的鉴定及差异性分析

为了研究稻谷中优势霉菌的种类、数量以及变化趋势,本试验以湖南省3个不同地区稻谷为研究对象,通过初步判断各粮仓优势霉菌,结合分子生物学方法对其ITS序列进行分析,并对稻谷霉菌进行带菌量测定.结果 表明,3个粮仓中,金牛仓稻谷中优势菌株分别为根霉、米曲霉、毛霉、黑曲霉、烟曲霉、黄曲霉、白曲霉、桔青霉;金山仓稻谷中优势菌株分...     

两系法水稻制种安全期气候分析

选取广东及海南两省有代表性的２７个气象台站的气象资料,统计分析了育性转换安全期和抽穗开花安全期指标。在此基础上进行了１００％、９８％、９５％三种保证率条件下两系水稻制种安全期的气候分析,制作了广东及海南两省制种安全期区划图。提出了两省两系水稻制种的气象依据和应注意的问题。     

指纹技术识别泥沙来源:不确定性研究进展

泥沙指纹技术是近年来研究流域泥沙来源与动态变化的一项重要技术方法,其主要局限性在于诸多的前提假设与实践条件的差异带入了一系列不确定性。泥沙从源到汇的迁移过程受自然环境和人为干扰的影响,其源地特征、迁移路径以及泥沙性质的潜在变化等均是指纹技术应用的不确定性因素,而采样方案设计、指纹选择方法、混合模型应用的一些主观因素进一步增加了不确定性的来源。不确定性分析是泥沙指纹技术的重要组成部分,是评估泥沙来源指纹识别结果可靠性的主要依据。本文综述了泥沙指纹技术的诸多不确定性问题以及主要应对方法的研究进展,总结了当前不确定性定量评估的研究现状并提出了未来的研究展望。     

培矮64S再生稻繁殖种子的初步研究

本项研究结果表明：在桂平的生态条件下,培矮64S于8月6日播种,可在10月18日左右抽穗,但结实率只0．3％;如果把播期提前到6月18日,于9月20日,则再生稻亦10月18日左右抽穗,但结实率可达23．4％,干粒重21g,单株粒重4．5g。因此可见,利用秋季割再生,是繁殖培矮64S种子的一条有效途径。     

贵州地方稻种来拢小圆粒半矮秆突变体srd-1筛选及鉴定

以贵州地方稻种来拢突变体库中能稳定遗传的小圆粒半矮秆突变体srd-1为材料,对其半矮化和小圆粒性状分子机制进行研究.暗形态建成表明srd-1突变体矮化性状与BR无关.srd-1突变体表现对GA敏感,外源GA3对突变体幼苗第2叶鞘有促进生长作用,能诱导α-淀粉酶活性,可以使倾斜方向排列的细胞微管骨架恢复至野生型横向排列方向,表明srd-1突变体矮化性状与GA信号传导途径无关.GA合成途径中关键酶基因OsKS1和OsGA2ox1表达相对于野生型差异不显著,OsCPS、OsKO2、OsKAO、OsGA20ox2和Os GA3 ox2基因表达下调,初步说明srd-1突变体的矮化性状可能是由活性GA生物合成降低所致.此外,小圆粒调控基因SRS1、SRS3和SRS5表达下调,表明srd-1突变体突变基因同时参与了籽粒大小和株高的调控,突变基因影响了活性GA的生物合成和小圆粒调控关键酶基因的表达,进而导致了矮化和小圆粒表型的产生.该研究为突变体突变基因的定位及利用研究提供了参考.