进口鳄鱼霍乱弧菌分离鉴定及药敏试验

在某鳄鱼养殖场抽检的60份进口鳄鱼肛拭子样品中,有12份检出霍乱弧菌。通过生化试验和血清学分型等鉴定,确认12株霍乱弧菌均为非O1非O139群霍乱弧菌。采用18种抗菌药物进行药敏试验,结果显示所有菌株对大多数抗菌药物高度敏感,对四环素等药物中度敏感,对氨苄青霉素和氧呱嗪青霉素不敏感。     

朱鹮铜绿假单胞菌的分离与初步鉴定

从发病死亡朱鹮肝、脾中分离出一株革兰阴性杆菌,经生物学特性试验和生理生化试验鉴定为铜绿假单胞菌.该菌对小鼠有很强的致病性,药物敏感性试验对氯霉素、氧氟沙星、环丙沙星、氧哌嗪青霉素、氟哌酸等抗菌药物高度敏感;对先锋噻肟、氨苄青霉素、复方新诺明等抗菌药物有耐药性.     

广东地区5种优势血清型猪大肠杆菌的外膜蛋白型研究

对从广东地区部分猪场分离的大肠杆菌进行血清型鉴定后,选取优势血清型O₉、O₂₆、O₆₀、O₁₀₁和O₁₀₇的8个致病性较强的分离株,采用超声波裂解、N-十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取大肠杆菌的外膜蛋白（OMP）,利用SDS-PAGE电泳进行OMP分型。结果8个菌株共有3个OMP型（Ⅰ～Ⅲ型）,其中O₂₆、O₁₀₁、O₁₀₇型的3个分离株的外膜蛋白型由1条带组成,为OMP-Ⅰ型;O₆₀、O₁₀₁、O₁₀₇型的4个分离株的外膜蛋白型由2条带组成,为OMP-Ⅱ型;O₉型的1个分离株的外膜蛋白型由3条带组成,为OMP-Ⅲ型。这表明,优势血清型O₉、O₂₆、O₆₀、O₁₀₁、O₁₀₇的分离株OMP型不单一;同一血清型的分离株,存在不同OMP型;而不同血清型的分离株却可有相同的OMP型。     

湖南省永州市规模化猪场猪源大肠杆菌的耐药性调查

为研究猪源大肠杆菌对常用抗菌药的耐药率,试验应用了12种抗菌药物对湖南地区分离的179株猪源致病性大肠杆菌进行了药物敏感性试验。试验结果显示,猪源大肠杆菌分离菌株对目前常用和应用时间较长的抗菌药物,如四环素、氨苄青霉素、恩诺沙星、阿莫西林、链霉素等产生了非常严重的耐药性。猪源大肠杆菌分离株对于一些新药和未大量应用于猪场的药物如安普霉素、丁胺卡那霉素等则比较敏感。细菌耐药性与用药情况密切相关。     

异育银鲫非O1/非O139群霍乱弧菌的分离及鉴定

为鉴定引起异育银鲫发病的疫情的病原,本研究从病鱼体内分离到细菌分离株,经动物回归试验证明为导致异育银鲫发病的致病原.对病原菌株进行形态学、生理生化测定以及16S rDNA序列分析,显示该菌株与霍乱弧菌(Vibrio cholerae)表型特征一致,而且在系统发育树中也是与霍乱弧菌相聚类,两者16S rDNA序列相似性高达99.93％.综合表型特征与基因序列分析的结果表明,该病原菌株应归属于霍乱弧菌.血清型鉴定为非O1/非O139群霍乱弧菌.药物敏感性试验结果显示该株霍乱弧菌对喹诺酮类、头孢类、氨基糖苷类、大环内酯类,四环素类以及β-内酰胺类等药物敏感.     

甜叶菊绿原酸增强大肠杆菌感染蛋雏鸡免疫力研究

旨在评价甜叶菊绿原酸增强人工腹气囊感染大肠杆菌O₇₈蛋雏鸡免疫力的作用效果,为功能性抗生素替代品研发提供基础参数支持。本试验随机将1日龄、体重无显著差异的健康海兰蛋鸡360只分为6组：空白对照组（C）、大肠杆菌O₇₈处理组（EC0）、1.0 g·L^-1杜仲素+大肠杆菌O₇₈处理组（ED1）、1.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC1）、2.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC2）、4.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC4）,预饲7 d后开始正式试验。第7天时将大肠杆菌O₇₈通过腹气囊感染蛋雏鸡,饮水投喂药物,每天1次,连用3 d。随后通过ELISA法检测血清IL-1β、IL-2、IL-6、IgM、IgA、TNF-α水平;RT-qPCR检测空肠和回肠IL-1β、IL-2、TNF-α、Claudin-1和ZO-1基因表达;高通量测序分析盲肠内容物微生物种类。结果显示：1）腹气囊感染大肠杆菌O₇₈显著增加了蛋雏鸡死亡率（P<0.05）,而甜叶菊绿原酸处理组（EC2、EC4）蛋雏鸡的死亡率显著降低（P<0.05）。2）甜叶菊绿原酸对大肠杆菌O₇₈感染蛋雏鸡血清IgA和IgM含量有提高趋势,可不同程度降低血清炎性因子含量,其中EC1、EC2、EC4组血清TNF-α含量显著降低（P<0.05）;EC2显著降低大肠杆菌O₇₈感染蛋雏鸡回肠促炎细胞因子IL-1β、IL-2、TNF-α的基因表达（P<0.05）。3）甜叶菊绿原酸可促进蛋雏鸡空肠紧密连接蛋白基因表达,改善腹气囊感染大肠杆菌O₇₈对肠道屏障的损伤。4）腹气囊感染大肠杆菌O₇₈导致鸡肠道特有OTUs增加,增加肠道拟杆菌门、变形菌门和梭杆菌门的相对丰度,降低厚壁菌门的相对丰度;而甜叶菊绿原酸处理组（EC2）蛋雏鸡盲肠厚壁菌门的相对丰度升高,拟杆菌门和变形菌门的相对丰度降低。甜叶菊绿原酸可增强腹气囊感染大肠杆菌O₇₈蛋雏鸡机体的免疫功能,抵御大肠杆菌O₇₈对蛋雏鸡的侵袭,其中应用剂量为2.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸的效果较好。这预示绿原酸具有抗生素替代品的功效,其对大肠杆菌感染蛋雏鸡机体免疫力的积极作用可能是通过调控免疫相关基因和维持盲肠微生物菌群稳态达到的,但其作用机制仍需深入的研究。     

酸马奶源发酵乳杆菌对致病性大肠杆菌O8的体外抑菌研究

为了探究天然发酵酸马奶中发酵乳杆菌对致病性大肠杆菌O₈（E.coli O₈）的抑菌机理,本试验从酸马奶中分离筛选出抑菌效果最佳的菌株,对其进行16S rDNA序列鉴定,经NCBI网站BLAST对比鉴定菌种;对菌株进行培养发酵,制备无细胞发酵上清液（CFS）;通过排酸、排过氧化氢（H₂O₂）、不同蛋白酶处理等方法初步确定CFS中的抑菌活性物质性质及其含量;采用牛津杯法和二倍稀释法确定CFS对致病性E.coli O₈ 24 h生长曲线的最佳抑菌浓度;试剂盒法测定CFS对致病性E.coli O₈的细胞膜和细胞壁通透性的影响。结果显示,从酸马奶中分离出22株对致病性E.coli O₈有抑制作用的菌株,对抑菌作用最好的菌株进行16S rDNA序列鉴定及系统进化树分析后确定其为发酵乳杆菌属;CFS中主要的抑菌物质为蛋白,含量为399.5 μg/mL;最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）分别为25.0和49.9 μg/mL;CFS能使致病性E.coli O₈的碱性磷酸酶（AKP）含量在1 h内快速升高,之后呈缓慢增长趋势,且使致病菌培养液中的蛋白含量明显升高。综上所述,发酵乳杆菌CFS的主要抑菌物质为蛋白,蛋白浓度越高抑菌能力越强;CFS通过破坏或改变致病性E.coli O₈细胞膜和细胞壁的通透性,使其释放出AKP和胞内蛋白,从而在短时间内起到抑制致病性E.coli O₈生长的作用。     

鸭疫里默氏杆菌的共感染情况调查

为了调查山东省鸭疫里默氏杆菌病与其他疾病的混合感染情况,对从山东省6个肉鸭养殖较多县(市)收集到的118份样品进行了大肠杆菌、沙门氏菌和鸭病毒性肝炎的分离鉴定。结果显示,鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌单独感染分别占到样品总数的21.18%和11.86%,鸭疫里默氏杆菌与大肠杆菌和鸭病毒性肝炎的双重感染最为普遍,分别占到样品总数的38.14%和18.64%,鸭疫里默氏杆菌、鸭大肠杆菌、鸭病毒性肝炎的三重感染占到样品总数的6.78%。其中,鸭大肠杆菌的优势血清型为O₇₈和O₉₂,分别占总分离株数的16.90%和15.49%,其次是血清型O₉₃和O₁₄₂,分别占到总分离株的11.27%和8.45%。     

1株羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了确定和分析新疆某羊场患呼吸道疾病病例的细菌性病原，采集病死羊的肺脏、胸腔积液等样品进行细菌分离，通过生化试验、16S rRNA基因测序、特异性引物PCR鉴定、药物敏感性试验、毒力基因测定、对小鼠半数致死量(LD₅₀)测定等方法对分离株进行生物学特性研究。结果显示，从病羊胸腔积液中分离鉴定出一株荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌，将其命名为Pmh7。Pmh7对链霉素、头孢呋辛等10种抗菌药物敏感，对万古霉素、杆菌肽等5种抗菌药物耐药；携带6个毒力基因(fimA、nanB、ompH、sodC、Oma87、sodA),对小鼠的LD₅₀为2.3×10~6 CFU。结果表明，引发该羊场呼吸系统疾病的病原为荚膜D型多杀性巴氏杆菌，有较强的致病性。本研究结果可为防治羊巴氏杆菌病提供参考，为巴氏杆菌病的流行病学监测奠定基础。     

防治奶牛乳房炎中药组方的筛选及其抑菌杀菌作用研究

试验根据中兽医治疗奶牛乳房炎的辨证施治原则,筛选出抑制引起奶牛乳房炎主要病原菌（金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）的最佳中药组方,为其临床防治提供新的途径与方法。选用蒲公英、马齿苋、金银花、紫花地丁、赤芍、白芍、菊花、黄芩、漏芦、红花10味中药,通过L₁₂（2¹¹）正交试验初步筛选抗菌中药组方中的最佳优选因素,再通过L₁₆（4⁵）正交试验进一步筛选药物组方配比;采用牛津杯法测定中药组方对奶牛乳房炎主要致病菌的体外抑菌效果;采用二倍稀释法和平板计数法分别测定中药组方对奶牛乳房炎主要致病菌最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示,通过L₁₂（2¹¹）正交试验初步筛选出了抗菌中药组方最佳优选因素：赤芍、黄芩、红花、菊花和白芍;L₁₆（4⁵）正交试验进一步筛选药物组方最佳配比为黄芩：赤芍：菊花：白芍：红花=3：3：3：1：2;新药组方对大肠杆菌的抑菌直径为17.39 mm,MIC和MBC分别为62.50、125.00 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为25.44 mm,MIC和MBC均为31.25 mg/mL。本研究成功筛选出了一种对奶牛乳房炎主要致病菌具有良好抑菌、杀菌作用的中药新配比组方。     

天津市水产养殖动物霍乱弧菌携带情况调查

从2008年4月至11月,对天津市11种水产养殖动物进行霍乱弧菌检验,共取得样品211份,其中携带霍乱弧菌的样品36份,检出率为17.1%,经血清凝集试验证明都为非O1霍乱弧菌。在11种水产养殖动物中,以南美白对虾霍乱弧菌的检出率最高,为25.0%;鲤鱼和金鱼次之,分别为7.7%和5.3%;其他8种水产养殖动物中未检出霍乱弧菌。     

1株鸭源非O1/O139群霍乱弧菌的分离鉴定与致病性分析

为探明引起贵州省某鸭场雏鸭发病的病原及其致病性和耐药情况，本研究对该鸭场送的疑似细菌感染病鸭进行剖检，取鼻黏膜、心脏和肝脏等组织器官接种于培养基中进行细菌分离鉴定，通过对分离菌进行药敏试验、动物回归试验和毒力基因检测研究其耐药情况和致病性。结果显示，分离菌在血琼脂培养基上生长16 h后呈现为边缘整齐、有光泽的乳白色菌落，伴有β-溶血现象，经革兰氏染色后在生物显微镜下呈两端钝圆、弧状、排列无规则的革兰氏阴性短小杆菌，与霍乱弧菌相符；16S rDNA基因序列同源性及系统进化树显示，该分离菌与霍乱弧菌同源性高达99.6%~99.7%聚为一支；药敏试验结果显示，分离菌对大部分药物都表现为耐药，其中对氨苄西林、克林霉素、复方新诺明、苯唑西林和克林霉素等抗菌药耐药性较强，对头孢哌酮和头孢曲松敏感；动物回归试验显示，分离菌可导致试验组雏鸭5 d内全部发病死亡，表明该分离菌对雏鸭具有较强的致病性；毒力基因PCR检测结果显示，检测的霍乱弧菌相关毒力基因hlyA、ompW和chxA为阳性，而检测的O1群rfb、O139群rfb、tcpA及ctxA基因为阴性，表明本次分离的霍乱弧菌携带有致病基因，但不属于O1和O139血清群。结果表明，该鸭场雏鸭发病的疫情病原为非O1/O139血清群霍乱弧菌，该菌致病性强且对多种抗菌药物耐药。本试验结果为贵州省鸭霍乱弧菌病的防控提供了参考依据。     

北海近岸养殖海域3种弧菌的分离鉴定及耐药性分析

对北海近岸养殖海域的3种弧菌(Vibrio)进行了分离鉴定,并对鉴定的弧菌进行耐药性分析。通过从北海近岸养殖海域随机采集水样,利用TCBS培养基对所采水样进行弧菌的分离和纯化,采用PCR方法和序列分析对弧菌进行鉴定,并对鉴定出的3种弧菌进行了常用抗菌药物耐药性的检测。共分离获得67株疑似弧菌菌株,经鉴定,19株为副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus),4株为霍乱弧菌(Vibrio cholera),4株为河流弧菌(Vibrio fluvialis)。耐药性分析研究表明,19株副溶血性弧菌总体显示对10种常用抗菌药物具有耐药性,其中100%的菌株对四环素、卡那霉素和红霉素表现耐药,94.7%的菌株对氨苄西林耐药、84.1%的菌株对左氧氟沙星和78.9%的菌株对环丙沙星耐药;4株霍乱弧菌和4株河流弧菌对10种抗菌药物的耐药性均较强,但敏感度低,两者对复方新诺明均表现为中介敏感。本研究提示,北海近岸养殖海域中弧菌种类较多,其中以副溶血性弧菌为主,大多对常用抗菌药物具有耐药性,对北海近岸海水养殖疾病防治具有一定的指导意义。     

Prevalence and diversity of Aeromonas and Vibrio spp. in coastal waters of Southern Italy

A survey was undertaken to examine sea water and sediment for the presence of Vibrio and Aeromonas spp. along approximately 900 km of coast in Southern Italy during early and late summer. A quantitative analysis was also done to evaluate the water fecal contamination at the stations examined. The results indicate that all the investigated areas were submitted to a wide spatial fluctuation of fecal contamination and that Vibrio and Aeromonas spp. were present in both high and low fecal-contaminated stations. Sixty two percent of the investigated samples were positive for Aeromonas spp., while 42% of samples were positive for Vibrio spp. It was interesting to note that 38% of the positive stations for both Aeromonas and Vibrio spp. showed a fecal coliform contamination of water at < 10(2) cells 100 ml(-1). Thus, these findings support the hypothesis that the bacterial indicators (such as fecal coliforms) do not always satisfactorily reflect the hygienic quality of water. The presence of Vibrionaceae on copepods was also investigated. Copepods were sampled at a station located inside the harbour of the city of Naples and were found contaminated by V. cholerae non-O1, V. alginolyticus, V. fluvialis and A. caviae. Furthermore, the antibiotic resistance patterns of isolated bacteria showed the presence of a number of resistant strains among the isolates. In order to discriminate the isolates on the basis of their biochemical profiles and/or antibiotic resistance patterns, cluster analysis was carried out which showed that no unique assay could fully discern these isolates. However, the best discrimination resulted from complete pattern profile based on both biochemical profiles and antibiotic resistance patterns.     

我国部分地区乳房炎奶样中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解我国部分地区奶牛乳房炎奶样中大肠杆菌的耐药情况,以指导牛场合理使用抗生素,提高治疗效果和畜产品质量,从全国六个省市自治区采取158例奶牛乳房炎的奶样,对奶样中的大肠杆菌进行分离纯化与鉴定,并进行药敏试验。结果显示,158份奶样中,共分离出38株大肠杆菌,其中黑龙江18株(分离率为36.0%)、上海3株(分离率6.0%)、北京3株(分离率27.2%)、新疆10株(分离率33.3%)、山东4株(分离率26.7%)、陕西0株(分离率0)。药敏试验显示,磺胺异噁唑耐药率最高,为73.7%;环丙沙星、诺氟沙星、四环素、链霉素药物的敏感率最高,为100%。分离菌株最多耐13种药物,最少耐4种药物,呈现多重耐药性。不同种类的抗生素中,上海和山东对β-内酰胺类药物和氯霉素类药物以及黑龙江、上海和新疆对磺胺类药物的耐药情况比较严重,耐药率高达50%以上。结果表明,各地区分离株对多种抗菌药物产生了不同程度耐药性和多重耐药,临床兽医在治疗时应注意合理用药,提高疗效和畜产品质量,减少耐药性的产生。     

桉叶、地榆、乌梅体外抗菌相互作用研究

研究桉叶、地榆、乌梅的体外抗菌作用及其相互影响。采用平皿打孔法和试管二倍稀释法测定桉叶、地榆、乌梅单药水煎液,以及桉叶地榆、桉叶乌梅、地榆乌梅混合液和桉叶、地榆、乌梅混合液对金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌（非O1群）、溶藻弧菌、蜡状芽孢杆菌的药物敏感度、最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）。试验结果显示,桉叶、地榆、乌梅单药及其两两对药和三药混合液对供试菌株均表现良好抑菌作用;单药以乌梅抑（杀）菌作用最强,桉叶次之,地榆最弱,地榆对乌梅的体外抑（杀）菌作用显示拮抗作用;对药混合液和三药混合液的体外抑菌作用与单药相似或稍强。     

鸽致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药基因的检测

江苏省某鸽场鸽群出现呼吸困难,死亡增多现象,剖检病死鸽,呈现气囊炎、腹膜炎和皮下广泛性出血等病变。无菌采集脾脏、肺脏等脏器进行病毒分离,但未分离到病毒。选取健康鸽和病鸽各10只,测定新城疫抗体,其抗体水平均较高。同时,无菌采集病料分离到2株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性鉴定,确定为大肠杆菌,玻板凝集试验表明C株为O163型,D株为O138型。对分离到的细菌做药敏试验,结果表明,C株对链霉素等8种药物产生了耐药性,对氟苯尼考等4种药物敏感;D株对庆大霉素等5种药物产生耐药性,对链霉素等7种药物敏感。分别设计引物对其耐药基因进行PCR检测。     

Occurrence and characterization of verocytotoxigenic Escherichia coli (VTEC) strains from dairy farms in Trinidad

A cross-sectional study was conducted to determine the prevalence and characteristics of verocytotoxigenic Escherichia coli (VTEC) on 25 dairy farms each located in Waller field and Carlsen field farming areas in Trinidad. On each selected farm, faecal samples were collected from milking cows, calves and humans; rectal swabs were obtained from pet farm dogs; bulk milk was sampled as well as effluent from the milking parlour. Escherichia coli was isolated from all sources on selective media using standard methods. Isolates of E. coli were subjected to slide agglutination test using E. coli O157 antiserum, vero cell cytotoxicity assay to detect verocytotoxin (VT) and heat labile toxin (LT) production, the polymerase chain reaction (PCR) to detect VT genes, and the dry spot test to screen for E. coli O157 and non-O157 strains. In addition, faecal samples from animal and human sources were tested for VT genes using PCR. Of a total of 933 E. coli isolates tested by the slide test, eight (0.9%) were positive for the O157 strain. The vero cell cytotoxicity assay detected VT-producing strains of E. coli in 16.6%, 14.6%, 3.2% and 7.1% of isolates from cows, calves, farm dogs and humans respectively (P < 0.05; chi(2)). For LT production, the highest frequency was detected amongst isolates of E. coli from calves (10.8%) and the lowest (0.0%) amongst isolates from humans and bulk milk (P < 0.05; chi(2)). Of the 61 VT-producing isolates by vero cell cytotoxicity assay tested by PCR, the VT, LT and eae genes were detected in 62.3%, 4.9% and 1.6% respectively (P < 0.05; chi(2)). Amongst the 45 E. coli isolates that were VT positive (vero cell) or VT-gene positive by PCR, 2.2%, 2.2%, 4.4% and 6.7% belonged to non-O157 strains O91, O111, O103 and O157, respectively, as determined by the Dry spot test. Detection of VTEC strains in milk and dairy animals poses a health risk to consumers of milk originating from these farms. In addition, the demonstration of VTEC strains in humans, VT gene in faecal samples and E. coli isolates as well as non-O157 VTEC strains of E. coli are being documented for the first time in the country.     

致病性大肠杆菌耐药性与其质粒相关性研究

对本地临床分离的20株致病性大肠杆菌进行耐药性检测和质粒检测。耐药性检测结果显示,受检20株致病性大肠杆菌对临床常用5种抗菌药物均表现为耐药,大肠杆菌耐药程度及多重耐药现象较为严重。质粒图谱分析结果表明,在大肠杆菌耐药性菌株中,尤其是耐药程度较高且呈多重耐药的菌株中,耐药质粒的检出率较高。实验结果提示:致病性大肠杆菌耐药性与其耐药质粒存在密切相关。     

藏香猪源大肠埃希菌致病性和血清型检测及药敏试验

为了解四川省藏香猪源大肠埃希菌致病性、血清型及耐药性情况,从四川省藏香猪养殖场中无菌采集腹泻仔猪肝脏、肛拭子及粪便等组织病料253份中,分离得到155株大肠埃希菌。采用人工感染小鼠致病性试验、玻板凝集试验和KB药敏纸片法分别测定155株大肠埃希菌分离菌株的致病性、血清型及耐药性。结果显示,小鼠致病性试验表明155株分离菌中120株有致病性;玻板凝集试验表明120株致病性大肠埃希菌分离株属于14个血清型,以O111、O147、O109和O119为主要流行的优势血清型;耐药性试验表明120株致病性大肠埃希菌分离株对阿莫西林、氨苄西林、新霉素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药较严重,耐药率在94.2%~98.3%之间,对庆大霉素、氟苯尼考、多西环素等6种药物耐药率在44.2%~85.0%之间,对其他药物耐药率在15.0%~37.5%之间。说明该地区藏香猪源致病性大肠埃希菌血清型呈多样性分布,耐药性严重。