新疆哈密瓜病毒病的免疫电子显微镜诊断

 研究了免疫电镜技术在新疆哈密瓜病毒病诊断中的应用。预先用黄瓜花叶病毒(CMV)、西瓜花叶病毒-2(WMV-2)和南瓜花叶病毒(SqMV)的抗血清处理的电镜载网可以分别捕获到大量的CMV、WMV-2和SqMV的病毒粒子。不同抗血清处理的电镜载网对病毒粒子的捕获具有严格的专一性。抗血清处理过的电镜载网可以贮存于4℃冰箱中达1个月之久仍然具有良好的捕获病毒粒子的能力。一个样品的全部检测程序可以在约30分钟内完成。这些结果肯定了免疫电镜技术在检测CMV、WMV-2和SqMV时是有效的,并为进一步研究新疆哈密瓜病毒病的流行规律提供了迅速、准确的手段。     

用聚乙二醇沉淀法粗提纯植物病毒

南方菜豆花叶病毒(SBMV)经两次PEG沉淀提纯的粗提纯病毒制剂和经密度梯度提纯的精提纯病毒制剂,在电镜下均能观察到大量的球状病毒,且均具有典型的核蛋白吸收图谱。两种方法提纯的病毒制剂免疫家兔,都能制备出效价高达1/1024(免疫双扩散法)的抗血清。此外,烟草花叶病毒(TMV),黄瓜花叶病毒(CMV),马铃薯Y病毒(N株系)(PVY~N),苜蓿花叶病毒(AMV)和烟草坏死病毒(TNV)用PEG沉淀法粗提纯病毒也均获得良好的效果。     

新疆哈密瓜病毒病毒源的分离和鉴定

新疆哈密瓜是驰名中外的特产,是我国重要的外销产品之一。五十年代末,六十年代初,由于病毒病的感染,使哈密瓜产量降低,含糖量下降,严重地影响了哈密瓜的产量和质量。 1980～1981年,在新疆石河子,吐鲁番和昌吉等地进行调查时,在哈密瓜和其它瓜类上采集病毒病标样19个,通过鉴别寄主,血清学和电子显微镜的鉴定,把19个标样分为两大类。一类寄主范围广,除侵染葫芦科外,还侵染豆科、茄科、藜科、菊科等多种植物,与黄瓜花叶病毒(CMV)血清发生明显沉淀反应,电镜下观察为球形粒体,确定为CMV的一个株系,另一类寄主范围狭窄,除侵染葫芦科外,还侵染豆科、藜科。电镜下形态为长线条状。与WM-V-2血清发生反应,应为西瓜花叶病毒2号(WMV-2)。WMV-2是哈密瓜病毒中发生最严重的毒源。占田间病株90％以上。     

哈密瓜花叶病毒病的防治研究简报

哈密瓜在新疆各地广泛栽培,有160多个栽培品系,种植面积多达25万亩。但是近十年来病毒病害的流行日趋严重,对哈密瓜的产量和品质影响十分严重,病株滞长,病果畸形,含糖量降低,香味减弱。我们在分离鉴定侵染哈密瓜病毒种类的基础上,针对目前流行的主要三种病毒,即西瓜花叶病毒(WMV-2),黄瓜花叶病毒(CMV)和南瓜花叶病毒(SqMV)的传播途径和理化性质,采取有效措施,干扰破坏病毒流行的必要环节来进行防治。现将1980～1983年各项防治试验及其结果简报如下。     

棉花抗枯萎病品种抗性稳定性初步研究

病原学研究证明新疆哈密瓜花叶病主要由西瓜花叶病毒2号(WMV-2)、黄瓜花叶病毒(CMV)、南瓜花叶病毒(SqMV)引起,大田发病以 WMV-2为主。研究证明 WMV-2的介体主要为麦二叉蚜、苜蓿蚜、桃蚜、伞形蚜,其次是麦长管蚜、叶虫甲。CMV 的介体有桃蚜、苜蓿蚜、伞形蚜。SqMV 的介体为叶(虫甲)。哈密瓜在田间感染病毒的时间与上述蚜虫开始迁飞的时间有相关性。有翅蚜的发生、消长与田间发病成正相关。6月份降雨量与病害发生,有翅蚜消长成反相关。据五家渠、昌吉等地区调查,WMV-2的自然寄主有蚕豆、豌豆、西葫芦,它们的发病时间比甜瓜早。     

新疆哈密瓜病毒类型及分布

 1981-1984年对新疆主要瓜产区的病毒发生情况进行了调查,可归纳为6个病毒类型。除1类型尚需进一步鉴定外,其他5类型分别属于黄瓜花叶病毒(CMV)、西瓜花叶病毒二号(WMV-2)、南瓜花叶病毒(SqMV)、烟草坏死病毒(TNV)和甜瓜叶脉坏死病毒(MVNV)。在大流行的1983年WMV-2和CMV,WMV-2和SqMV,CMV和SqMV以及WMV-2、SqMV和CMV的混合侵染率比1982年为高。各类型病毒的侵染率在不同地区也有较大的变化。     

北京地区辣椒病毒病毒原种类及黄瓜花叶病毒株系鉴定

近十年来,经鉴定,明确了北京地区辣椒病毒病毒原有7种,即黄瓜花叶病毒(CMV)占病株样品的55％,烟草花叶病毒(TMV)占26％,马铃薯Y病毒(PXY)占13.2％,烟草蚀纹病毒(TEV)占11.8％,马铃薯X病毒(PVX)占10.4％,苜蓿花叶病毒(AMV)占2％,及蚕豆萎蔫病毒(BBWV)占1.4％。其中CMV可划分为4个株系,即重花叶株系,坏死株系,轻花叶株系和带状株系。     

新疆、甘肃甜瓜病毒病的鉴定及防治

对甘肃、新疆两省(区)186个厚皮甜瓜病毒病标样的鉴定结果表明,病毒种类有黄瓜花叶病毒(CMV)、西瓜花叶病毒2号(WMV-2)和南瓜花叶病毒(SqMV)。其中WMV-2是主要病毒种类。不同地区或同一地区不同年份各个病毒的消长有较大的变化。桃蚜(Myzus persicae)、豆蚜(Aphis craccivora)及麦二叉蚜(Schizaphis graminum)可传播WMV-2,其中桃蚜的传毒效率最高。棉蚜(Aphis gossypii)可传CMV。种广可传带SqMV,其带毒率为7.6%。对1300个甜瓜品种及材料的抗病性试验结果没有发现任何免疫和抗病类型,但白兰瓜类型较哈密瓜类型抗病,薄皮甜瓜较厚皮甜瓜抗病,其中中国梨瓜龙田一号发病很轻。覆盖银灰膜、喷高脂膜及种植高粱隔离诱杀带等综合防治措施可使发病率减少82.0%,增产15.7—40.5%。     

大豆花叶病毒的酶联免疫吸附剂测定(ELISA)

 大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus简称SMV),经聚乙二醇沉淀、差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯后免疫家兔。得到效价为512-1024的抗血清。免疫球蛋白IgG以饱和硫酸铵沉淀和DE32柱层析提纯,用过碘酸盐氧化法制备标记抗体。ELISA测定方法为双抗体夹心法。     

北京地区辣椒病毒病毒原种类及黄瓜花叶病毒株系鉴定

近十年来,经鉴定,明确了北京地区辣椒病毒病毒原有7种,即黄瓜花叶病毒(CMV)占病株样品的55％,烟草花叶病毒(TMV)占26％,马铃薯Y病毒(PXY)占13.2％,烟草蚀纹病毒(TEV)占11.8％,马铃薯X病毒(PVX)占10.4％,苜蓿花叶病毒(AMV)占2％,及蚕豆萎蔫病毒(BBWV)占1.4％。其中CMV可划分为4个株系,即重花叶株系,坏死株系,轻花叶株系和带状株系。     

京郊葫芦科作物花叶病毒的类型初报

从1957到1958年,在北京都区进行了瓜类作物花叶病毒的调查研究。在记述病作物症状的同时,还采集了各类花叶病株的标样,进行了病毒的常规鉴定。西葫芦的花叶病是一个严重的病毒病,鉴定的结果证明其毒原主要为典型的甜瓜花叶病毒(MMV),而且能侵染西瓜而产生系统性花叶症。在南瓜的花叶病标样中分离到的也是甜瓜花叶病毒,但是这个株系不同于典型的甜瓜花叶病毒,因为它们都不侵染西瓜。从黄瓜花叶病标样中分离出来的病毒全属于黄瓜花叶病毒种羣(GMV),其中可能有不同的株系,而秋黄瓜上却分离出了一个毒原,不侵染心叶菸,系统侵染普通菸和毛叶菸,在蔓陀蘿叶上产生局部枯斑而具有较高的致死温度(85℃)。作者认为这可能是一个新单元,称之为秋黄瓜花叶病毒(ACMV)。所有在甜瓜,哈密瓜及绞瓜上分离出来的毒原都是属于典型甜瓜花叶病毒的,但梢瓜(即白瓜)上的毒原都是黄瓜花叶病毒(CMV),没有广州报告的白瓜花叶花病毒。丝瓜花叶病的分离物类似甜瓜花叶病毒,但寄主范围远较狭隘,很可能是一个甜瓜花叶病毒的新株系。     

一种引起花生严重矮化的黄瓜花叶病毒的(CMV)株系鉴定

 根据病毒生物学特性、颗粒形态和血清学性质,明确由山东泰安花生矮化病株上分离的一个病毒分离物为黄瓜花叶病毒(CMV)一个株系,并暂定名为CMV花生矮化株系(CMV-CS)。CMV-CS引起花生叶片显著变小,植株严重矮化以及蚜传效率低而不同于我国花生上流行比较普遍的CMV-CA株系。     

哈密瓜种子带毒率检测及带毒种子的热处理效果研究

 南瓜花叶病毒(SqMV)和西瓜花叶病毒二号(WMV-2)是严重侵染新疆哈密瓜的2种主要病毒。作者采用免疫电镜法(SSEM)和酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定了哈密瓜病瓜种子的带毒率,并对带毒种子进行了热处理,结果简报如下。     

引起哈密瓜坏死的两种病毒的分离及鉴定

 从哈密瓜早熟品种上分离到两种引起坏死症状的病毒,称为哈密瓜坏死病毒(HmNV)和哈密瓜叶脉坏死病毒(HmVNV),两者都能系统感染哈密瓜,影响植株滞长,但坏死的症状不同。HmNV可侵染葫芦科、豆科和茄科的14个品种,但是不侵染普通烟、苋色藜和千日红。T.D.P.75~85℃,D.E.P.10^-5~10^-6,L.I.V.7天。提纯的HmNV含有两种球形粒子,直径约为24毫微米和16毫微米,沉降常数为114S和73S。A₂₈₀/A₂₈₀比值为1.82,A₂₆₀/A₂₃₅比值为1.57。在琼脂糖双扩散试验中与烟草坏死病毒的抗血清发生沉淀反应,与甜瓜坏死斑病毒(MNSV)、黄瓜花叶病毒(CMV)和南瓜花叶病毒(SqMV)的抗血清无沉淀反应。根据这些性质,HmNV应是烟草坏死病毒的一个株系或是烟草坏死病毒组的一个成员。     

马来西亚某些蔬菜作物病毒病的发生情况

马来西亚辣椒、甜椒、番茄、茄子、菠菜和黄瓜病毒病发生情况调查表明:80%以上的辣椒感染花叶病,并导致辣椒减产。鉴定了9个辣椒病株标样,其中3个标样由辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,CVMV)单独侵染,其余为两种病毒复合侵染,CVMV 和黄瓜花叶病毒普通株系(CMV—O)、CVMV 和烟草花叶病毒番茄株系(TMV-t)、CVMV 和 CMV 的辣椒株系(CMV-C)复合侵染分别占标样数的2,2,1,1。甜椒病毒病的发生率低于辣椒(由于绝大部分甜椒在塑料大棚栽培的缘故),鉴定     

A-蛋白结合乳胶粒子的乳胶凝集试验检测植物病毒研究

用 A-蛋白结合乳胶粒子,再吸附烟草坏死病毒(TNV)抗血清中的免疫球蛋白 G(IgG),制成乳胶致敏抗体复合物。这种复合物可检测病株粗提液和部分提纯液中的 TNV,它们的灵敏度分别为1:4096和0.625微克/毫升。特异性强。该方法也适用于白三叶草花叶病毒(WCMV)、大豆花叶病毒(SMV)、苜蓿花叶病毒(AMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)等的检测试验。     

侵染紫松果菊的黄瓜花叶病毒分离物鉴定

从表现黄花叶症状的紫松果菊病株上获得分离物2-1-2,电镜下可见直径约30 nm的球状病毒粒体,其与黄瓜花叶病毒抗体呈强的阳性反应,ds-RNA的谱带类型与本实验室保存的标准黄瓜花叶病毒株系相同。通过生物学、病毒粒体观察、血清学以及病毒核酸双链试验结果,确定该病毒分离物为黄瓜花叶病毒。     

哈密瓜花叶病毒病的研究——Ⅰ、病原学

 1958年以来新疆哈密瓜由于花叶病毒的发生,使产量和含糖量严重降低。由病株分离出三种病毒,称谓哈密瓜病毒2、3和5。简称HMV2、HMV3和HMV5。     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测花生种子带毒的研究

 利用花生上分离到的花生轻斑驳病毒(PMMV),黄瓜花叶病毒CA株系(CMV-CA),花生矮化病毒Mi株系(PSV-Mi)所制备的抗血清,从中提取IgG、应用ELISA间接法检测花生种子,在花生种子中不程度地都检测出带有PMMV、CMV、PSV病毒,而且有复合带毒现象。经催芽的花生种子子叶、胚芽及胚根分别用PMMV和CMV免疫制备的抗体进行检测,花生的上述三部分均带有PMMV和CMV病毒,且胚芽中病毒量最高。萌发种子及未萌发种子的子叶无论从带毒率还是病毒含量上均看不出明显的差异。ELISA间接法由于直接利用商品酶标抗体,简化了试验程序,利于对种子带毒进行快速检测。     

香蕉花叶病的酶联免疫检测技术研究

 用分离自香蕉病株的黄瓜花叶病毒香蕉毒株(CMV-B)和烟草花叶病毒香蕉毒株(TMV-B)制备抗血清,其效价As-CMV-B为1:5000,As-TMV-B为1:8000。用这两种抗血清检测香蕉花叶病,间接ELISA和PAS-ELISA法可检测香蕉病叶汁液的最大稀释度均为1:1280,健叶汁液无非特异性反应,Dot-ELISA可检测病叶汁液的最大稀释度为1:640,健叶汁液在稀释度为1:20时有轻度非特异性反应。用间接ELISA法检测了田间香蕉病株和香蕉试管苗标样共158份,其中CMV的带毒率为58%,TMV的带毒率为19%,二者复合感染率为8.5%。